PLoS One: In vitro jellemzése Rapid citotoxicitása Rákellenes peptid HPRP-A2 membrános Destruction és intracelluláris mechanizmus ellen Gyomor Cancer Cell Lines

absztrakt katalógusa

Ebben a vizsgálatban HPRP-A2, szintetikus 15 tagú kationos peptidek minden D-aminosavakat, hatékonyan gátolta a túlélés a gyomor sejtvonalak dózis-függő módon. A gyomor daganatos sejtek elpusztítására által HPRP-A2 Tartalmaz egy gyors összeomlása a membrán integritásának és intracelluláris utakon. A propidium-jodid (PI) és a laktát-dehidrogenáz (LDH) vizsgálatokban igazolták, hogy egy órás kezelés HPRP-A2 vezetett membrán permeabilitás változásait BGC-823 sejtekben dózistól függő módon. Sőt, HPRP-A2 által kiváltott apoptózist BGC-823 sejtek jár jelentős növekedés a reaktív oxigén (ROS), kaszpáz-3, -8 és -9 aktiválása, a csökkentést a mitokondriális membrán potenciál (MMP), és a sejtciklus letartóztatás G1 fázisban. Amellett, hogy a benne rejlő citotoxicitást HPRP-A2 szinergizált erősen doxorubicinnel (DOX), hogy fokozza a hatékonyságát leölés gyomor tumorsejtek i N vitro katalógusa. Úgy véljük, hogy HPRP-A2 minden D-aminosavak lehet egy potens jelöltje daganatellenes terápiában, különösen a kombinációs terápia.

bevezető hivatkozás: Zhao J, Hao X, Liu D, Huang Y, Chen Y (2015 ) In vitro katalógusa jellemzése Rapid citotoxicitása Rákellenes peptid HPRP-A2 membrános Destruction és intracelluláris mechanizmus ellen Gyomor rákos sejtvonalak. PLoS ONE 10 (9): e0139578. doi: 10,1371 /journal.pone.0139578 katalógusa

Szerkesztő: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: július 2, 2015; Elfogadva: szeptember 15, 2015; Megjelent: szeptember 30, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Zhao et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír. katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány által támogatott Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 81373445, YXC és No. 21442001, YBH) és a Természettudományi Alapítvány Jilin tartomány (No. 20150101189JC , YC és No. 20140101042JC, YBH). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

elmúlt évtizedekben, bár áttörést értek el a rák kialakulásában terápiák, ellenállás és a nem specifikus toxicitása a hagyományos gyógyszerek még palacknyak kérdések lehetséges klinikai gyakorlat [1-3]. Ezért sürgősen szükség van, hogy dolgozzon új gyógyszerek különböző hatásmechanizmusú, amely képes leküzdeni a hiányosságokat a sok rendelkezésre álló gyógyszerek.

Jelenleg, a potenciális alkalmazási rákellenes peptidek (ACP), mint terápiás szerek a rák kezelésére progresszió több figyelmet, mint a hagyományos kemoterápia főleg azért, mert a következő tulajdonságokkal rendelkezik: (1) nagy specifitással. A pozitív töltésű peptidek szelektíven célzott ráksejtek hordozó negatív töltéseket, és különböző membrán komponensek normális sejtek [4, 5], (2) újszerű hatásmechanizmusát. Ez lehet elkerülni létre multidrog rezisztencia mechanizmusok [5-7]; (3) szinergikus rákellenes hatást kemoterápiás. Leírták, hogy bizonyos ACP képes szinergetikus daganatellenes aktivitást, amikor kombinált használata a különböző hagyományos rákellenes gyógyszerek [8-10].

