PLoS ONE: PFTK1 promovira rak želuca Progresija reguliranjem proliferaciju, migraciju i Invasion

Sažetak

PFTK1, također poznat kao PFTAIRE1, CDK14, je novi član Cdc2-serin /treonin kinaza bjelančevina. Nedavna istraživanja pokazuju da PFTK1 je visoko izražen u nekoliko malignih tumora kao što hepatocelularnog karcinoma, karcinoma jednjaka, karcinoma dojke, i uključen je u regulaciju staničnog ciklusa, tumori proliferaciju, migraciju i invaziju koji dodatno utjecati na prognozu tumora. Međutim, izraz i fiziološki značaj PFTK1 kod raka želuca ostaju nejasni. U ovoj studiji analizirali smo ekspresiju i kliničko značenje PFTK1 Western blot u 8 paru svježe želučanog tkiva raka, nontumorous želučane sluznice tkiva i imunohistokemijski na 161 paraffinembedded kriške. Visoka izraz PFTK1 korelirana s ocjenom tumora, limfnih čvorova invazije, kao i Ki-67. Kroz brojanja Kit (CCK) -8 ispitivanje, protočna citometrija, formiranja kolonija, zacjeljivanje rana i transjažičnih analizi, vitro studije su pokazali da PFTK1 pojačana ekspresija promiče proliferaciju, migraciju i invaziju stanica raka želučanog dok PFTK1 obaranje dovela na suprotnim rezultatima. Naši rezultati za prvi put podržali da PFTK1 može igrati važnu ulogu u regulaciji želučane proliferacije raka, migracija i da će dati novi obećavajući terapijsku strategiju protiv humanog karcinoma želuca pregled

Izvor:. Yang L, Zhu J, huang H, Yang Q, Cai J, Wang Q, et al. (2015) PFTK1 promovira rak želuca Progresija reguliranjem proliferaciju, migraciju i invaziju. PLoS ONE 10 (10): e0140451. doi: 10,1371 /journal.pone.0140451 pregled

Urednik: Keping Xie, University of Texas MD Anderson Cancer Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 7. svibnja 2015. godine; Prihvaćeno: 25. rujna 2015; Objavljeno: 21. listopad 2015 pregled

Copyright: © 2015 Yang i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled

Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane potpore iz Zaklade prirodoslovni Kine (br 81302285, broj 81402015) pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da nema suprotstavljenih interesa postoji. pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći maligni tumor i drugi vodeći uzrok smrtnosti od raka vezane za sve vrste raka u svijetu [1]. Teško je izliječiti, osim ako se otkrije u ranoj fazi. [2] Zbog nedostatka specifičnosti, rano stopa dijagnoza je niska, a većina pacijenata s rakom želuca kod srednje kasno fazi kada je dijagnoza. 40% -60% bolesnika s karcinomom želuca dobila rak želuca radikalna operacija često će imati postoperativni recidiva i metastaza, te karakteristike ozbiljno utjecati na dugoročno preživljavanje u bolesnika s rakom želuca [3,4]. Unatoč velikom napretku novih dijagnostičkih i terapijskih strategija karcinoma želuca, točan molekularni mehanizmi raka želuca slabo ostaje razumjeti. Prema tome, identifikacija molekularni mehanizam za želučane napredovanja raka i metastaze mogu dati pacijentima nove dijagnostičke i terapijske strategije. Pregled

