PLoS ONE: Ekspresija EGF obitelji u rak želuca: silazni HER4 i njegova Aktivacija liganda NRG4

Sažetak pregled

Rak želuca je glavni uzrok smrti od raka povezanih u oba muškaraca i žena. Receptori epidermalnog faktora rasta su EGFR, HER2, HER3 i HER4. Od četiri receptora epidermalnog čimbenika rasta, EGFR i HER2 su dobro poznati onkogen uključeni u raka želuca. Malo je, međutim, zna o ulozi koju HER3 i HER4 u ovoj bolesti. Dobivena se paru uzoraka iz tumora i susjednog normalnog tkiva od istog pacijenta koji operacije raka želuca. Primjenom RT-qPCR, kvantitativno smo ekspresiju mRNA od četiri receptora, uključujući HER4 razdvajanje izoforme i sve liganada koji aktiviraju ove receptore. Pomoću imunohistokemije, protein ekspresija HER4 također kvantificirati. Otkrili smo da HER2 mRNA je reguliran u tkivu tumora u usporedbi s odgovarajućom normalnog tkiva (p = 0.0520). Svi ligandi s afinitetom za EGFR je upregulated, dok je ekspresija EGFR je nepromijenjen. Zanimljivo, našli smo ekspresiju mRNA HER4 (p = 0,0002) i njegov ligand NRG4 (p = 0.0009) koja se regulirani u tkivu tumora u usporedbi s odgovarajućom normalnog tkiva. HER4 regulacija pokazana sve alternativno izrezanih izoforme tog receptora u. Ovi rezultati podupiru uključivanje EGFR i HER2 u raka želuca i predložiti zanimljivu povezanost smanjene ekspresije HER4 s razvojem raka želuca pregled

Izvor:. Nielsen NA Friis-Hansen L, Poulsen SS, Federspiel B, Sorensen BS (2014) Ekspresija EGF obitelji u rak želuca: silazni HER4 i njegova aktiviranjem liganda NRG4. PLoS ONE 9 (4): e94606. doi: 10,1371 /journal.pone.0094606 pregled

Urednik: Rupesh Chaturvedi, Vanderbilt University School of Medicine, United States of America pregled

Primljeno: 8. srpnja 2013; Prihvaćeno: 19. ožujka 2014; Objavljeno: 11. travanj 2014 pregled

Copyright: © 2014 Nielsen et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Danish Cancer društvo # R2-A247-09-S2, Danski MRC #FSS 09072153. u financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, odluka o objavi, ili pripremu rukopisa

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi. pregled

Uvod pregled

rak želuca je treći vodeći uzrok smrti od raka povezanih u muškaraca i peti vodeći uzrok u žena. Rak želuca iznosio oko 990.000 novih registriranih slučajeva i 738,000 smrtnih slučajeva u svijetu u 2008. [1]. Infekcija s Helicobacter pylori pregled, prehrana, pušenje i konzumacija alkohola su glavne determinante koje utječu na rizik od dobivanja raka želuca [2], [3]. Pregled

epidermalni faktor rasta (EGF) obitelj složena mreža receptora tirozin kinaze i liganada u interakciji da izazove razne signalne kaskade. Obitelj uključuje četiri receptora EGFR (HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (erbB3) i HER4 (erbB4) [4]. Naizmjeničnim spajanjem, HER4 izražava u brojnim izoformi. U juxtamembraneous području HER4, uključivanje bilo eksona 15b ili eksona 16 rezultata u JMA ili JMB izoforme, odnosno [5] - [7]. JMA izoforma ne JMB izoforma može se obraditi kako bi se oslobodio topljivi HER4 unutarstanične domene (ICD) lokaliziranja u citoplazmi, jezgru, te mitohondriji [8], [9]. Alternativni srastanje u citoplazmatski regiji HER4 dovela do CYT1 i CYT2 izoformi. Preskakanje od eksona 26 rezultira receptora (CYT2) kojima nedostaje 16 aminokiselina receptora pune dužine (CYT1) [10]. Pregled