Az általános mechanizmust peptid által indukált sejthalál citoplazma membrán megzavarása keresztül micellaképződés vagy pórusképződés , bár néhány ACP jelentik, hogy apoptózist indukálnak a halál receptor útvonal és /vagy a mitokondriális út [8, 11]. Sőt, a pórusképződést a sejtmembránon és a változás a membrán permeabilitás nyújthat egy jobb csatorna a belépési egyéb rákellenes szerek a sejtekbe, és fokozzák a rákellenes tevékenységet [8, 12].

korábbi tanulmány bebizonyította, hogy HPRP-A2 indukálhatja a sejthalált, és ezzel egyidejűleg a fokozott DOX /epirubicin (EPI) -indukált apoptózis HeLa és HepG2 sejtvonal [12]. Ezen kívül, mivel a D-aminosav-összetétel, HPRP-A2 ellenáll a proteolitikus hasítás, és megtartja egyenértékű rákellenes tevékenységet annak L enantiomerek [6, 12]. Alapján a korábbi tanulmányok arra törekszünk, hogy véghez két cél ebben a vizsgálatban: felvázolni a mögöttes rákellenes mechanizmusának HPRP-A2 és vizsgálja meg a szinergikus rákellenes hatást BGC-823, SGC-7901 sejtek kombinálva HPRP-A2 DOX.

anyagok és módszerek

sejtvonalak és sejttenyészet

emberi gyomor rákos sejtvonalak BGC-823, SGC-7901 kaptuk az American Type Culture Collection, amely hitelesíti a sejt vonalak a rövid tandem ismétlődő DNS-vizsgálat, használtunk 6 hónapon belül az újraélesztés és DMEM magzati borjúszérummal (FBS; 10% v /v), penicillinnel (100 U /ml) és sztreptomicin (100 U /ml) nedves atmoszférában 37 ° C hőmérsékleten, 5% CO _2.

peptidszintézis és tisztítása

a peptidet a szilárd-fázisú peptid-szintézis Fmoc (9-fluorenil -methoxycar-karbonil) Kémia korábban leírtak szerint [13]. További jellemzés volt kimutatható tömegspektrometriával és aminosav-analízis. DOX-HCI-ben vásárolt Meilun Biology Technology Co., Ltd. (Dalian, Kína). Katalógusa

Cell életképességi vizsgálatok katalógusa

BGC-823, SGC-7901 sejteket (5 x 10 ^{3) szélesztünk háromszoros ismétlésben, 96 lyukú mikrotiterlemezeken. Komplett tápközeg váltotta 24 óra elteltével 100 ul friss közeget különböző koncentrációban tartalmazó gyógyszerek. Az elegyet további 24 óra sejteket 3- (4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-2H-tetrazolium-bromid (MTT) 37 ° C-on 4 órán át. Ezt követően a dimetil-szulfoxid (DMSO) adunk hozzá, hogy feloldjuk a formazán kristályok és az abszorbanciát 492 nm-en mértük mikrolemez leolvasó (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Shandong, Kína). Jin képletet alkalmazzuk, hogy tovább számszerűsíteni a szinergetikus hatást a kombinációs kezelés a HPRP-A2 és DOX. A képlet a következő: Q = Ea + B /(Ea + EB-Ea × EB), ahol Q a kombinációs index; Ea + b jelentése a sejtproliferációs gátlási arányt a kombinált gyógyszer; Ea és Eb jelei a sejtproliferációs gátlási arányt minden egyes gyógyszer. Miután a számítás: Q < 0,85, Q > 1,15 és 0,85 < Q < 1,15 jelzik antagonizmus, szinergia, és additív hatás, ill. [14] katalógusa}

A hemolízis aktivitás assay katalógusa

A hemolízis aktivitást elemzés végre a korábban ismertetett módon [13]. Ahhoz, hogy a vörösvértestek, friss emberi vért stabilizált EDTAK centrifugáltuk 1000 rpm-en, 5 percig, kétszer mossuk PBS-sel és hígítottuk a végső koncentráció 2% PBS-ben. 70 pl 2% humán eritrocitákat adunk egy kerek-aljú, 96 lyukú lemez, majd 70 ul különböző koncentrációjú HPRP-A2. Az inkubálást 37 ° C-on 1 órán át, A lemezt ezután centrifugáltuk 3000 rpm-en 10 percig, és 90 | il felülúszót átvittük egy lapos fenekű, 96 lyukú lemezen. A kiadás hemoglobin mérésével határoztuk meg az abszorbancia a felülúszó 540 nm-en. Eritrociták PBS-ben és desztillált vízben (DH _{2 O) alkalmaztunk pozitív és negatív kontrollok, ill. A hemolitikus aktivitást számítottuk ki a százalékos kísérleti csoport és a pozitív kontroll, levonása után a negatív kontroll volt. Az adatok átlag ± SD-három független kísérlet során.}