PFTK1 (također poznat kao PFTAIRE1, CDK14) je novi član Cdc2-serin /treonin protein-kinaze koji se prvi put identificirani u miša živčani sustav i je ključni regulator ciklina i staničnog ciklusa [5,6]. Nekoliko studija je izvedena za karakterizaciju fiziološke funkcije ili biološku važnost. Opisano je da PFTK1 jako je izražen u mozgu, gušterače, bubrega, te jajnika. CDK vežu za specifične ciklina okvir za formiranje funkcionalne komplekse protein kinaze i regulirana u dijelu svog substaničnog [7] lokalizacije. Na primjer, ciklin Y je novi membranom povezane ciklina, interakciju s PFTK1 pojačava aktivnost PFTK1 kinaze i regrutira PFTK1 na membranu [8] plazmi. PFTK1 interakciju s ciklin B2 ko-lokalizaciju u jezgri u hepatocelularnog karcinoma [9]. Temeljna funkcija PFTK1 prikazana kao kinaze ovisne o ciklinu (CDK), koji regulira progresiju staničnog ciklusa i staničnu proliferaciju specifično reagirati s članovima ciklin proteina, kao što su ciklin D3 (CCND3), ciklin Y (CCNY) i tvori trostruki kompleks s stanični ciklus inhibitor p21, čime se fosforilira Tumor supresor Rb za G1 /s tranziciju [10]. Knockout Ciklin Y u staničnim linijama glioma čini stanični ciklus blokiran u S razdoblju [11]. Ciklin Y interakciju s PFTK1 prilagoditi M fazu mitoze [12]. Ovi rezultati, zajedno ukazuju da PFTK1 može funkcionirati kao promotor tumora putem regulaciju staničnog ciklusa. U međuvremenu, nekoliko studija pokazuju da PFTK1 također ima i druge važne funkcije. PFTK1 modulira oligodendrocitnu diferencijacije putem PI3K /AKT puta [13]. Nedavno PFTK1 prenosi HCC staničnu pokretljivost kroz inaktivaciju aktin-obvezujuće pokretna suzbijanju funkciju TAGLN2 putem fosforilacije [14]. PFTK1 posredovane fosforilacija omogućuje povezanost CAD F-aktina filamenata, što je rezultiralo u povećanju polimerizacije aktin stresa vlakana, čime se potiče staničnu migraciju i invaziju u HCC stanicama [15,16]. Prekomjerna ekspresija PFTK1 mogu prenijeti na pokretan fenotip u malignim hepatocita [9]. U dogovoru s molekularnim nalazima, CCNY i /ili PFTK1 samo može aktivirati nekanonskim Wnt signalnog puta kako bi se poboljšala pokretljivost stanica u HCC stanicama [17]. Sve ove studije upućuju na to da PFTK1 mogu biti uključeni u proliferaciju stanica i pokretljivosti, međutim izraz i značenje PFTK1 u želučanim stanicama raka su još uvijek nejasna. Pregled

U našoj studiji, željeli smo provesti sveobuhvatnu analizu izraz PFTK1 i njegova prognoza ulogu u želučanim stanicama raka. Ispitali smo ekspresiju PFTK1 i njegovu povezanost s kliničkim obilježjima i Ki-67 Western analizom i imunohistokemijski (IHC). Ispitivanje je pokazalo da je poboljšana PFTK1 proliferaciju, migraciju i invazivnost stanica karcinoma želučanog CCK-8, protočna citometrija analize koloniziranje analize prerastanja test, utjecati na ekspresiju srodnih proteina. Ovi rezultati su prvo prijavili u želučanim stanicama raka i može dati novi uvid u razvoj eksperimentalne terapije u rak želuca. Pregled

Materijali i metode

Uzorci tkiva

Stotinu i šezdeset -jedan uzorci želučane raka tkiva i uskladiti susjedne noncancer tkiva su odabrani od pacijenata koji su se podvrgnuli operaciji između 2007. i 2013. godine na Zavodu za patologiju Tumor bolnica Nantong. Tih tkiva su pohranjeni na -80 ° C te je odmah nakon kirurškog uklanjanja. Za histološko ispitivanje, svi uzorci želučane tkiva su fiksirani u 10% puferiranom formalinu i uklopljene u parafin za sekcioniranje. Resected primjerci su klasificirani prema sedmom izdanju TNM klasifikacije za rak želuca [1] .All kliničkopatološkim informacije su dob, spol, dubina infiltracije, status diferencijacije, limfnog čvora invaziju invaziju živaca i TNM stadij. Odobravanje uklonjena tkiva za potrebe istraživanja dobiven je iz Etičko povjerenstvo od Nantong tumora bolnice. La pristanak i dobiven je od svakog pacijenta. Glavni klinički i patološke varijable prikazani su u tablici 1. pregled