liganda EGF porodice su epidermalni čimbenik rasta (EGF), transformirajući faktor rasta (TGF-a-a), i amfiregulin (Ar) koji su specifični za EGFR; heparin-vezujući EGF-sličan faktor rasta (HB-EGF), betacelulin (BTC) i epiregulin (EPR), koji se vežu kako EGFR i HER4; neuregulin 1 (NRG1) i NRG2 koje vežu oba HER3 i HER4; i na kraju NRG3 i NRG4 koji su specifični za HER4 [11]. Kada se vežu aktivirajući ligand, receptori bi homo- i hetero-dimere. Sastav dimerizacija partnera i aktiviranje liganada određuje signal da se transduced unutar stanice [12], [13]. Obitelj EGFR igra različite uloge u rastu i održavanju brojnih tkiva, između ostalog regulira staničnu diobu, apoptoza, diferencijaciju i migracija. Deregulacija signalizaciju iz ovog sustava priključen na rast i razvoj raka [14] - [17] pregled

EGFR i HER2 su poznati onkogeni u rakom želuca [18], [19].. Inhibirajućeg trastuzumab protutijela HER2 uspješno povećava prognozu kada se dodaju u kemoterapija u bolesnika s HER2-pozitivnim napredne želučanog raka [20]. Niz kliničkih ispitivanja također su provedena za testiranje iskoristivosti inhibitora EGFR u rakom želuca [21], [22]. HER3 i HER4 potencijalno biti važan u nastanku karcinoma želuca; Međutim, podaci o njihovim ulogama u ovoj bolesti je rijedak. Doista, malo se zna o ekspresije kompletnog EGF sustava. Zbog interaktivne prirode EGF receptora i liganda, pojašnjenje mehanizama regulacije EGF članova obitelji zahtjevima s obzirom na sve receptora i njihovih liganada zajedno. Pregled

Kako istražiti ekspresije EGF receptora i liganda u karcinomu želuca, dobivene iz tkiva tumora i susjednog normalnog tkiva od istog pacijenta koji operacije raka želuca. Koristili smo u paru uzorke tkiva kako bi se osigurala protiv inter-individualnih varijacija koja postoji u osnovnom izrazu EGF sustava. Primjenom RT-qPCR, kvantitativno smo ekspresiju mRNA za četiri EGF receptora, uključujući HER4 razdvajanje izoforme i liganada koji aktiviraju ove receptore. Pregled

Materijali i metode

Izbor pacijenata i prikupljanje biopsija

u ovoj skupini studiji, 38 pacijenata koji se podvrgavaju operaciji za adenokarcinoma želuca, jednjaka ili gastroezofagealnog spoja uzastopno bili uključeni od srpnja 2008. do studenog 2009. Svi pojedinci uvjetom informirani pismeni pristanak. Zbirka biopsija je odobren od strane regionalnih znanstvenih etičkih povjerenstava Zeland, Danska (broj časopisa H-B-2008-049), te uspostava biobank je odobren od strane Agencije za danski zaštiti podataka (časopis broj 2008-41-2138). Biopsije su uzeti su od tumorskom tkivu i susjednog normalnog tkiva. Svi uzorci biopsije su pregledani od strane iskusnog patologa za provjeru valjanosti dijagnoze. Unaprijed definirani klinički podaci su iz medicinskih karata i patologija izvješća. Klinička obilježja bolesnika prikazani su u tablici 1. pregled

RNA ekstrakciju pregled

Biopsija su bili smješteni u RNK kasnije pregled (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) odmah nakon uklanjanje. RNA kasnije pregled uklonjena prije izolacije RNA, i doda Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Uzorci tkiva su homogenizirani na Tissuelyser (Qiagen, Chatsworth, CA, USA). RNA iz tkiva je izolirana prema proizvodnji protokola za izolaciju Trizol RNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Koncentracija RNA mjereni su na NanoDrop ND-1000 spektrofotometar. Kvaliteta RNA testirana je na 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) prema protokolu proizvođača. pregled

reverzne transkripcije lančana reakcija polimeraze (kvantitativni RT-q-PCR)

cDNA je sintetiziran od 1 ug ukupne RNA pomoću visokog kapaciteta cDNA reverznom transkripcijom Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Konačna reakcijska smjesa je razrijeđena do ukupnog volumena od 200 ul pregled

