Plos ONE: Čezmerno evkariontskih Translation Začetek Factor 5A2 (EIF5A2) korelira z Cell agresivnosti in Poor preživetje v želodcu Cancer

Povzetek

Evkariontski prevod začetek faktor 5A2 (EIF5A2) igra pomembno vlogo pri napredovanju tumorja in prognozo vrednotenje. Vendar pa je le malo informacij je na voljo okoli potencialne vloge, raka želodca. Ta študija je namenjen za preiskovanje funkcijo EIF5A2 v napredovanja tumorja in njegovih možnih mehanizmov. EIF5A2 izraz je bila izmerjena v človeškem želodcu raka celičnih linijah, je ovekovečena želodčne sluznice celične linije epitelija (GES-1) in človeške želodčne rakavih tkiv in podrli motnje RNA ali molekul, ki jih EIF5A2 plazmida transfekciji. Cell orožja, so bile ocenjene migracije in invazija in vitro
. Cilji na nižji stopnji iz EIF5A2 so bile pregledane z western blot. EIF5A2 in njen potencial ciljno metastaze povezan protein 1 (MTA1) izraz so bili pregledani v 160 parov človeškega raka želodca in sosednjih non-tumorskih vzorcev z uporabo imunohistokemija (IHK) obarvanje in korelacija z clinicopathological funkcij in preživetje je bil raziskan. Rasklapanje za EIF5A2
ali MTA1
povzročila očitno zatiranje proliferacije HGC27 celic, migracije in invazije. Po rasklapanje za EIF5A2
in HGC27 celic, stopnja E-kadherina bilo molekul in vimentin, so navzdol reguliranih ciklin D1, ciklin D3, C-MYC in ravni MTA1. Uravnavanjem EIF5A2 v MKN45 celicah povzročila obratno. Rezultati IHC pokazala pozitivno korelacijo med EIF5A2 in MTA1 izražanja v želodcu raka ( P
< 0,001). Oba EIF5A2 in MTA1 prekomerno so povezana s stopnjo pT ( P
= 0,018 in P
= 0,042), stopnja pN ( P
= 0,037 in P
= 0,020) in lymphovascular invazija ( P
= 0,016 in P
= 0,044). EIF5A2 ali MTA1 čezmernim je značilno povezana s slabim celokupno preživetje in preživetje brez bolezni (All P
< 0,05). Multivariatne analize opredelila EIF5A2 kot neodvisen napovedovalec tako za celokupno preživetje ( P
= 0,012) in preživetje brez bolezni ( P
= 0,008) pri bolnikih z rakom želodca. Naše ugotovitve kažejo, da ima EIF5A2 Povecanje pomembno onkogenega vlogo pri raku želodca. EIF5A2 lahko predstavljajo nov napovedovalec za slabo preživetje in je potencialno terapevtski cilj za raka želodca

Navedba. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) Čezmerno evkariontskih prevajanje Initiation Factor 5A2 (EIF5A2) korelira z Cell agresivnost in slabe preživetje želodčnega raka. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10,1371 /journal.pone.0119229

Akademska Urednik: junij Li, Sun Yat-sen University Medical School, KITAJSKA

Prejeto: 22. januar 2014; Sprejeto: 29. januar 2015; Objavljeno: 20. marec 2015

Copyright: © 2015 Meng et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje: To delo je bilo podprto z donacijami Pekingu občinskega Natural Science Foundation (št 7.132.209), Hubei Province zdravje in družinsko načrtovanje znanstveno raziskovalnega projekta (št WJ2015MB137) in velikih projektov, znanosti in tehnologije v Pekingu City (št D141100000414004). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) je zelo metastatski bolezni in eden izmed najbolj smrtonosno od prebavil malignih bolezni. [1] Kljub napredku v kirurških in citotoksičnih terapij za GC, trenutno na voljo zdravljenja za bolnike z napredovalo GC so zelo omejena. [2, 3] razvoj novih terapevtskih strategij, je ključnega pomena za pojasnitev molekularne mehanizme, ki spodbujajo za invazivne in metastaznih lastnosti GC celic.