Western blot analiza pregled

Western test blot korišten je za otkrivanje nekih proteina [18-20]. Prvo, želučani Caner tkiva i stanice su krekirani u puferu za liziranje (1 M Tris-HCl pH 7,5, 1% Triton X-100, 10% natrij-sulfata (SDS), 1% NP-40, 0.5 M EDTA, 0.5% natrij- deoksiholata, 10 ug /mL aprotinina, 1 mM PMSF, 10 ug /ml leupeptina) i centrifugirani pri 10000 × g tijekom 30 minuta za prikupljanje supernatanta. Dobiveni supernatant razrijeđen je u 2 × SDS pufera za nanošenje i kuha. Ekvivalentna količina proteina iz svakog uzorka su podvrgnuti elektroforezi s 10% natrij-dodecil-sulfat-poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE), te prenese u u polivinilidenfluorid (PVDF) membranu (Millipore, Bedford, MA). Nakon toga, membrane su bile blokirane tijekom 2 sata na sobnoj temperaturi, a zatim inkubirani preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima. Nakon ispiranja s puferom (PBS) koja sadrži 0.1% Tween 20 tri puta, svaki za 5 min, membrane su zatim inkubirane s peroksidaza-vezanog IgG kao sekundarnim antitijelom za još 2 sata na sobnoj temperaturi. Membrane su zatim razvijen korištenjem sigurnosnog sustava ECL (slikovne tehnologije, Ontario, Kanada). Antitijela se koriste u ovom istraživanju su: anti-PFTK1 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-Ciklin E (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-PCNA (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology), anti- GAPDH (1: 1000, Sigma), anti-β-katenina (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology), anti-Dvl1 (1: 600, Santa Cruz Biotechnology), anti-Dvl2 (1: 600, Santa Cruz Biotechnology), anti-Naked1 (1: 500, stanično signaliziranje), anti-MMP2 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology). pregled

Imunohistokemijska analiza

Ukratko, dijelovi tkiva su odvoštiti u ksilena i rehidrira kroz ocjenjuju etanoli. Zatim sekcije ugašena u 3% -tnom metanolnom peroksida od oko 10 minuta radi blokiranja endogene peroksidaze aktivnost. Visokim tlakom i temperaturom, u autoklavu, njegova imunoreaktivnost je poboljšana u 0.1 M citratnog pufera tijekom 3 minute. Uzorci tkiva su inkubirani sa anti-PFTK1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology), i anti-Ki-67 (1: 400, Santa Cruz Biotechnology) tijekom 120 minuta na sobnoj temperaturi. U skladu s uputama proizvođača, nakon pranja u fiziološkoj otopini puferiranoj fosfatom (PBS), tkiva se inkubiraju s peroksidazom iz hrena-konjugirani anti-mišji Ig polimera kao drugo antitijelo (isplanirati kit, Dako) tijekom 20 minuta na sobnoj temperaturi. Konačno, slajdovi su prebrojane s hematoksilinom, dehidrirane i montirati u smole gori. Za kvantificiranje PFTK1 i Ki-67 ekspresije proteina, i opseg imunoreaktivnost i intenzitet su ocijenjeni i postigao. Pet polja visoke snage su izabrani nasumce za svaki dio, a najmanje 300 su stanice računaju se po terenu. Za statističku analizu PFTK1 svaki klizač se procijeni korištenjem semikvantitativnog sustava bodovanja za intenzitet tako mrlje i postotak pozitivnih malignih stanica. Stanice su postignuto na slijedeći način: 1 (≤25% tumorskih stanica obojenih), 2 (26% -50% tumorskih stanica obojenih), 3 (51% -75% tumorskih stanica obojenih), 4 (76% -100% tumorske stanice obojeno). Za procjenu gustoće: 1 slaba bojenje; 2 umjerena bojenje; 3 intenzivno obojenje. Onda smo množe dvije rezultate i klasificira ih u dvije skupine: mala izražavanja i visoku ekspresiju. Što se tiče statističke analize Ki-67, < 50% tumorskih stanica obojenih kao niska izražavanja i ≥50% tumorskih stanica obojenih kao visok izraz. Kako bi se izbjegli tehnički pogreške obojenje se ponovi tri puta, a dobiveni su slični rezultati. Pregled