1 ul cDNA je korišten za qPCR pomoću SYBR Green master mix (Roche, Basel, Švicarska) u Roche lightcycler 480 u. 95 ° C, 10 min; 50 ciklusa od 95 ° C tijekom 10 sekundi, određenu temperaturu žarenja za 10 s, 72 ° C tijekom 5 sekundi; 99 ° C od 1 sek; 59 ° C tijekom 15 sec; 95 ° C tijekom 1 sekunde; se ohladi na 40 ° C. Primer sekvence i temperature žarenja su dane u tablici 2. pregled

Gen najbolje odgovara za normalizaciju je određena primjenom Normfinder algoritma [23] na quantified koncentracija GAPDH, P-aktin, YWHAZ, SDHA i HMBS , SDHA ispostavilo se da je najbolji od pet. Dva uzorka bili su isključeni iz analize zbog ne otkrivanje mRNA iz bilo kojeg od referentnih gena. Pregled

Imunobojanje

parafin-ugrađen tkiva fiksirani u 4% ublaživač formaldehidom od 13 reprezentativnih bolesnika ispitivanih strane imunohistokemijski pomoću C-erbB-4 /HER-4, zec poliklonskim antitijela razrijeđena 1/50 kao primarnim protutijelom (RB-9045-P1, Thermo Scientific, Wilmington, DE, USA). Za pronalaženje sekcije antigen su kuhani u mikrovalnu pećnicu na 10 mM citratni pufer, pH 6.0. Immunoreaction je vizualizirana biotiniliranog kozjeg anti-zečjeg antitijela razrijeđenog 1/200 (BA-1000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), a zatim formiranog avidin biotinilirani peroksidazom hrena makromolekulski kompleks (ABC) razrijeđena 1/100 (šifra Nr. PK-4000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Reakcija je razvijena korištenjem 3,3 diaminobenzidinu i counterstaining izvedena s Mayerovim Hemalum. Kao negativna kontrola, isti postupak se provodi bez primarnog antitijela. Pregled

Upotreba Image Pro Plus (MediaCybernetics) intenzitet bojenja reprezentativnih slika tumora u odnosu na okolno tkivo sluznice procijenjen. Dvije slike uzorka tumora i dvije slike na okolne sluznice prikupljeni su od svakog uzorka tkiva i izračunata je prosječna vrijednost od dvije vrijednosti i koristi se za statističku analizu i crtanje. Za nekoliko uzoraka, samo tumorsko tkivo ili samo normalna sluznica je bio prisutan i nije usporedba HER4 izraza je moguće da ta tkiva. Parni t-test je korišten kako bi se utvrdilo je intenzitet tumorskih tkiva bio je drugačiji od intenziteta sluznice tkiva. Pregled

Rezultati

mRNA EGF receptora u rak želuca Netlogu

RNA ekstrahirana iz 38 tumora i sparenih uzoraka iz susjednog normalnog tkiva od bolesnika podvrgnutih operaciji za rak želuca korišten je za RT-qPCR kvantifikacijama. Ekspresija mRNA od četiri EGF porodice receptora EGFR, HER2, HER3 i HER4 je prikazan na slici 1. Zanimljivo je HER4 receptor se podvrgne smanjenom u kancerozno tkivo u usporedbi sa normalnim tkivom (p = 0,0004). Za HER2, vidjeli smo reguliranje prema ovom receptora u kancerogenog tkiva koji je bio vrlo blizu da bude značajna (p = 0,0520). EGFR i izraz HER3 mRNA je UN-promjena u tumorima u odnosu na normalno tkivo. Pregled

HER4 postoji kao različite alternativno izrezane izoforme. Juxtamembranous regija može se sastojati od bilo JMA ili JMB, a citoplazmatski regija može se sastojati od bilo CYT1 ili CYT2. Podreguliranje promatraju ukupni izražavanja HER4 mRNA u kancerogenog tkiva primjenjuju se na sve četiri varijante receptora (slika 2). Pregled

