PLoS ONE: Exosomal miRNAs od peritoneuma iscjetku kao potencijalnu prognostičku biomarkera peritonejsku metastaza u želučanom Cancer

Sažetak pregled

Peritonejska metastaza je najčešći tip recidiva u bolesnika s rakom želuca (GC) i povezan je s loša prognoza. Peritonealni ispirak citologija, koristi za procjenu rizika peritonealne metastaze, ima nisku osjetljivost. Ovdje smo procijenili dijagnostički potencijal exosomal Mirna profila u peritonealnoj tekućini za predviđanje peritonejsku širenje u GC. Ukupna RNA se ekstrahira iz exosomes izoliranih iz šest želučanih malignih ascitesa (MA) uzoraka, 24 peritonejsku iscjetku (PLF) uzoraka, a kultura supernatanata (cm) dvije ljudske stanične linije karcinoma želuca koji se razlikuju u njihovom potencijalu za peritonejsku metastaza. Ekspresija exosomal miRNAs je ocijenjena s Agilent Ljudski Mirna microarrays i kvantitativno reverzne transkripcije lančanom reakcijom polimeraze (QRT-PCR). Analiza mikropostrojima pokazuje nisku varijabilnost u broju i signal intenziteta miRNAs otkrivenih među uzorcima. U šest UT-tekućine, Mir-21 je pokazao najviši intenzitet signala. Identificirali smo pet miRNAs (Mir-1225-5p, Mir-320c, Mir-1202, Mir-1207-5p i Mir-4270) s visokom ekspresijom u uzorcima UT-a, PLF od serosa-invazivne GC, a cm od vrlo metastatski GC stanične linije; pojavljuju se ovi kandidati Mirna vrste koje će biti vezane za peritonejsku širenje. Diferencijalna ekspresija Mir-21, Mir-320c i Mir-1225-5p je potvrđen u PLF od serosa-invazivne i neinvazivne GC strane QRT-PCR i Mir-21 i Mir-1225-5p su potvrdili da su povezani s seroznog invazije u GC. PLF se može koristiti na profil ekspresije exosomal miRNAs. Naši rezultati ukazuju na to da Mir-21 i Mir-1225-5p mogu poslužiti kao biomarkeri peritonejsku recidiva nakon kurativne GC resekcije, čime se osigurava novi pristup ranom otkrivanju peritonejsku širenje GC pregled

Izvor:. Tokuhisa M, Ichikawa Y, Kosaka N, Ochiya T, yashiro M Hirakawa K, et al. (2015) Exosomal miRNAs od peritoneuma iscjetku kao potencijalnu prognostičku biomarkera peritonejsku metastaza u rak želuca. PLoS ONE 10 (7): e0130472. doi: 10,1371 /journal.pone.0130472 pregled

Urednik: Soheil S. Dadras, University of Connecticut Health Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 1. veljače 2015. godine; Prihvaćeno: 20. svibnja 2015; Objavljeno: 24. srpnja 2015 pregled

Copyright: © 2015 Tokuhisa et al. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled

financiranje:.. autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod

mikroRNA (miRNAs) su mali (19-23 nukleotida) nekodirajuće RNA koji djeluju kao post-transkripcijskih regulatori ekspresije gena i igraju važnu ulogu u kontroli mnogih bioloških procesa, uključujući staničnu diferencijaciju, proliferaciju i apoptoza [1]. MiRNAs su pokazala da su onkogeni ili tumorski suzbijanju aktivnosti, deregulacija ekspresiju mnogih Mirni vrsta otkrivena je također u nekoliko vrsta raka, što sugerira potencijalnu primjenu miRNAs kao biomarkera progresije raka i metastaza [2-5]. Pregled

miRNAs su zamotan u izvodnih microvesicles (npr exosomes, apoptoze tijela, i prolijevanja microvesicles), koji je štit miRNAs od degradacije uzrokovane RNA-ze i služe kao nosači za sekreciju Mirna u izvanstanični prostor i tjelesnim tekućinama. Exosomes su male mjehuriće membrane koji su uključeni u stanične imune odgovore; Međutim, u posljednje vrijeme postalo je očito da exosomes sadrži znatne količine RNA i mogu biti uključeni u imunološki neovisni regulacijskim mehanizmima. Sada je utvrđeno da exosomes može obavljati međustanične prijenos miRNAs, čime sudjeluje u Mirni mehanizama signaliziranja [6]. Više razine exosomes Mirni sadržava također otkriveni u plazmi pacijenata oboljelih od raka u odnosu na zdrave osobe [7], što ukazuje da exosome bazi Mirni sekrecija je uključen u razvoj raka. Analiza abcrantnog Mirne izražavanja u serumu, slina, feces, a mokraća je upotrijebljena za rano otkrivanje limfoma B-stanica, a usmeni, crijeva i raka mokraćnog mjehura [8-11]. Pregled