Stanične kulture i privremene transfekcije pregled

MGC803 i HGC27 su stanične linije želučanih, koji su nabavljeni iz stanične biblioteke kineske akademije znanosti. Obje su uzgojene u RPMI-1640 mediju (Gibco-BRL, Grand Island, NY, USA). SGC7901 i GES1 su još želučane stanične linije, koje su ljubazno koje se nalaze u Zavodu za patologiju istraživanje Sveučilišta Nantong. SGC7901 i GES1 su uzgojene u DMEM mediju (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, USA). Sve medij su s 10% fetalnog goveđeg seruma (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, USA) je dodano 2 mM L-glutamina, 100 U /ml penicilin-streptomicina smjesa (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, USA ), na 37 ° C i 5% CO _{2. PFTK1 mali ometa RNA (siRNA) su dizajnirani i sintetizirani Šangaj Genechem (Kina). SiRNA ciljanje PFTK1 sekvence bile su kako slijedi: 5'-GTTCATTCTTTACCACATT-3 ', 5'-AGGTTGCATCTTTGTTGAA-3', 5'-AAAGAGTCACCTAAAGTTA-3 ', 5'-ACCCATACAGGAAATCCAA-3'. Zastava-PFTK1 plazmid je kupljen od Šangaja Genechem (Kina). LipofectAMINE 2000 transfekcijski reagens (Life Technologies) korišten je za stanice transfekciju slijedeći upute proizvođača. Pregled}

Analiza protočnom citometrijom pregled

Prvo, sve stanične linije želučanih se fiksiraju u 70% etanolu preko noći na -20 ° C C. drugo, nakon isprana citrat-fosfatnog pufera i PBS, stanice su inkubirane s 1 mg /ml RNaseA kroz 30 minuta pri 37 ° C. Zatim, stanice su obojene s 50 ug /ml propidij jodida u fosfatno puferiranoj otopini soli (PBS) -Triton za još 20 minuta na 4 ° C. Konačno, stanice su analizirane uporabom Becton Dickinson FACScan protočnim citometrom BD (San Jose, CA) i CellQuest stjecanja programa za analizu. Pokus je proveden na tri puta. Pregled

testovi tvorbe kolonija pregled

MGC803 stanice su uzgajane u kulturi ploče šest jažica (Corning Inc., Corning NY) pri gustoći od 200 stanica /jažica nakon transfekcije PFTK1 #siRNA i zastava-PFTK1 u skladu s uputama proizvođača. Nakon dva tjedna, stanične kolonije (≥50 stanica /kolonija) su izbrojani bojanjem 0,5% kristalno ljubičastog. Pregled

Cell proliferacije

MGC803 stanice koja je uključivala normalne, transfekcii PFTK1 # siRNA i Flag-PFTK1 su nasađene na 96-jažične ploče stanične kulture, klaster (Corning Inc., Corning NY) pri gustoći od 2 × 10 ^{4 stanica /jažici u 100 jal kulturi i rasle su preko noći. Prema uputama proizvođača, stanice mjerene su pomoću komercijalnog CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). CCK-8 reagensa je dodano u svaku jažicu tijekom 2 sata inkubacije pri 37 ° C. Apsorbancija je očitana na valnoj duljini od 450 nm u automatskom čitaču ploča. Pokusi moraju ponoviti najmanje tri puta. Pregled}

zacjeljivanja rana Test pregled

MGC803 stanice su uzgajane u kulturi pločama šest i (Corning Inc, Corning NY) pri gustoći od 5 × 10 ^{5 stanica /jažica i rasle do sjedinjenja preko noći. Nakon transfektirane 48 sati, stanice su inkubirane s medijem bez seruma. Linija je ogreban u sloju conflent stanica pomoću kraj FIE za pipete od 10 ml (vrijeme 0) i stanice su isprane s PBS-om. Slike koje migriraju stanice su sekvencijalno uzeti nakon 24 sata, 48 sati tijekom zatvaranja ranjenog regiji. Pregled}