Evkariontski prevod začetek faktor 5A2 (EIF5A2) se nahaja na človeški kromosom 3q26.2, in je član EIF5A
genske družine. [4] Čezmerno EIF5A2
mRNA v nekaterih človeških rakavih celic, v nasprotju s prekomerno omejena na človeško testisov in dele možganov, predlaga EIF5A2
potencialna onkogena. [4] Predhodne študije pokazale, da je bila EIF5A2 izraženi pri številnih človeških rakih kot pankreasa duktalni adenokarcinom, rak jajčnikov, rak jetrnih celic, pljučnega raka, kolorektalnega raka in melanoma in je bila povezana s slabim preživetje bolnikov z rakom in /ali rakave celice agresivnosti. [5-11] Nedavne študije so pokazale, da ima EIF5A2 rakotvorne sposobnosti preko svoje aktivacije EIF5A2-MTA1 /C-myc osi. [8] Vendar malo informacij je na voljo približno EIF5A2 beljakovin izražanja, svojo prognostičnega pomena in potencialne onkogenih vlogo v človeški GC.

v skladu s tem je najprej preiskala izražanje EIF5A2
v GC humanih celičnih linijah in njeno morebitno vlogo v celično proliferacijo, migracijo in invazijo. Dalje, smo ugotovili morebitne dolvodno ciljne proteine ​​osvetliti vpliv tanjšanja EIF5A2 ali pozitivni vpliv na celične funkcije GC celic. Na koncu smo analizirali korelacijo EIF5A2 in MTA1 izraz v človeški GC in njegov pomen za clinicopathological dejavnikov in preživetje pri bolnikih GC.

Materiali in metode

Etika Izjava

študija je odobril Odbor za etiko PUMCH, kitajske akademije za medicinske vede in Peking Union Medical College v Pekingu na Kitajskem, in pisno privolitev je bila pridobljena iz vsakega bolnika.

Bolniki in osebki

GC tkivo poveže sosednje vzorci niso tumor tkiva so bili pridobljeni iz 160 zaporednih bolnikov, ki so med januarjem 2002 in decembrom 2006 so bile opravljene kirurško resekcijo za primarno GC Union Medical College Hospital Peking (PUMCH) Noben bolnik ni prejel novi dopolnilni kemoterapijo ali radioterapijo. Podatki o preživetju so bili pridobljeni na podlagi obeh evidenc bolnikov in telefonske spremljanje. Mediana spremljanja, ko je bila 53 mesecev (razpon, 1-113 mesecev). Še dva para svežih GC tkiv in noncancerous želodčne sluznice tkiv so bili pridobljeni pri bolnikih, ki so doživeli kirurško resekcijo za slabo diferencirani adenokarcinom želodca v PUMCH leta 2014.

lymphovascular invazijo opredeljeno kot prisotnost celic embolija tumorja v prostorih obdan z jasno vizuali endotelijske obloge na obodu tumorskih odsekov. [12, 13] Bolniki so potekali v skladu s 7. različico klasifikacije AJCC TNM za raka želodca. [14] Lauren histotype bila razdeljena na črevesno in razpršeni mešanega tipa kategorije. [15]

celične kulture

pet vrst humanih celičnih linijah GC so bili pridobljeni iz celic Center Shanghai inštituti za biološke vede (AGS in MGC803, Šanghaj, Kitajska) in Cell Center inštituta osnovnih medicinskih znanosti (MKN45, SGC7901 in HGC27, Peking, Kitajska). Imortalizirana želodca sluznice epitelijskih celic linija GES-1 je bila pridobljena iz Pekinga ComWin Biotech Co, Ltd (Peking, Kitajska). Vse celice smo kultivirali v RPMI 1640 mediju, dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), pri 37 ° C v navlaženi zraku, ki vsebuje 5% CO _{2. Celice v logaritemski fazi rasti smo uporabili za nadaljnje poskuse.}

rasklapanje EIF5A2 ali MTA1 malih interferenčne RNA (siRNAs)

The siRNA posebej proti EIF5A2 in MTA1 [16] in njihovo ne-ciljnih nadzor siRNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, ZDA) so kemično sintetiziranih za te študije. Je EIF5A2 siRNA sekvence so bile naslednje:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; in: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; brez ciljanja nadzor (NC1) siRNA: 5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 '). MTA1 siRNA sekvence (Target 2 siRNA, T2-siRNA), so bili: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') in FAM označene siRNA (AM4620) smo uporabili kot brez ciljanja nadzora siRNA (NC2 ).