PI assay

BGC-823 sejteket (1 x 106 sejt /üreg) oltottuk hat-üregű lemezeken. Inkubálás után HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 órán, a sejteket összegyűjtjük, és ezután 5 ng /ml PI-4 ° C-on 10 percig a sötétben. A sejteket PBS-sel mostuk háromszor, majd érzékeli a fluoreszcencia intenzitását PI segítségével áramlási citometriával (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

LDH felszabadulást

LDH felszabadulást aktivitást mértük LDH vizsgálati kit (Jiancheng Bioengineering, Ltd., Kína) szerint a gyártó utasításainak megfelelően. BGC-823 sejteket ültettünk 5 × 10 ^{3 sejt /lyuk 96 lyukú lemezen. Inkubálás után HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 órán, a kibocsátás a LDH a felülúszóban mértük mikrolemez leolvasó (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Ltd. Shandong, Kína) ba 450 nm-en. A sejteket kezelés nélkül, vagy lizált Triton X-100-t alkalmaztunk negatív és pozitív kontrollokat, ill. Minden kísérletet végeztünk háromszoros ismétlésben. LDH aktivitást számítottuk a százalékos kísérleti csoport és a pozitív kontroll, levonása után a negatív kontroll volt.}

ROS assay

ROS assay kit (BestBio, Co. Shanghai, Kína) alkalmaztunk a érzékeli a reaktív oxigéngyökök termelését. A sejteket (1 x 106) kezeltük HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 órán át. Az ezt követő eljárások szerint végeztük a gyártó utasításai szerint. Röviden, a sejteket emésztettünk tripszinnel centrifugáltuk 1500 rpm-en, 3 percig, háromszor mossuk PBS-sel, majd szuszpendáljuk 500 ul PBS-ben. Inkubálás után a 2 ', 7'-dichlorofluorescin diacetát (DCFH-DA) fluoreszcens próba 20 percen át 37 ° C-on, a sejteket PBS-sel mostuk, három alkalommal, és kimutatható a zöld fluoreszcencia intenzitása (a GEOMEAN) áramlási citometriával. A zöld fluoreszcencia intenzitás pozitív korrelációt mutatott a szintje ROS. Katalógusa

mérése MMP katalógusa

MMP határoztuk meg a mitokondriális membránpotenciál assay kit 5,5 ', 6,6'-tetraklór -1,1 ', 3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine jodidot (JC-1), amely egy próba a mitokondriális aktivitás (BestBio, Co., Shanghai, Kína). JC-1 mindig kimutatására használják mitokondriális depolarizáció előforduló korai szakaszában apoptózist. Amikor a sejtek magas MMP, JC-1 gyűlt össze a mitokondriális mátrixban, alkotó J-aggregátumok és előállítására vörös fluoreszcencia. Ezzel tartalmazó sejteket JC-1 monomer monomer monomermonomer alacsony MMP és mutassa zöld fluoreszcencia. Mitokondriális depolarizáció úgy határoztuk meg, csökkent a vörös (590 nm, FL-2 csatorna) /zöld (530 nm-en, FL-1 csatorna) fluoreszcencia intenzitásának aránya. Röviden, kezelés után HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 órán BGC-823 sejteket összegyűjtöttük, és inkubáltuk 0,5 ml JC-1 munkaoldatot 20 percen át 37 ° C-on, majd kétszer mossuk PBS-sel, PBS-ben szuszpendáljuk, és áramlási citometriával elemezzük (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

Caspase-aktivitás assay

a sejteket HPRP-A2 (10, 15 uM) 24 órán át, majd szintjeit kaszpázaktivitásokat mértük a megfelelő kaszpáz aktivitást detektáló készletek (BestBio, Co., Shanghai, Kína) szerint a gyártó utasításainak megfelelően. Átlagos adatok bemutatása az átlag ± SD legalább három független kísérlet során.