Trans-i migracije Test pregled

migracija stanica ispitivanje se provodi korištenjem prerastanja komoru (8,0 lm veličine pora , Costar, Cambridge, NY, USA). Oko 1 × 10 ^{5 stanica /ml zasijane u gornjim komorama u mediju RPMI-1640 i doda se na dno komore. Nakon 24 h, prva stanica koje nisu migrirale se uklanjaju, a na dnu stanice koje su migrirale su fiksirane sa paraformaldehidom i obojeni Kristal violet bojom. Broj migrirajućih stanica u 5 polja izbrojan je pod 200 puta, a određeni su sredstva za svaku komoru. Svi eksperimenti su ponovljeni tri puta pregled}

Trans jažica Test invazije pregled

migracija stanica test se obavlja korištenjem prerastanja komoru (8.0 lm pore veličine, Costar, Cambridge, NY, USA).. BD MatrigelTM bazni membranski matrični je dodana u gornju komoru kroz 1 sat na 37 ° C. Zatim 500 ul medija koji je sadržavao kemotaktički faktor je stavljen u donje komore. Oko 1 × 10 ^{5 stanica /ml se zasije u gornje komore, na 37 ° C tijekom 24 h.Cells su zatim fiksirane s paraformaldehidom i obojeni Kristal violet bojom. Svi pokusi su ponovljeni tri puta. Pregled}

Statistička analiza pregled

Sve statistička analiza je provedena su pomoću SPSS statistike 19 softverskog paketa. PFTK1, Ki-67 ekspresija i kliničko osobine su analizirani pomoću χ ^{2 test. Ukupni krivulje preživljavanja izračunate su sa Kaplan-Meier metodi i testirane sa log-rank testa. Multivarijatna analiza analiziran je Cox-a proporcionalnom modelu opasnosti, omjer rizika i 95% interval pouzdanosti zabilježene su za svaki marker. Vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SE i P pregled < 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled}

Rezultati

PFTK1 je izraženo u želučanom tumorskih tkiva pregled

To je izvijestio da PFTK1 važan ciklinu ovisna kinaza koja se može regulirati stanični ciklus, ali istraživanja na rak želuca nikada nije studirao. Budući da prekomjerna ekspresija PFTK1 pronađen kod raka jetre i raka jednjaka u usporedbi s normalnim tkivima. Tako zanimljivo je analiza ekspresija PFTK1 u želučanim tumorskim tkivima i njegova coorelation s nuklearnog antigena proliferirajućih stanica (PCNA). Prvo, ispitali smo ekspresiju PFTK1 u 8 parova želučane tumorskim tkivima i njihovih odgovarajućih nontumorous želučane sluznice putem Western blot. Kao što je prikazano na Slici 1, u usporedbi sa susjednim normalnim tkivima, uzlazni PFTK1 detektirana je u svih osam želučanim tkiva u skladu s PCNA. Da bi se potvrdilo kliničko značenje PFTK1 u želučanom progresije raka, imunohistokemijski (IHH) analizama se koristi za promatranje ekspresiju PFTK1 proteina u 161 želučanog tkiva raka. Kao što se očekivalo, izraz PFTK1 i tumora razred negativno su povezane. PFTK1 imali su značajno višu ekspresiju u slabo diferenciranim primjeraka nego u dobro diferenciranim primjeraka, što je u skladu s Ki-67. PFTK1 je izražen u staničnu membranu, a citoplazmu, Ki-67, uglavnom u jezgri. Rezultat je prikazan na slici 2. Zatim smo istražili povezanost između PFTK1 i Ki-67 koeficijentom korelacije Pearsonov. Možemo vidjeti na slici 3A koji PFTK1 je pozitivno povezana s Ki-67 (Pearsonov y = 0,833, P izvoznici < 0,001). Pregled

PFTK1 je povezana s nepovoljnim kliničkim značajkama i slabe želučane tumora opstanak pregled

studija Klinička udruga pacijenata istraživali analizirati korelaciju PFTK1 s rakom želuca kliničkopatološkim značajkama među 161 tkiva. U kliničkopatološkim Podaci su navedeni u Tablici 1. Visoka izraz PFTK1 bio je povezan s tumorom razred ( P pregled = 0,009), dubina infiltracije ( P pregled = 0,002), limfnog čvora invaziji ( P pregled = 0,000), kao i Ki-67 ( P pregled = 0,000). Ali nije bilo korelacija između PFTK1 izražavanja i drugih kliničkih varijabli, kao što su dob, spol, invazija živaca i TNM stadiju. Pregled