Štiriindvajset ur po prevleka v šestih vdolbinami, so GC celice transfekciji s 100pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA ali nadzor siRNA uporabo Lipofectamine 2000 transfekcijske reagenta (Life Technologies, Carlsbad, CA, ZDA ) v skladu z navodili proizvajalca. Celice so bile pridelane v zahodni blot na 48 ur po transfekciji.

Gradnja plazmida in prehodni transfekciji

EIF5A2 izražanje vektor (PIRES2-EGFP-EIF5A2) smo sintetizirali Life Technologies. Celice so transfekciji s PIRES2-EGFP-EIF5A2 ali kontrolnega plazmida z uporabo Lipofectamine 2000 (Life Technologies) v skladu z navodili proizvajalca.

V realnem času kvantitativne RT-PCR

Total RNA smo izolirali s pomočjo TRIzola reagentov (Life Technologies) po protokolu proizvajalca. PCR smo izvedli z uporabo sekvence za EIF5A2: naprej: 5'AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; obratno: 5'GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'in sekvence za MTA1: naprej: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; obratno: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 ". PCR smo izvedli s pomočjo UltraSYBR Mešanica (CWbio.Co.Ltd) po protokolu proizvajalca. Reverzno transkripcijo smo izvedli s pomočjo PrimeScript RT Master Mix komplet (TAKARA Biotechnology Co. Ltd, Dalian, Kitajska). Proizvodi cDNA izpostavimo PCR v realnem času z uporabo kompleta SYBR Predmešanica Ex Taq II (TAKARA Biotechnology Co Ltd). PCR v realnem času smo izvedli v StepOnePlus realnem času PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), po naslednji program: 95 ° C za 10 minut, sledi 40 ciklov 95 ° C za 15 sekund in 60 ° C 1 minuto. GAPDH
mRNA v vsakem vzorcu je bila količinsko kot endogeno kontrolo.

odtisi

koncentracija Western Protein je količinsko, z uporabo BCA protein analiznega kompleta (Thermo Scientific Pierce). Natrijev dodecilsulfat poliakrilamidno gelsko elektroforezo (SDS-PAGE), je bila uporabljena za ločevanje celičnih lizatov. Proteine ​​smo prenesli na PVDF membrane in blokirali s tris-pufrom in 0,1% Tween 20 (TBST), ki vsebuje 5% goveji serumski albumin, ter nato inkubiramo z naslednjimi primarnimi protitelesi pri 4 ° C preko noči: kunčjega anti-EIF5A2 ali C- MYC (1: 1000; Epitomics, ZDA, CatalogȪ9-1 ali 1472-1), kunčjega anti-MTA1, -E-kadherina ali -vimentin (1: 1000, celična signalizacija, ZDA, Catalogȴ7, 3195 ali 5741 ), ali miško anti-GAPDH (1: 1000, santa Cruz, Catalog # sc-25778). Membrane speremo trikrat s TBST in inkubirali s hrenovo peroksidazo (HO), označenih s anti-zajec ali anti-mouse sekundarnih protiteles (1: 3000, Santa Cruz, ZDA, Catalog # sc-2004 ali sc-2005) 1 h pri sobni temperaturi. Beljakovinsko pasovi so vidne tudi s pomočjo ECL reagentov za odkrivanje (Pierce, ZDA). Relativne stopnje izraženosti beljakovin so preračunana na GAPDH.