cell cycle analysis

BGC-823 sejteket (1 × 10 ^{6) oltottunk 6 mérőhelyes lemezeket 24 órán át. Való indukció után HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 24 órán, sejtciklus eloszlása ​​úgy határoztuk meg, egy FACScan citométer és Cell Quest szoftver (FACS Calibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA). Minden kísérletet háromszoros ismétlésben.}

Statisztikai analízis

Az adatokat átlag ± SD három független meghatározás. Statisztikai jelentősége csoportok közötti különbségeket elemezzük t katalógusa próba, szignifikancia elfogadott P katalógusa < 0,005 (*) és a P katalógusa < 0,001 (**).

Eredmények

Peptid és citotoxicitás

Amint azt az 1. ábra, a peptid HPRP-A2 egy 15 maradék α-helikális amfipatikus membrán-aktív peptid álló összes D-aminosavat. Összehasonlítva a szelektív toxicitását HPRP-A2 felé gyomorrák-sejtek és a normális sejtek (humán vörösvérsejtek), akkor könnyen találják, hogy az IC _{50 (a hatóanyag koncentrációja, amelynél a sejtek életképességét ben 50% -kal csökkent, összehasonlítva a kezeletlen sejtek) értékei jóval kisebb, mint a minimális hemolitikus koncentráció (a hatóanyag koncentrációja, amelynek eredményeként 20% -os sejt hemolízis) a HPRP-A2. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy HPRP-A2 képes szelektíven elpusztítani a gyomor rákos sejteket, és megkíméli a normál sejtek (2. és 3. ábra). Hasonló rákellenes tevékenységét a két sejtvonal (BGC-823, SGC-7901) azt mutatták, hogy a széles spektrumú hatást a rákellenes hatását HPRP-A2. Adódóan membránhoz aktív jellegzetes, HPRP-A2 mutatja a rákellenes terápiás potenciállal, mivel ez több szelektíven toxikus felé tumorsejtek, mint a normál sejtekben.}

HPRP-A2 indukált javítására membrán permeabilitás

Annak érdekében, hogy ellenőrizze a változás a membrán permeabilitás inkubálás után HPRP-A2, a celluláris felvételét a PI és extracelluláris felszabadulását LDH vizsgáltuk áramlási citometriával és mikrotiterlemez-leolvasó felé BGC-823 sejtekben. Amint az a 4. ábrán, az áramlási citometriás grafikonok a PI mozog fokozatosan az irányt a magas fluoreszcencia intenzitása egy koncentráció-függő módon, és a fokozott felszabadulása LDH is megfigyelhető volt a sejteket inkubáltuk HPRP-A2. Azaz, HPRP-A2 okozhat kárt a sejtmembrán és az eredmény a javítása sejtmembrán áteresztőképességét. Katalógusa

HPRP-A2 okozott károk a mitokondriális funkció katalógusa

A sejten belüli reaktív oxigén (ROS) kiadás és a mitokondriális membránpotenciál (MMP) észleltek FACS, hogy tükrözze a mitokondriumok működését BGC-823 sejtek in vitro katalógusa. Ábrán látható 5A, az áramlási citometriás hisztogramját a inkubált sejtek nagyobb koncentrációban HPRP-A2 feltárta magasabb fluoreszcencia intenzitás inkubálás után 1 órán át. A megfelelő áramlási citometriás mennyiségi összehasonlítására fluoreszcencia intenzitás GEOMEAN ezekben a különböző koncentrációban hasonló tendenciát mutattak, nevezetesen, hogy a megnövekedett felszabadulását ROS BGC-823 sejtek jelenlétében HPRP-A2 volt koncentrációfüggő. Hasonló koncentráció-függő változó trend is megfigyelhető volt, ábra 5B, az arány a FL2-H /FL1-H jelentősen csökkent, jelezve a depolarizációs MMP.