Osim toga, Kaplan-Meier analiza korištena je analizirati povezanost između PFTK1 izražavanja i 161 pacijenata opstanak. Prema krivulja preživljavanja, visoka ekspresija PFTK1 očito je povezana s lošom ukupno preživljenje, dok niska ekspresija PFTK1 je povezana s boljim ukupnog preživljavanja. I srednja vrijednost vremena preživljenja i opasnost omjer je prikazano na slici 3B. Štoviše, Jednosmjerna analiza u želučanim tkiva raka pokazala je da gradusa ( P pregled = 0,020), dubina infiltracija ( P pregled = 0,011), limfni čvor invazija ( P pregled = 0,011), TNM stadij (P = 0,031), PFTK1 izraz ( P pregled = 0,002) i Ki-67 ekspresija ( P pregled = 0,013) bili su prognostički čimbenici ukupno preživljavanje (Tablica 2 ). Multivarijatna analiza pomoću COX-a proporcionalnih rizika modela predložio PFTK1 bila samostalna prognostički pokazatelji pacijenata ukupno preživljavanje ( P pregled = 0,048, tablica 3). Ukratko, naši su rezultati pokazali da je izraz PFTK1 značajno je povezana s kliničkim obilježjima i lošeg ukupnog preživljavanja. Pregled

Izražavanje PFTK1 u nontransfected i inficiranim stanicama raka želuca pregled

Kao PFTK1 ekspresija mu je povećana u želučanim tumorskih tkiva, onda smo analizirali izraz PFTK1 u staničnim linijama, uključujući MGC803, SGC7901, HGC27, GES1. Iz Sl 4A, izražavanje PFTK1 u normalnom staničnom linijom želučane GES1 bila je niža nego u želučanim staničnim linijama MGC803, SGC7901, HGC27. Za daljnje proučavanje funkcije PFTK1 u stanicama raka želuca in vitro pregled MGC803 stanice su transficirane s PFTK1-siRNA i SGC7901 stanice su transficirane s Flag-PFTK1. Western blot je korišten za mjerenje ekspresije PFTK1. Kad Flag-PFTK1 bilo je ubačeno u SGC7901, PFTK1 imali višu ekspresiju (slika 4b). Dok PFTK1-siRNA bilo je ubačeno u MGC803, PFTK1-siRNApostigao najveću obaranje učinkovitost u usporedbi s drugim PFTK1-siRNA (Slika 4c). Tako smo odabrali Flag-PFTK1 i PFTK1-siRNAnastaviti slijedeće pokuse.

PFTK1 mogu promovirati stanice migriraju i invazivne In vitro

To je izvijestio PFTK1 Prekomjerna ekspresija može povećati fosforilaciju CAD i poboljšati CAD da se vežu za F-actins koje promiču hepatocelularnog stanicama karcinoma migraciju [16]. S obzirom da PFTK1 se odnose na limfnih čvorova invazije želučanih uzoraka raka, proučavali smo da li PFTK1 moglo utjecati na želučane stanice raka migraciju i invaziju. Zacjeljivanja rana za analizu i transjažičnih testova pokazali su da je migracija Flag-PFTK1 stanica posebno je povećana u usporedbi s kontrolnim stanicama. Naprotiv, migracija PFTK1-siRNAstanica smanjena u usporedbi s kontrolnim stanicama (Slika 5a i 5b). Nadalje, invaziju u Matrigel testovi su također pokazali da uzlazni PFTK1 strane transfckciju Flag-PFTK1 mogao unaprijediti invazivne sposobnosti i obaranje PFTK1 mogla prigušiti invazivnu mogućnost želučanih stanica raka (Slika 5c). Sve u svemu, možemo doći do zaključka da PFTK1 promicanja migraciju i invaziju želučanih stanica raka. Pregled