Cell širjenje test

Širjenje HGC27 in MKN45 celic je bila preučena z uporabo mobilnega štetje Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japonska ) v skladu z navodili proizvajalca. Na kratko, 24 ur po transfekciji s siRNA ali plazmida smo celice zasejali z gostoto 1 x 10 ^{4 celic /vdolbino v 96-vdolbinami in kultiviramo pri 0, 24, 48 in 72 ur. Nato ob različnih časovnih točkah, je 10 u.l CCK-8 raztopino dodali v vsako vdolbino in inkubiramo 2 uri. Absorbanco smo prebrali pri 450 nm na čitalniku ploščo.}

Transwell testi

migracijski in invazivni sposobnost GC celic so odkrili s pomočjo 24-ter transwell celičnih kultur komore (velikost por 8.0μm, Costar , Cambridge, MA, ZDA) po navodilih proizvajalca. Za celično invazijo testom, vložna membrane so bile predhodno prevlečeni z Matrigelove (BD, San Diego, CA, ZDA). Za migracije celic testom, ni bilo uporabljeno Študiie. Po 24 urah po transfekciji smo celice zasejali v ustrezni gostoti (HGC27, 5 x 10 ^{5 /ml; MKN45, 1 x 10 7 /ml) v zgornji komori ter gojili v OPTI-MEM (GIBCO, ZDA) brez FBS za nadaljnjih 24 ur. Celice pustimo, da migrirajo v smeri RPMI 1640 mediju, ki vsebuje 20% FBS v spodnji komori. Ne-migracijski celic na zgornji površini membrane smo odstranili z bombažno konico, in migracijski celice pritrjena na spodnji površini membrane so bile določene s 4% paraformaldehida in obarvajo s H &E. Število napadel celice prešteli na petih naključno izbranih področjih pod mikroskopom.}

Imunohistokemija (IHC) obarvanje in ocenjevanje

IHC obarvanje je bila izvedena na 5 pm debela odsekov iz-parafin vgrajeni osebkov. Monoklonsko kunčjega anti-človeški EIF5A2 protitelesa (Epitomics, ZDA, CatalogȪ9-1), kunčjega anti-človeški MTA1 protitelesa (Cell signalizacijo, ZDA, Catalogȴ7) in PV-6000 sistem Polymer Detection (ZSBG-BIO, Kitajska), so bili uporabljena za obarvanje v skladu z navodili proizvajalca. Na kratko smo drsi z parafinski odsekov deparaffinized s ksilenom in rehidrirano z etanolom. Endogene peroksidaze aktivnost smo blokirali s 3% vodikovega peroksida 10 minut. Za pridobivanje antigenov so drsi-mikrovalovno obdelani in kuhamo v 0,01 M citratnem pufru (pH 6,0) 10 minut in nato inkubiramo z 0,1% tripsinom pri 37 ° C za 5 min. Drsniki inkubiramo z monoklonsko kunčjega anti-humanega EIF5A2 ali MTA1 protitelesa (1: 100 redčenje) 1,5 ure pri 37 ° C v navlaženi komori. Kot negativno kontrolo barvanja bila primarna protitelesa nadomeščen z nespecifično kunčjega IgG. Dva neodvisna patologi ocenili Imunohistokemijsko za EIF5A2 in MTA1. Semikvantitativno metodo sedaj je bila uporabljena s sklicevanjem na prejšnje študije. [7]

Statistična analiza

Vse analize so bile izvedene s pomočjo SPSS 12.0 programske opreme (Chicago, IL, USA). McNemarjevim testom smo uporabili za primerjavo EIF5A2 ali MTA1 barvanjem v človeški GC in sosednjih non-tumorskih vzorcev. Test hi-kvadrat smo uporabili za primerjavo razlike med kategorične spremenljivke, medtem ko je v paru, dvo-tailed Student je t
-tests so bili uporabljeni za primerjavo razlike med kategorične spremenljivke. Korelacija med EIF5A2 in MTA1 smo analizirali s testom razvrsti Spearman je. Za univariantne analizi preživetja, so krivulji preživetja zgrajeni po metodi Kaplan-Meier, in v primerjavi s testom Log-rank. Cox sorazmernih tveganj model z multivariatne analize smo uporabili za preiskavo neodvisnih napovednih dejavnikov. Vse
P vrednosti so dvostranski in P
vrednosti < 0,05 naj bi bile statistično značilne. Vse poskuse smo izvedli vsaj v tehničnih in bioloških treh izvodih.