Rak želuca (GC) je drugi najčešći uzrok raka povezanih smrti u svijetu [12]. Peritoneum je najčešće mjesto metastaza i povratak GC, i malignih ascitesa (MA), uzrokovana peritonejsku širenje stanica raka, su povezani s lošom prognozom. Trenutno ne postoje pouzdani prediktori za razvoj malignih peritonealni ascitesa u GC pacijenata. exosomes Mirna sadržavaju predstavljaju novi mehanizam međustanične signalizacije i mogu dati uvid u okruženju koje omogućava širenje raka u peritoneum [13]. pregled

U ovoj studiji, exosomes izolirani su od MA i intraoperacijske peritonealnoj tekućini za ispiranje (PLF) uzoraka dobivenih od GC pacijenata, te je medij za kulturu (CM) visoko nasilne staničnih linija, a peritonealna miRNAs se zatim ekstrahira iz ovih uzoraka. Kvaliteta izvađen exosomal miRNAs i dosljednost Mirna izraz uzoraka bili potvrđeni. Mirna izraz profili u MA, PLF, te uzorke CM uspoređene su i identificirani su miRNAs kandidati koji se odnose na peritonealnoj širenje GC. Pregled

Materijali i metode

Pacijenti

Svi su bolesnici ili njihove staratelje uvjetom pismeni informirani pristanak. Istraživanje je odobrilo Etičko povjerenstvo Yokohama City University Hospital (Odobrenje br A110127001). Pregled

Ma i Kardiokirurški PLF uzorci su prikupljeni iz GC bolesnika s kliničkopatološkim karakteristikama prikazanim u tablici 1. Svi bolesnici prethodno bio s GC dijagnosticira patohistološku analizu biopsija uzoraka uzetih iz primarne lezije, i šest pacijenata UT-je dijagnosticiran na prisutnost ascitesa po trbuhu kompjutorizirana tomografija (CT). Ascites također su analizirani citologije i svi su potvrdili kako je pozitivan na malignost strane patologa; preostali uzorci MA su se koristili za Mirne izolacije. PLF intraoperativno prikupljeni iz 24 bolesnika GC (Tablica 1). Nakon laparotomije, 100 mL fiziološke otopine se prelije u vrećicu od Douglas i peritonealni ispirak je voda sakupljana prije kirurškog resekcija tumora. PLF je analiziran citologije i koristi se za Mirna izolacije. Među 24 PLF uzoraka, šest se testiraju pomoću Mirna mikročipa i 18 analizirane su qPCR. Pregled

Kultura stanica pregled

stanična linija OCUM-2M je osnovana od primarnog tumora scirrhous želučanog karcinoma i stanična linija OCUM-2MD3 je izvedena iz OCUM-2M stanica s visokim potencijalom za peritonejsku širenje na miševe [14]. Stanice su kultivirane u Dulbecco modificiranom Eagle mediju (DMEM, Life Technologies, Grand Island, NY) s dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma, toplinom inaktiviranim (FBS), i antibiotika-antimikotika, na 37 ° C u CO s 5% _{2 inkubator. Za dobivanje stanica CM, OCUM-2M i OCUM-2MD3 stanice su isprane tri puta sa DMEM bez seruma s dodatkom antibiotika-antimikotika i inkubira u istom mediju za 48 h. Pregled}

Izolacija exosomes pregled

Uzorci za exosome izolacije dobije se kao što je prethodno opisano [15]. Za uklanjanje velikih čestica stanica i ostatke stanica, MA, PLF i CM su centrifugirani na 2.000 × g pregled tijekom 15 minuta na 4 ° C, filtrirana kroz 0,22 um filter (Millipore, Billerica, MA). Supernatant se čuva na -80 ° C do aplikacije Mirni ekstrakciju. Pregled

istaloži exosomes, uzorci su centrifugirani na 110.000 × g pregled za 70 min na 4 ° C. Exosome talog je ispran s 11 mL fosfatnog pufera (PBS) i ponovo centrifugirane kao što je opisano. Talog je upotrijebljena za ekstrakciju RNK. Pregled