Izražavanje PFTK1 promicanje proliferaciju stanica želuca raka pregled

Prema rezultatima iznesenih, PFTK1 pozitivno korelaciji s PCNA, Ki-67 i gradusa, koje su stanice marker proliferacije. Mi analizirati ulogu PFTK1 o regulaciji proliferacije sposobnosti. Prvo, MGC803 stanice su transfektirane s PFTK1-siRNA, Flag-PFTK1 i određena CCK-8 testa. Prekomjerna ekspresija PFTK1 pokazali da povećavaju stanica želuca stopu rasta od kontrole, dok obaranje PFTK1 pokazao suprotan rezultat (slika 6a). U skladu s povećanje stope rasta stanica nakon PFTK1 prekomjernom ekspresijom, ispitivanjima koloniziranja također pokazuju da može povećati nastanak kolonija. I obaranje PFTK1 pokazao isti rezultat sa CCK-8 testu (Sl 6B). Konačno, istraživali smo proliferacije mehanizam PFTK1 po protočnom citometrijom analizi, a podaci sugerirali da više želučane stanice raka su pronađeni u S fazi, u nazočnosti izvanmaternične PFTK1, manje želučane stanice raka su pronađeni u S fazi u transfekcijom s PFTK1- siRNA(slika 6C). Da sumiramo, ovi podaci pokazuju da PFTK1 sudjelovao u regulaciji staničnog ciklusa ubrzavanjem G0 /G1-S tranziciju. Pregled

Signal put od PFTK1 u promicanju proliferacije i migracije

Kako bi se dodatno proučiti mehanizam koji PFTK1 regulirano želučanih stanica raka proliferaciju, migraciju, invaziju, odlučili smo otkriti povezanih proteina promijenjenih Western blot kada PFTK1 je pojačana ekspresija ili obaranje u MGC803. Kako je izvijestila, PFTK1 mogao aktivirati nekanonskim Wnt signalnog puta u hepatocelularnog karcinoma [17]. Wnt signalni bio je povezan s proliferacijom tumora i migracije. Pojačanu regulaciju PFTK1 djelomično aktivira Dvl2, Naked1, MMP2 i povišena ekspresija regulatora staničnog ciklusa ciklina E, ali nije promijenio Dvl1, P-katenina. Štoviše, pronašli smo da je obaranje endogenog PFTK1 izražavanja mogao smanjiti Dvl2, Naked1, MMP2, ciklin E izraz, ali ne i mijenjati Dvl1, P-katenina (Slika 7). Pregled

Rasprava pregled

Budući da je jedan od najviših incidencije raka u svijetu, 5 godina stopa preživljavanja od raka želuca je manje od 20% -25% u SAD-u, Europi i Kini zbog lako do recidiva i visoka stopa metastaza u postoperativnih [2]. Helicobacter pylori infekcije, promjene onkogena i tumor supresorski geni, regulacija staničnog ciklusa i aktivaciju telomeraze su povezani s rakom želuca [21]. Abnormalna regulacija staničnog ciklusa u razvoju raka želuca bila je tema istraživanja u posljednjih nekoliko godina. Točan i Točna regulacija staničnog ciklusa ovisi o nekim faktorima, uključujući kontrolne ovisnih kinaza staničnog ciklusa (CDK), protein staničnog ciklusa (ciklini) i inhibitora kinaza ovisnih staničnog ciklusa (CKIs). Svatko je upoznat s 11 klasičnih CDK (CDK1-11), PFTK1 kao zavisna kinaza novi staničnog ciklusa je utvrđeno da ne zajedno, a veza između PFTK1 i raka nije puno, također u rakom želuca [22]. Pregled