Rezultati

EIF5A2 Izražanje v GC celic in tkiv in potrjevanje intervencijske

smo raziskovali izražanje EIF5A2 v pet GC celične linije in ovekovečena želodca sluznice epitelijskih celic linija GES-1 in vitro
tako QRT-PCR (sl. 1A) in zahodni blot analiza (sl. 1B). EIF5A2 protein v človeških tkivih GC je bila višja kot v parnih oddaljenih non-tumorskih tkiv (sl. 1C). Zaradi visoke ravni endogenega ekspresije EIF5A2 in relativno visoka učinkovitost transfekcije v HGC27, smo izbrali te celične linije za analizo RNAi in izbrali MKN45 celice za EIF5A2 uravnavanjem poskusih zaradi svoje relativno nizke EIF5A2 izražanja in visoka učinkovitost transfekcije.

Vsi trije siRNAs lahko učinkovito zatreti EIF5A2 izraz v HGC27 celic (sl. 1D, E). Uporabili smo siRNA
kot EIF5A2 usmerjeni siRNA (T1-siRNA) v naslednjih poskusih. EIF5A2 izraz signifikantno molekul s prehodno transfekcijo EIF5A2 plazmidov v MKN45 celic (sl. 1F, G). T2-siRNA lahko učinkovito zatiranje MTA1 izraza v HGC27 celic (sl. 1 H, I).

EIF5A2 ali MTA1 izraz stopnje vplivala na agresivnost GC celic in vitro

rasklapanje od EIF5A2 s T1- siRNA orožja močno zaviral celic (sl. 2A), migracije in invazija (sl. 2B) v HGC27 celic v primerjavi s tistimi iz starševskih celic. Uravnavanjem EIF5A2 s EIF5A2 plazmida izražanja spodbujati povečano proliferacijo (sl. 2C), migracije in invazija (sl. 2d) od MKN45 celic. Rasklapanje od MTA1 s strani T2-siRNA orožja močno zaviral celic (sl. 2E), migracije in invazija (sl. 2F) v HGC27 celic v primerjavi s tistimi iz starševskih celic.

Možna ciljna izražanje genov po EIF5A2 rasklapanje ali overexpression

po rasklapanje za EIF5A2 v HGC27 celicah, so molekul ravni epitelijske marker E-kadherina, medtem ko so vrednosti mezenhimskega marker vimentina navzdol reguliranih in skupaj z beljakovinami, povezane orožja ciklin D1 in ciklin D3 in metastaze -associated C-MYC in MTA1 downregulation (sl. 3A). V nasprotju s tem, ko EIF5A2 prekomerno v MKN45 celicah, je navzdol reguliranih izražanje E-kadherina, medtem ko je bila stopnja vimentina molekul in skupaj s ciklin D1, ciklin D3, C-myc in MTA1 uravnavanjem (sl. 3B). Rasklapanje ali čezmernim EIF5A2 ni pomembno vplival na MMP9 izražanja v HGC27 in MKN45 celic (sl. 3A, B).

Združenje EIF5A2 in MTA1 izraz z clinicopathological funkcij pri bolnikih z GC

pozitivni signali EIF5A2 bila pretežno nahaja v citoplazmi in jedru tumorskih celic, medtem ko so MTA1 signali predvsem lokalizirana v jedru tumorskih celic (sl. 4). vrednosti imunskim barvanjem 0-3 smo definirali kot običajni ravni ekspresije EIF5A2 ali MTA1, medtem ko je bil imunskim barvanjem vrednosti 4-12 opredeljena kot prekomerno EIF5A2 ali MTA1. EIF5A2 overexpression je bilo ugotovljeno v 75 osebkov tumorjev, v primerjavi z le sedem od 160 izravnanih sosednjih non-tumor sluznice tkiva ( P
< 0,001). Predstavnik IHK obarvanja EIF5A2 v moderately- ali slabo diferencirano adenokarcinomom želodca, plovilo invazijo tumorskih celic in non-tumorsko tkivo je prikazano na sliki. 4A, B, C in D, v tem zaporedju. Od 160 analiziranih primerih, je bilo 70 (43,75%) pozitiven MTA1, Statistična analiza vzorcev izražanja je pokazala, da obstaja pozitivna korelacija med EIF5A2 in MTA1 izražanja (r = 0,510, P
< 0,001) . Tipične za barvanje slike za prekomerno EIF5A2 in MTA1 v želodčni adenokarcinom bile prikazane na sl. 4E in 4F.