Ukupna RNA ekstrakcija i analiza pregled

Ukupna RNA bila je ekstrahirana iz exosomes korištenjem miRNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Njemačka), prema uputama proizvođača, a bio je zatim pohranjeni na -80 ° C do potrebne daljnje analize. pregled

kvaliteta, koncentracije i veličine ukupne exosomal RNA određene su pomoću Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Foster City, CA). Prije analize, pripravljena je ukupna RNA pomoću Agilent RNA 6000 Pico kita (Agilent Technologies) u skladu s uputama proizvođača. Pregled

Mirna mikropostrojima pregled

MiRNAs izvučene iz šest MA, šest PLF, i dva CM uzorci su analizirani pomoću Agilent Human Mirna Microarrays (Agilent Technologies), koji sadrži 1.226 ljudskih miRNAs i 146 ljudskih virusnih miRNAs. Za detekciju Mirna, 100 ng RNA je označen i hibridizira pomoću Human Mirna Microarray kit (rel 16,0; Agilent Technologies), u skladu s uputama proizvođača (Mirna Cijela označavanje i Hib Kit za Mirne Microarray sustavu). Hibridizacije Signali su otkrivena s DNA Microarray Scanner G2505C (Agilent Technologies) i skeniranih slika su analizirani primjenom Agilent izlučivanje značajki softvera (v. 10.7.3.1). Analiza podataka izvedena je pomoću Agilent GeneSpring GX softvera v. 11.0.2. (Log _{2 transformacija). Osnovni transformacija nije proveden. Pregled}

Kvaliteta Mirna ekstrakcije je analiziran prema varijabilnost u broju microarray-otkrivena Mirna vrsta, intenzitet signala i korelacija Mirna izražavanja među uzorcima prema srednja vrijednost ± SD, koeficijent varijacije (CV), a koeficijent korelacije (CC). pregled

izbor peritonealne miRNAs metastaza specifične

analizirani su izraz profili exosomal miRNAs za odabir miRNAs koji su specifični za GC peritonejsku širenje pomoću sljedeće step-wise pristup. Korak 1: Mirna profili u CM visoko metastatskih peritonealnom OCUM-2MD3 stanica u usporedbi s onima iz roditeljskih ne metastatski OCUM-2M stanica, a različito izražene miRNAs (srednja višestruki broj promjena, > 2) su odabrani <. br>

Korak 2: šest PLF uzorci su svrstane u dvije skupine: T4 (n = 4) i T1-T3 (n = 2), u skladu s pozornice raka po veličini tumora i proširenje (UICC-AJCC, 7 ^{th edition). Faza T4 GC odlikuje najvećom učestalošću peritonealnim metastaza u usporedbi s drugim fazama [16]. Mirne izraz profili T4 skupine uspoređene su s onima u T1-T3 skupini i različito izraženi miRNAs (srednja višestruki broj promjena, > 2) odabrani su pregled}

Korak 3:. Odabrane miRNAs koji su zajednički za oba koraka i koji su izraženi u MA su dodatno filtrirati prema intenzitetu signala. Oni koji imaju vrijednosti intenziteta od više od dnevnika _{2 10 u MA i PLF su odabrani kao miRNAs kandidata koji se odnose na peritonealnom metastaza; Mir-21 imala je najviši prosječni intenzitet signala među uzorcima MA. Diferencijalni izraz Mirna vrsta odabrana u koraku 3 potvrđen u preostala 18 uzoraka PLF by QRT-PCR. Pregled}

Kvantitativna analiza peritonejsku metastaza specifične Mirna izražavanja QRT-PCR

TaqMan mikrornk testovi (Life Technologies) su koristi za određivanje relativne razine ekspresije Mir-21 (za ispitivanje ID. 000397), Mir-320c (ispitivanje ID. 241053_mat), Mir-1225-5p (ispitivanje ID. 002764) i Mir-16 (test ID. 000391). Reverzna transkripcija izvršena je korištenjem TaqMan RT Mirni Kit (Life Technologies) u sljedećim uvjetima: 30 min na 16 ° C, 30 minuta na 42 ° C i 5 minuta na 85 ° C. PCR je provedena u 96 jažica korištenjem 7500 Real Time PCR System (Life Technologies); Sve su reakcije izvedene u triplikatu. Razina ekspresije ciljanih miRNAs su normalizirani da Mir-16, koja je služila kao kontrola stabilno eksprimiraju [17]. Pri analizi naše Microarray podatke exosomal Mirne u malignim uzorcima ascites, Mir-16 predstavio najmanji koeficijent varijacije (CV = 4%) među kandidatima internih standarda, uključujući i Mir-638 (CV = 8%), neka-7a (CV = 8%), a 142-3p (CV = 23%). pregled