Da bi bolje ilustrirao veličinu HER4 smanjenom u tumorskom tkivu, što je planirao HER4 na dolje ili regulaciju za svakog pojedinog pacijenta. Izraz HER4 mRNA u tkivima tumora minus ekspresiju HER4 mRNA u skupini zdravih tkiva (ΔHER4) prikazan je na slici 3. vrijednost ispod 0 predstavlja downregulation. Ova brojka jasno pokazuje da HER4 regulacija je vrlo općenita mehanizam koji se odvija u većini pacijenata i bez obzira na tumor lokalizacije. Pregled

mRNA obiteljskih liganda EGF u rak želuca pregled

TGF -α, amfiregulin, te EGF specifično vežu EGFR. Zanemarivoj razini ekspresije mRNA gena za EGF i u normalnom i tumorskom tkivu, te se stoga taj ligand ne smatra za daljnju analizu. TGF-α i amfiregulin bili su reguliran u kancerozno tkivo u usporedbi sa normalnim tkivom (slike 4a i b). HB-EGF, betacelulin i epiregulin imaju afinitet i za EGFR i HER4, i svi ovi ligandi su također doreguliran u kanceroznim tkivima (slike 4 C, D i E). Uzeti zajedno, to pokazuje da su svi EGFR-aktivirajući ligandi reguliran u tumorima. Pregled

Od neuregulins, NRG1 i NRG2 vežu i HER3 i HER4. Uočili smo bez promjene u ekspresiji bilo a ili varijante beta od NRG1 i NRG2 (brojke 4F, G, H i I). NRG3 i NRG4 samo vezati HER4. NRG3 nije prošao nikakve promjene u ekspresiji od normalne do kancerogenog tkiva (Slika 4J). Međutim, NRG4 je podreguliran u kancerozno tkivo u usporedbi sa normalnim tkivom (p = 0.0009) (Slika 4k). To pokazuje da su i HER4 i njegov specifični ligand NRG4 su dolje regulirana raka želuca. Pregled

Da bi bolje ilustrirao veličinu NRG4 smanjenom u tumorskom tkivu, nacrtane smo NRG4 na dolje ili povećanje ekspresije za svakog pojedinog bolesnika. Izraz NRG4 mRNA u tkivima tumora minus ekspresiju NRG4 mRNA u skupini zdravih tkiva (ΔNRG4) prikazan je na slici 5. pregled

S obzirom na sve pacijente koji pokazuju downregulation ukupnog HER4 u tumorskom tkivu, u 82% od tih NRG4 je i regulacija i 86% jednog ili više od EGFR dijeljeni ligandi (HB-EGF, epiregulin, betacelulin) se regulira prema gore. U 36% bolesnika s ukupnim HER4 silazni, sva tri od EGFR dijeli ligandi su regulira prema gore.

ekspresije proteina njezina imunohistokemijski Netlogu

Zbog post-transkripcijskih propisa, obrazaca ekspresije mRNA određuje RT-qPCR možda ne predstavlja ekspresije proteina uzorak. Kako bi se osiguralo da je uočeno smanjenje ekspresije HER4 mRNA u kancerogenog tkiva pacijenata s rakom želuca također odražava na razini proteina, proveli smo imunohistokemijskih bojanja parafinskog-ugrađen tkiva formalinom fiksna iz svih bolesnika uključenih u studiju. Pregled

Po kvantifikaciju bojenje intenziteta HER4 u reprezentativnim područjima tumor- i okolnog tkiva, pronašli smo tumorsko tkivo ima znatno manje intenziteta HER4 bojenja u odnosu na okolne normalne sluznice (p = 0,0029) (Slika 6) . pregled

Reprezentativni fotomikrografije u stainings prikazani su na slici 7. u normalnoj sluznici želuca postoji snažna HER4 immunoreaction (Slika 7a). Posebno bazalni dio citoplazme i stanične membrane epitelnih stanica na površini bočnom su snažno imunoreaktivne za HER4 (Slika 5. b). Također parijetalni stanice pokazuju vrlo jaku HER4 imunoreaktivnost (Slika 7 C i D). U sluznicu i mišića slojevi bili su negativni. U žljezdane strukture posebno parijetalni stanice pokazuju vrlo jaku HER4 imunoreaktivnost (slike 7 C i D). Negativne kontrole obavljaju bez primarnog antitijela rezultiralo bez mrlja. Pregled

U želučanog raka samo manje područja s tumorskih stanica imala pozitivan immunoreaction na HER4, i negativni tkivo tumora velikom kontrastu s obojenog normalne sluznice u susjedstvu u tumor (Slika 7). U središnjim dijelovima tkiva tumora gotovo sve stanice su u potpunosti negativna osim malih nakupina stanica koje su mogle biti različita obojenost membrane. Pregled