kaszpáz-aktiválás és a sejtciklus elemzési

kaszpáz-3, -8 és -9 a HPRP-A2-indukált sejtek alkalmazásával mértük mikrolemez-leolvasóval 405 nm-en. Ábrán látható 5C, a kaszpáz-3, -8 és -9 mind fokozott kezelés után HPRP-A2 24 órán BGC-823 sejtekben, ami arra utal, hogy az apoptózis indukciója a HPRP-A2 lehet kaszpáz-függő . Amint azt a 6. ábra, BGC-823 sejteket kezeltünk a különböző koncentrációjú HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 24 órán eredményezte növekedésének al-G1 leállást és a G1 leállítását. Ezek a megállapítások is megerősítette a fokozott kaszpáz-3 aktivitás a kezelés után a HPRP-A2.

HPRP-A2 által kiváltott növekedés a DOX citotoxicitás

BGC-823, SGC-7901 sejteket választjuk meg, hogy tanulmányozza a szinergikus rákellenes hatását HPRP-A2 és a kemoterápiás gyógyszer DOX. A sejteket kezeltük HPRP-A2 (6 mM) és /vagy a Dox (1,6 ng /ml), 4, 24 és 48 óra. MTT assay-ket használni, hogy értékelje az összetett rákellenes hatását a sejtekre. A hatóanyag-koncentráció kiválasztott ebben a vizsgálatban alapultak IC _{50 értékek minden egyes hatóanyag önmagában. Nem volt nyilvánvaló citotoxicitás vagy növekedés csökkenés, amikor mindegyik gyógyszert alkalmaztuk egyedül. Ezzel szemben, amikor használják a peptid /hatóanyag-kombinációk (HPRP-A2 /DOX) ugyanabban a dózisban is használható önmagában, a kombináció mutatott szignifikáns citotoxicitást (7. ábra). Az is világos, hogy a rákellenes aktivitását HPRP-A2-t nem érinti jelentősen a az inkubációs idő; Ezzel ellentétben, a növekedés inkubációs idő 48 óra, DOX mutatja sokkal nagyobb rákellenes aktivitást, mint a 4 óra, jelezve a drámaian különböző hatásmechanizmusú között ACP és a kemoterápiás gyógyszer. Szerint a Jin képlet, mind a Q (kombinációs index) értékeket nagyobb, mint 1,15, ami azt jelzi, hogy nem volt szignifikáns szinergikus hatások közötti α-helikális peptid HPRP-A2 és a hagyományos rákellenes gyógyszer DOX a BGC-823, SGC-7901 sejtek .}

Vita katalógusa

Rákellenes peptidek (ACP) nemrégiben kapott nagy figyelme ígéretes kemoterápiás szerek, amelyek elkerülik a hátrányaival gyógyszerek. Számos tanulmány igazolta, hogy néhány szintetikus és természetes kationos peptid rendelkezik a gyors és széles spektrumú rákellenes aktivitás felé tumorsejtek helyett a normál sejtek, mint például humán vörösvérsejtek [4, 15]. Sőt, ACP is igazolta, hogy képesek legyőzni a multidrog-rezisztencia mechanizmus, és szinergikus hatások kombinált kezelés [11].

HPRP-A2 rendelkezik a gyors és széles spektrumú rákellenes aktivitást, azonban néhány különbség is előfordulhat az érzékenysége a HPRP-A2 a különböző sejtvonalakon. Alapján a különböző IC _{50-értéke HPRP-A2 BGC-823 (8,65 ± 0,38 nM), SGC-7901 (10,42 ± 0,30 nM), PC3 (21,38 ± 0,56 nM) és B16 (19,16 ± 0,38 nM ), úgy döntöttünk, BGC-823, SGC-7901 sejtek kutatási célokat. Emellett a rákellenes tevékenységét HPRP-A2 más rákos sejtvonalak, például HeLa és HepG2 tettek közzé az előző tanulmányban [12]. Mindkét BGC-823, SGC-7901 sejtek tartoznak gyomor sejtvonalak, így kiválasztottunk BGC-823 példáján vizsgálja a rákellenes mechanizmusának HPRP-A2 in vitro katalógusa.}