Statistička analiza pregled

Kontinuirane varijable uspoređene su Student-a t pregled -test. Kada je to potrebno, t pregled -test je modificiran za usporedbu nejednake varijance. Razlika između kategoričkih varijabli je određen primjenom Fisher-ovog točnog testa. Korelacija između dviju varijabli je određen primjenom Pearsonov koeficijent korelacije. Razlike su smatrane za statistički značajne na P < 0.05. Statistička analiza je provedena pomoću SPSS 21.0 softver za Windows (IBM, Armonka, NY). Pregled

Rezultati

Kvantitativna analiza izvađen exosomal RNA Netlogu

Ukupna RNA se ekstrahira iz exosomes izoliranim od MA, intraoperacijske PLF i stanica CM. Medijan koncentracije izdvojenu exosomal RNA bila je 4,4 ng /ul (u rasponu od 1,2 do 6,1 ng /ul) za tijelo i 6.4 ng /ul (od 1.7 do 16.4 ng /ul) za PLF. Elektroferogrami otkrila veliki dio malih vrsta RNA prisutna u svim CM i kliničkim uzorcima, dok su bez ili s vrlo malo kontaminacija 18S i 28S ribosomske RNA (bez jasne vrhove na odgovarajući molekularne mase) zabilježena je (Slika 1). Pregled

izvedba Mirna microarrays pregled

Kako bi se ispitala ekspresija exosomal Mirna microarrays u svakoj skupini uzoraka, ispitali smo broj otkrivenih miRNAs postotni intenziteta signala, broj obično zarobljenih miRNAs i povezanost izraz Mirna među grupama. Brojevi Mirna vrsta otkrivenih u svakoj skupini po microarray prikazan je na slici 2. U šest MA i šest PLF uzoraka, to znači da su brojevi 490,1 (SD = 42,3; CV = 8,6%) i 367,5 (SD = 13,4; CV = 3,6%), respektivno. U svakoj skupini, varijabilnost u broju otkrivenih miRNAs među uzorcima bio je nizak pregled

signala raspodjela intenziteta za svaku skupinu prikazana je na slici 3. to pokazuje obrađene signale normalizirane na 25, 50, 75, i 90 ^{og percentila u svakoj grupi. U 50 og percentila, u dnevniku _{2 relativni intenziteti signala za MA (slike 3-1) i PLF (Sl 3 i 2) Uzorci i među tri skupine (MA, PLF, te CM, slikama 3 i 4) bilo je 5.53 ± 0.19 (CV = 3.49%), 6,14 ± 0,24 (CV = 3.87%) i 4,97 ± SD (CV = 5,24%), redom. Varijabilnost intenziteta signala među uzoraka u svakoj skupini, kao i među grupama je bio nizak. Pregled}}

Brojevi miRNAs uobičajene među uzorcima u MA, PLF i CM grupe bili su 327, 263 i 354 , odnosno, dok je to 194 za tri skupine (Slika 4). pregled

Tablica 2 prikazuje korelaciju Mirna izražavanja između svaka dva uzorka. Najviši i najniži CC vrijednosti bile su 0,94 i 0,68, odnosno; prosječna CC svih uzoraka bio je 0,79 (CV = 8,86%). U MA, PLF i CM grupe, prosječni CC vrijednosti bile su 0,85, 0,88 i 0,90, odnosno, i varijabilnost u izrazu profili za svaku je skupinu nisko. Pregled

Izbor miRNAs kandidata koji se odnose na peritonealnoj širenje pregled

do sada nema podataka su dostupni na ekspresiju profilima exosomal miRNAs povezane s peritonejskom širenje, zbog nedostupnosti normalnih ascitesnih tekućina protiv koje je usporediti MA profile ekspresije. Odabrali smo miRNAs vezane za peritonejsku širenje pomoću step-wise pristup. Broj miRNAs često zarobljenih u šest uzoraka UT bila 327. u koracima 1 i 2, 140 i 118 metastaza specifične miRNAs izabrani su u cm, a PLF grupe. Od tih 327, 140 i 118 miRNAs, pet miRNAs odabrani su kao kandidati koji se odnose na peritonealnoj širenju (Slika 5). Dvije od njih (Mir-1225-5p i Mir-320c) i Mir-21 s najvećim intenzitetom signala među miRNAs MA-specifični su validirane kao diferencijalno izražen u 18 uzoraka PLF, pomoću qPCR (tablica 3). Pregled