PFTK1 izvorno nađen u živčanom sustavu štakora [23]. PFTK1 modulira oligodendrocitnu diferencijacije putem PI3K /AKT puta [13]. Najnovija istraživanja su izvijestili da PFTK1 je reguliran u ljudskom raka jednjaka, hepatocelularnog karcinoma i suradnika s rastom tumora, migracije i invazije [14,24]. U našoj studiji, istraživali smo da li je izraz PFTK1 je bio uključen u želučanoj stanice raka proliferaciju, migraciju i invaziju. U početku, pokazali smo da PFTK1 izražena više u želučanom tkivu raka nego u susjednim nontumor tkivima, western blot da je u skladu s rezultatima u drugim karcinomima (slika 1). Nakon toga, imunohistokemijski su pokazali visok izraz PFTK1 bio je povezan s tumorom razredu, dubina infiltracije, limfnih čvorova invazije, kao i Ki-67 u 161 želučanog tkiva raka. Ovi rezultati zatraži PFTK1 može utjecati na proliferaciju rak želuca i migraciju. Kaplan-Meier analiza pokazala je da PFTK1 predvidio slabu ukupno preživljenje (slika 3B). Multivarijatna analiza pomoću COX-a proporcionalnih rizika modela predložio PFTK1 bila samostalna prognostički pokazatelji ukupno preživljenje pacijenata. U cilju daljnjeg razumijevanja regulatorni učinak PFTK1 na stanica želuca, MGC803 stanice su transfektirane s PFTK1-siRNA, Flag-PFTK1 In vitro pregled (Slika 4). Slika 6 je pokazao PFTK1 može pospješuju proliferaciju CCK-8, ispitivanjima koloniziranja. Istovremeno, PFTK1 povećava transformaciju G1-S faza prema protočnom citometrijom, podudara s nalaz PFTK1 u hepatocelularnog karcinoma [10]. Ciklin E je jedan od važnih regulatornih čimbenika tijekom fazne transformacije G1-S i ciklin E proteina može definirati kao prognostički čimbenik za pacijente s rakom želuca [25]. Zanimljivo, PFTK1 razina je povećano nakon transfekcije s Flag-PFTK1 consistented s PCNA, MMP2 i ciklin E (slika 7). Pregled

Osim toga, mi također ispituje da li PFTK1 može utjecati na stanice migraciju i invaziju sposobnost po ozdravljenju rane Pokusne i Transwell analiza. Rezultati su pokazali da je prekomjerna ekspresija PFTK1 može poboljšati stanica migraciju i invaziju, što bi moglo biti zbog promjene nizvodno od PFTK1 signalnih putova (Slika 5). Kao što je objavljeno u hepatocelularnog karcinoma, PFTK1 i /ili CCNY sam mogao aktivirati nekanonskih Wnt signalnog puta potiču stanice migraciju i invaziju [17]. Wnt putevi uključen kanonski Wnt /β-katenina signalizaciju i ne-kanonske Wnt signalni put (Wnt /Ca ^{2 + i Wnt /PCP). Wnt signalni put igrao važnu ulogu u razvoju raka i uređenog proliferaciju stanica, migraciju i invaziju [26]. Nakon toga, pronašli smo ekspresiju proteina β-katenina, Dvl1, Dvl2, Naked1. Dvl2 i Naked1 pozitivno korelira s PFTK1 i kanonski Wnt /β-katenina srodnih proteina beta-katenina, Dvl1 nije promijenio (Slika 7). Iz navedenog, možemo, dakle, spekulira da PFTK1 mogli promovirati migraciju i invaziju kroz reguliranje nekanonskih Wnt signalnog puta. A tu su i članci brz nekanonskoj Wnt signalni potiče migraciju i invaziju mogućnost želučanih stanica raka [27,28]. Pregled}

Jednom riječju, izraz PFTK1 značajno je povećan u ljudskim tkivima s rakom želuca. Prekomjerna ekspresija ili obaranje PFTK1 transfekcijom s Flag-PFTK1 ili PFTK1-siRNAje očito pod utjecajem želučane stanice raka proliferaciju, migraciju i invaziju. Naši rezultati u prvom trenutku pružiti nove dokaze PFTK1 u razvoju rak želuca i opskrba laboratorijsku osnova za kliničko liječenje. No, daljnje studije su potrebne za razumijevanje precizan mehanizam PFTK1 utječu na proliferaciju, migraciju i invaziju mogućnost želučanih stanica raka. Pregled

• PLoS ONE: Detekcija i karakterizacija metastatskih stanica raka u Mesogastrium za rak želuca bolesnika
• PLoS ONE: Dijetetski Fat usisnog i rizik od raka želuca: meta-analiza opservacijske studije