Kot je prikazano v tabeli 1, so bile tako EIF5A2 in MTA1 prekomerno pozitivni korelaciji z več fazi pT ( P
= 0,018 in P
= 0,042) pN faza ( P
= 0,037 in P
= 0,020) in pozitivni lymphovascular invazija ( P
= 0,016 in P
= 0,044), ker niso bile povezane z drugimi clinicopathological funkcij.

Povečana EIF5A2 ali MTA1 izraz povezana s slabšim preživetjem v GC bolnikov

na zadnjem spremljanju, je 75 od 160 bolnikov je umrlo. Od tega je 73 ljudi umrlo zaradi tumorja ponovitve. Analiza je Kaplan-Meier je pokazala, da je bilo tako 5-letno skupno preživetje (OS) in preživetje (DFS) za prevelike skupine EIF5A2 brez bolezni, krajša od tiste, za normalno EIF5A2 izraz skupine ( P
< 0.001 in P
= 0.001, sl. 4G, H). Dosledno, bolniki z MTA1 prekomerno prikaže slabo prognozo za OS in DFS ( P
< 0,001 in P
= 0,001)

Spremenljivke s pomenom v univariantne analizo. metode Kaplan-Meier so bili vključeni v multivariacijski analize Cox regresija. Kot je razvidno iz S1 tabeli in S2 tabeli, multivariatna analiza ugotovila, da je bil čezmernim EIF5A2 neodvisen dejavnik, ki vpliva tako OS (razmerje ogroženosti 1,831; 95% CI 1.135 do 2.857, P
= 0.012, S1 tabela) in DFS (razmerje ogroženosti 1,880, 95% CI1.177 na 3.002, P
= 0.008, S2 tabela) bolnikov, ki so prejemali kurativno resekcijo za GC. Vendar pa prevelike količine MTA1 ni dalo neodvisen napovedni pomen za OS in DFS v multivariatne analize.

Pogovor

Evkariontski začetek faktor 5A 2 (EIF5A2) je lokaliziran na kromosomske regije pogosto ugotovilo za kromosomsko nestabilnost v PK in mnoge druge oblike raka, 3q. [17-20] EIF5A2, kot eden od le dveh izo oblik EIF5A družine, se potrdi kot onkogenih beljakovin in je lahko tudi pomemben biomarkerjev za prognozo in terapevtskega cilja veliko različnih vrst človeških tumorjev. [21] Čeprav je prejšnji raziskavi so proučevali EIF5A2
izražanje genov v osnovnem GC, trenutna študija zagotavlja prvi dokaz o kliničnem pomenu EIF5A2 izražanja v človeškem GC in njeno morebitno vlogo v ureditev GC celic agresivnosti. [22]

najprej smo izvedli EIF5A2 rasklapanje in Čezmerno poskusi in vitro
. Rezultati so pokazali, da je zatiranje EIF5A2 v HGC27 celic je povzročilo znatno znižanje v celično proliferacijo, migracijo in invazije, medtem ko je njegova Povecanje v MKN45 celicah povzročila obratno. Ti rezultati so v skladu s predhodnimi ugotovitvami v drugih tumorjev. [8, 10, 23] Prav tako smo ugotovili, da MTA1 rasklapanje v HGC27 celic močno zaviral celične proliferacije, migracij in invazijo. Toda mehanizem, s katerim EIF5A2 krepi GC celic agresivnost še ni znan.