Validacija kandidata Mirna izražavanja qPCR Netlogu

Osamnaest PLF uzorci su podijeljeni u dvije skupine, u skladu s metastatskim fazi, T4 (perforirana seroze, n = 9) i T1-T3 (subserosa ili manje, n = 9), a izraz Mir-21, Mir-320c i Mir-1225-5p analiziran je QRT-PCR. Slika 5 pokazuje da su razine Mir-21 i Mir-1225-5p u bolesnika GC T4 fazi značajno su porasle u odnosu na one u T1-T3 bolesnika (Mir-21, P = 0,027, a Mir-1225-5p, P = 0,008; Slika 5). Razlika u Mir-320c izražavanja između dviju skupina bolesnika je bez značajna (P = 0,928, Slika 6). Pregled

Zatim je korelacija između razine Mirne i kliničke pozadini GC pacijenata ispitana (Tablica 4). Mir-21 i Mir-1225-5p izraz lica bio je značajno viši u bolesnika s rakom T4-stage nego da se u T1-T3-scenskih bolesnika (P = 0,015). Nema značajne korelacije između Mirne izražavanja i drugih kliničkih parametara. Pregled

Rasprava pregled

U ovoj studiji istraživali smo, po prvi put, sadržaj Mirna od exosomes izoliranih iz MA i PLF GC pacijenata. Naša studija pokazuje da exosomal miRNAs mogu dosljedno izvađen iz MA i PLF i da Mirna ekspresije profilima mogu naznačiti status peritoneuma u GC pacijenata. Pregled

Prognoza za GC sa seroznog invazija i dalje loš, čak i nakon R0 resekcije, jer visoke stope recidiva, posebno peritonealnom metastaza (postove) [18]. PM u GC je najsloženiji oblik ponavljanja, jer je teško predvidjeti, kao i za dijagnosticiranje. Iako ascites je najčešći simptom PM, mnogi pacijenti s GC PM ne razvije ascites. Među slikovnih dijagnostičkih metoda se temelji, high-speed spiralni CT je naširoko koristi za procjenu preoperativnoj uprizorenje GC i post-terapijskog praćenja; Međutim, u slučaju PM njegova dijagnostička točnost je neadekvatna, uglavnom zbog niske osjetljivosti [19]. Koristeći PET-CT za PM dijagnoze u GC je također sporno, kao što je izvijestio da FDG-PET ima slabu osjetljivost za detekciju sati u GC [20]. PLF je postala sljedeća meta za dijagnozu i prognozu sati u GC. Citološka pregled intraoperativno prikupljenih PLF se koristi za predviđanje peritonejsku recidiva [21], a koristi se za GC uprizorenje u Japanu [22]. Međutim, neki istraživači su objavili da PLF citologija ne pokazuju osjetljivost potreban za predviđanje i otkrivanje PM [21], te predložili uporabu molekularnih dijagnostičkim postupcima, kao što je RT-PCR za detekciju mikro metastaza u PLF. U multicentričnom prospektivne studije, mRNA gena koji kodiraju karcinoembrijski antigen (CEA) i citokeratin 20 (CK-20), procjenjuje pomoću RT-PCR, pokazalo se korisnim za predviđanje ukupnog preživljavanja i PM u GC [23] , Međutim, nedostatak mRNA na bazi dijagnostičkih metoda je visoka razgradivost mRNA tijekom kirurških zahvata. Pregled

S druge strane, miRNAs priložena exosomes ostaje stabilna i može cirkulirati u tjelesnim tekućinama kao što je serum, plazma , slina, mokraća, majčino mlijeko, i suze, za dugo vremena [24, 25]; exosomes također su izolirani iz MA u raka jajnika [26]. pregled

Koliko je nama poznato, nije bilo izvješća o exosomal miRNAs izoliranih iz PLF GC pacijenata. Levänen et al. prikupljeni exosomes iz bronhoalveolarnom iscjetku i analiziraju exosomal Mirna izraz za otkrivanje alergije vezane Mirna vrsta [27]. Liu et al. izvijestio da exosomes izolirani iz cervikovaginalnom iscjetku sadržavala visoke razine Mir-21, koji se mogu koristiti kao biomarkera raka vrata maternice [28]. Evo, analizirali smo profile ekspresije exosomal miRNAs u PLF GC pacijenata Mirna microarray tehnologiju kako bi se identificirali kandidata za dijagnostiku Mirna biomarkera za predviđanje metastaza u GC. Pregled