Rasprava pregled

Obitelj EGF sastoji se u interakciji mreža receptora i liganda koji se moraju razmatrati kao cjelinu, razumjeti regulaciju signalizacije u obitelji EGF. Odredili smo uzorak regulacija EGF porodice u tkivu tumora u bolesnika s karcinomom želuca, kao i uskladiti susjedne normalno tkivo iz istih pacijenata. pregled

smo našli signalizaciju potencijal EGFR biti reguliran u tkivu tumora kroz ranijim koracima svih EGFR aktiviranja ligandima u, i mi također otkrili povećanje ekspresije HER2 u tkivu tumora koji je bio vrlo blizu da bude značajna (p = 0,0520). To je u dobrom slaganju s postojećim podacima koji pokazuju da su i EGFR i HER2 su povezani s lošom prognozom u rakom želuca [19]. Važnost HER2 u raka želuca pokazana činjenicom da je HER2 inhibiciju protutijelo Herceptin je jedini odobreni sredstvo za ciljano tretiranje želučanog raka [24]. Pregled

HER3, nismo promatrati bilo izraæajni propis za razina mRNA. Međutim, nekoliko studija o HER3 u rak želuca pripisali ulogu za HER3 u raka želuca. HER3 je povezana s lošom preživljavanja i ekspresiju pozitivna HER3 protein je detektiran imunohistokemijom na 18,6% uzoraka raka želuca u usporedbi sa samo 2.0% od nontumorous uzoraka [25] - [27]. Nismo pronašli veću izraz HER3 karcinoma želuca u odnosu na normalno tkivo u našem istraživanju. Međutim, razlika u metodama koje se koriste u studijama (imunohistokemijski vs RT-qPCR) moglo objasniti neke razlike u rezultatima. Osim toga, bili smo u mogućnosti opisati uzorak regulacija u svakom pojedinom pacijentu, a ne u bazenu pacijenata oboljelih od raka, te bazen za kontrolu osoba, a to također može objasniti razlike u rezultatima dobivenim u dvije studije. Pregled

Pronašli smo značajno downregulation oba HER4 i njegovo aktiviranje ligand NRG4 u tumorskom tkivu. Naši rezultati su govori i činjenica da smo također našli downregulation kad smo se dodatne analize da se kvantificiraju određene izoforme HER4. Koristeći imunohistokemije utvrdili smo da normalno želuca tkivo pozitivno za HER4, dok kancerogeni tkivo ima vrlo nisku ili nikakvu HER4 bojenje. Pregled

smanjena ekspresija izražavanja HER4 mRNA u tkivu tumora može se pripisati smanjenja u broj stanica koje izlučuju HER4 ili do smanjenja HER4 izražavanja u svim HER4 stanica koje eksprimiraju u. Od naših imunihistokemijski stainings, uočavamo da je u želučanog raka samo manje skupine s tumorskih stanica imala pozitivan immunoreaction na HER4, dok je velika većina tumorskih stanica bila potpuno negativan. To ukazuje na to da je broj stanica koje izražava HER4 koja je smanjena u tumorima. Za razliku od tumorskog tkiva, normalno tkivo ima vrlo jak imunoloških na HER4. Zanimljivo, posebno sluz-stanice koje proizvode i klorovodične kiseline za proizvodnju tjemeni stanica koje eksprimiraju HER4 protein. Pregled

Uloga HER4 u kancerozne bolesti kontroverzna. Kod raka mokraćnog mjehura, RT-qPCR kvantificiranje HER4 i njegovih liganada pokazuje da HER4 je povezana s manjim preživljavanja. Posebno, ko-ekspresija HER4 zajedno s specifični ligand, NRG4, visoko korelirana s bolje preživljavanje [28]. Isto tako, HER4 je povezan s općenito bolje i bez bolesti opstanak u raka vrata maternice [29]. U grkljana karcinom pločastih stanica, HER4 je izgubljen u kasnim tumora stage [30], i HER4 se uglavnom nalaze u low-scenskih i ne-metastatskih ksenografta tumora raka gušterače [31]. Pregled