Ebben a vizsgálatban kimutattuk, hogy HPRP-A2 egy amfipatikus α-helikális peptid jelentős rákellenes aktivitással BGC-823, SGC-7901 sejtvonalak. Vizsgálataink azt mutatták, hogy HPRP-A2 mutatott rákos-szelektív toxicitás, főleg azért, mert hogy a rákos sejtek állnak több anionos foszfolipidek, és tartalmaznia O-glikozilált mucin, ami növeli a negatív töltés a rákos sejt felszínén [16, 17]. Sőt, inkább microvilli a rákos sejtek koncentrációjának növelésére kötő peptid által bővül a membrán felületén, és ezáltal azt mutatják, erősebb citotoxicitást a rák elleni sejtmembránok [11, 18].

ACP képesek károsító sejtmembrán, amely okozhat sejtmembrán permeabilitása megváltozik. Ebben a vizsgálatban, a változás a BGC-823 sejtmembrán volt megfigyelhető detektálásával PI-permeabilizálás és LDH felszabadulást. A fokozatos emelkedése a PI permeabilizálás és LDH felszabadulást vannak koncentráció-függő módon, miután a kezelés HPRP-A2. Sőt, HPRP-A2 által kiváltott sejthalál kapcsolatban van a generációs reaktív oxigén, a depolarizáció MMP, az aktiválás a kaszpáz tevékenységek és a blokk G1 fázisában sejtciklus.

Amellett, hogy a citotoxicitása HPRP-A2, bebizonyítottuk, hogy ez növelheti a hatékonyságát DOX ellen BGC-823, SGC-7901 sejtek, ami összhangban van a korábbi tanulmány. Korábbi vizsgálatunkban, az általunk feltárt összetett rákellenes terápia α-helikális peptidek HPRP-A1 és A2 HPRP-a kémiai gyógyszerek DOX és EPI HeLa és HepG2 sejtvonal [12]. A szinergia látható megengedi felhasználása viszonylag kis koncentrációban peptidek és gyógyszereket ahhoz, hogy jelentős rákellenes hatása in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Ez a dózis csökkentésére minimalizálja gyógyszer mellékhatások a normális sejtekre, és lehetővé teszi a hatékony apoptosis által mediált rákellenes hatást. A jelen vizsgálat, hatással van, hogy a HPRP-A2 válhat ígéretes rákellenes terápiás szer nagy rákellenes szelektivitással és erős szinergetikus hatást a kombinációs terápiában. Vizsgálataink elsősorban szemléltetik a mechanizmus a HPRP-A2-indukált sejthalál és hasznos lehet a Design of kemoterapeutikumok ellen gyomor sejtvonalakban.

Következtetések

HPRP-A2 mutat erős rákellenes aktivitást BGC- 823, SGC-7901 sejtvonalak és alacsony toxicitása ellen emberi vörös vérsejtek. HPRP-A2 által kiváltott daganatos sejthalál keresztül mind a közvetlen membrán-romboló hatás és a sejten belüli mechanizmusok, beleértve egy drámai növekedése kaszpáz-3, -8 és -9 aktiválása, a csökkentést a mitokondriális membrán potenciál (MMP), és a reaktív oxigéngyökök termelését és sejtciklus G1. Emellett HPRP-A2 szinergizált erősen DOX, hogy fokozza a hatékonyságát leölés gyomor tumorsejtek in vitro katalógusa. Eredményeink alátámasztják a széles rákellenes potenciálját HPRP-A2 és megmagyarázni hatásmechanizmusát. Úgy véljük, hogy lássuk ACP hatékonyabb és tumor-célzást tulajdonságok nyit új utakat a rák elleni küzdelemre sikeresen. Katalógusa

• PLoS One: belüli tumor heterogenitása HER2 FGFR2, cMET és ATM gyomorrákban optimalizálása személyre szabott egészségügyi innovatív Patológiai és statisztikai elemzés
• PLoS One: számszerűsítése a jód tartalma perigastricus zsírszövet által Dual-Energy CT: új eljárás a preoperatív diagnózis T4-Stage gyomorkarcinóma