U našem istraživanju, prvi izazov ležao u kvantitativnom izolaciju exosomal Mirna iz PLF. Weber et al. ocjenjuje Mirna izraz u 12 tjelesnim tekućinama i izvijestio je da je ukupna koncentracija RNA u peritonealnoj tekućini je 775 g /L [25], što je manje nego što smo dobili od MA i PLF-4.400 i 6.400 ug /L, odnosno razlog za razlika može biti korištena metodologija za izolaciju ukupne RNA, jer Weber et al. izravno izvađen RNA iz peritonealnoj tekućini, dok smo se prvi put izoliran exosomes, a zatim koristiti te za ekstrakciju RNA. Analiza kvalitete RNA izolirane iz PLF pokazao obilje malih (< 200 nt) RNK vrste u CM i MA. Nije bilo različita 18S i 28S ribosomal RNA vrhovi u pripremi, što ukazuje na odsutnost kontaminacije intracelularne RNA. Pregled

Drugi problem koji se susreće u ovom istraživanju je sudjelovalo dosljednost u kvaliteti exosomal miRNAs izoliran. U našoj studiji, gledali smo nisku varijabilnost u broju otkrivenih vrsta Mirne i intenziteta Mirna signala i visoku korelaciju Mirna izražavanja među uzoraka u svakoj skupini. Prosječni broj detektirati, miRNAs u MA i PLF su 490 i 367, što je u skladu s brojem miRNAs (397) ranije otkrivene u peritonealnoj tekućini [25]. Pregled

PLF i uzorci MA pokazali nisku varijabilnost intenzitet signala (CV = 3.87% za 50 ^{percentil). Nadalje, Mirna izraz obrasci su vrlo tijesno povezane između uzoraka unutar svake skupine (CC > 0,850), kao i između grupa (0,8 > CC > 0,7). Ovi rezultati pokazuju da PLF može biti izvor velike prinos dobre kvalitete miRNAs, koji pokazuju konzistentne izraz uzoraka u testu microarray. Pregled}

Mirne izraz profili su analizirani za odabir miRNAs specifične za peritonejsku metastaza. Mir-21 pokazuju višu ekspresiju u bolesnika s T4 stadijem karcinoma, nego u onima u T1-T3 skupini. Fabbri et al. izvijestili da miR-21 i miR-29a u raka objavljen exosomes utjecati na rast tumora i šire se vezanje i aktiviranje TLRs u okolnim imunih stanica i inducirati prometastatic upalni odgovor [29]; ovo je podržao ideju da tumor potječe exosomes doprinijeti premetastatic mikro okoliš [30, 31]. To može značiti da T4 exosomes karcinom-izvedeni stvoriti premetastatic niša u peritoneum, koji je tada podržava peritonealnoj invaziju nakon kurativne resekcije GC. Pregled

Korištenje step-wise pristup je, odabrali smo pet exosomal miRNAs (Mir-320c , mir-1202, mir-1225-5p, mir-1207-5p i mir-7270) i ​​potvrđena mir-320 i miR1225-5p izraz u PLF od 18 pacijenata CG po QRT-PCR. Mir-1225-5p pokazuju višu ekspresiju u T4 nego u T1-T3 pacijenata fazi CG, što potvrđuje rezultate dobivene microarray, dok nije bilo nikakvih razlika u Mir-320 razinama između skupina bolesnika. Mir-1225 cilja policističnih gen bolest bubrega, PKD1 pregled, koji se često mutirani u autosomno dominantno bolest policističnih bubrega; Tako, miR1225 može utjecati na progresiju bolesti [31]. Međutim, odnos između Mir-1225 i raka ostaje nejasno. Mir-21 i Mir-1225-5p može pripremiti premetastatic niša u peritoneum za širenje i naselja stanica raka koji metastazira i na taj način može ukazivati ​​na sklonost za peritonejsku recidiva nakon kurativne GC resekcije. Pregled

PLF daje informacije o statusu peritoneuma, kao što su promjene u populaciji imunih stanica i lučenje faktora rasta i citokina [32, 33]. Citološkim i molekularne dijagnostički testovi zasnivaju se na otkrivanju tumorskih stanica, dok je profiliranje miRNAs u PLF mogu se koristiti za predviđanje za peritonealnu premetastatic fenotipa u GC, osiguravajući učinkovitije preventivne i kurativne mjere. Pregled