S druge strane, HER4 ekspresija proteina određen imunohistokemijski je povezan s distalnim metastazama i smanjenog preživljavanje u oralnim karcinomi skvamoznih [32]. U studiji raka debelog crijeva u kojem je ekspresija proteina uzorak je također određena imunohistokemijom, u ranoj fazi bolesnici imali su niži postotak HER4 prekomjernom ekspresijom nego kasni stupanj pacijenata [33]. U maligne bolesti središnjeg živčanog sustava, HER4 posjeduje i tumorski aktivirajuće ulogu [34], [35]. Pregled

nije mnogo zna o ulozi HER4 u raka želuca. Ne izraz HER4 mRNA je otkrivena u dva želuca staničnim linijama karcinoma [36]. HER4 ekspresija proteina kao detektiran imunohistokemijom je utvrđeno da je u korelaciji s ranom stadiju, niži stupanj, i u odsutnosti metastaze u limfnim čvorovima rakom želuca [25]. To je u vrlo dobrom dogovoru s drugog studija koji se ispituje Gene Expression profile dugoročnih preživjelih od metastatskog karcinoma želuca liječe kemoterapijom, u kojem su autori ukazali na moguću ulogu HER4 ranijim koracima u tih bolesnika [37]. Zajedno sa sadašnjim rezultatima, ti podaci dalje pokazuju da HER4 signalizacije ima zaštitnu funkciju od karcinogeneze u želučanom regiji. Jedno istraživanje je utvrdio HER4 gen koji se često pojačan u rakom želuca [38]. Međutim, rezultati naših istraživanja ukazuju na to da se to ne prevodi na razinu HER4 ekspresije jer smo našli silazni HER4 mRNA i proteina, a ne regulacije. Pregled

Iako nismo pronašli ekspresiju EGFR biti regulirano je signalizacija potencijal kroz ovaj receptora povećava se razina ekspresije svih njegovih liganada. To uključuje liganada dijeliti s HER4: HB-EGF, betacelulin i epiregulin. Osim autokrinim aktivacije EGFR, regulaciju ovih liganada potencijalno rezultira povećanom aktivnošću HER4. Aktiviranje EGFR puta je zaista način na koji stanice postaju sve kancerogene. Međutim, s obzirom na HER4 da imaju anti-kancerogena funkcije, prateći aktivacija tog receptora će zaustaviti proliferativni prednost aktivacije EGFR. Moglo bi se razmišljati da ovaj potencijal aktivacija HER4 zaobiđena istovremenim silazni receptora i njegova specifičnog liganda NRG4. Pregled

Kod pacijenata s rakom mjehura, kombinirana HER4 /NRG4 jedinica signalno može inhibitore rasta i ko-ekspresija HER4 zajedno s NRG4 usko je povezana s boljim preživljavanje ako su dva proteina djeluju zajedno, a ne pojedinačno [28]. pregled

Mi smo također obavila analizu za usporedbu izraz HER4 za preživljavanje pacijenta. Napravili smo promatrati trend visokog HER4 izrazu se u vezu sa boljim opstanak (rezultati nisu prikazani), međutim, s obzirom na ograničenja u broju pacijenata uključenih u studiju, ovaj rezultat nije pronađen biti značajan i daljnja istraživanja će imati rasvjetljavanja li korelacija između HER4 ekspresije i preživljavanje mogu se naći u raka želuca. Korelacija razine ekspresije EGF receptora u prisutnosti metastaze i invazivnosti tumor pokazao samo HER2 da koreliraju obratno ovih parametara, dok ne postoji korelacije za preostali EGF porodice (rezultati nisu prikazani). Pregled

U zaključku, naši rezultati ukazuju na novu ulogu za HER4 u raka želuca. Zanimljivo, našli smo i HER4 i njegov specifični ligand NRG4 biti regulirani u kancerogenog tkiva. To je popraćeno povećanom signalizacije potencijala EGFR kroz ranijim koracima svih njegovih liganada i do podizanja regulacije HER2. Pregled

• PLoS ONE: mikrornk-338 inhibira rast, invaziju i metastaziranje želučanog raka ciljajući NRP1 Expression
• PLoS ONE: Co-Dostava doksorubicin i SATB1 shRNA by Thermosensitive Magnetic kationski liposoma za rak želuca Therapy