Zato smo izvedli nadaljnje študije o možnih ciljev EIF5A2 in vitro
. Naši rezultati so pokazali, da EIF5A2 pozitivno reguliran ciklin D1 in ciklin D3, ki igrajo pomembno vlogo v GC celično proliferacijo in regulacije celičnega cikla. [24, 25] Vsi ti rezultati podpira hipotezo, da EIF5A2 spodbuja proliferacijo GC celic z uravnavanjem ciklin D1 in ciklina D3. Ob istem času prejšnje študije so pokazale, da EIF5A2 pospešuje celično invazijo /metastaz in epitelne-mezenhimskih prehoda (EMT) z aktiviranjem MTA1 /C-myc v kolorektalnega raka. [8] MTA1 in C-MYC, kot tudi programom EMT, so sodelovali tudi pri regulaciji GC metastaz. [26-28] zato smo preučiti MTA1, C-MYC in dva-EMT povezana označevalci, E-kadherina in vimentin. Naše raziskave so pokazale, da EIF5A2 pozitivno reguliran MTA1, C-MYC in vimentin in negativno regulirani E-kadherina. Vsi ti rezultati kažejo, da bi lahko EIF5A2 regulirati migracije celic in napad z uredbo MTA1, C-MYC in EMT in vitro
, vendar so nadaljnje študije so potrebne za preiskavo natančne mehanizme.

Rezultati trenutnega študija je tudi pokazala, da je bila EIF5A2 beljakovine v pozitivni korelaciji s stopnjo pT in stopnji pn. Opazili so tudi človeškega raka na jajčnikih podobni rezultati. [5] Ti rezultati kažejo, da je EIF5A2 lahko povezane s tumorsko invazijo in bezgavkah metastaze v nekaterih vrstah človeških raka, vključno z GC. Bolj zanimivo je, da v sedanji študiji so EIF5A2 čezmernim najdemo tudi v preplavljajo rakave celice (plovilo invazijo), in čezmerno EIF5A2 beljakovin v primarnem GC tkiva v korelaciji s prisotnostjo lymphovascular invazijo. V skladu z rezultati dobljenimi v prejšnjih študijah drugih človeških rakavih bolezni, vključno epitelijskih tumorjev jajčnikov, karcinom mehurja, pljučni rak, in kolorektalnega raka, prekomerno iz EIF5A2 v trenutni študiji so v korelaciji s slabo preživetja bolnikov z GC. [5, 8, 29] Poleg tega, multivariatna analiza je pokazala, da je EIF5A2 protein neodvisen napovednik za slabo preživetje pri bolnikih z operacijo za GC.

MTA1, kot-metastaz povezana gena kandidatke, so dokazali, da igrajo ključno vlogo pri želodčni rak celic agresivnost. [27] Čezmerno MTA1 je bistveno povezan s slabo prognozo pri bolnikih pN0 GC. [30] sedanja študija je pokazala, da je EIF5A2 izraz v pozitivni korelaciji z MTA1 izražanja v človeških GC tkivih. Imunohistokemični analizi združili vitro študije so pokazale, da lahko EIF5A2-MTA1 os igrajo pomembno vlogo v želodcu agresivnost raka.

Če povzamemo, rezultati tekočega študije so pokazale, da so prevelike količine EIF5A2 tesno povezana z GC celično proliferacijo, migracijo in invazija prek-metastaz, povezanih proteinov MTA1. Hkrati lahko EIF5A2 pomembno pri regulaciji EMT v GC. Čezmerno EIF5A2 je lahko neodvisen dejavnik napovedujejo slabo preživetje in privlačen terapevtski cilj za GC, vendar so potrebne nadaljnje študije.

Podpora Informacije
S1 tabelo. Analiza dejavnikov, povezanih s celokupno preživetje (OS)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 tabeli. Analiza dejavnikov, povezanih z preživetja brez bolezni (DFS)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Priznanja

Avtorji bi rad zahvalil gospodu De-Tian Wang, S. Yu-Feng Luo in profesorja Pei Gu za njihovo tehnično podporo.

• Plos ONE: Vpliv intratumorska ekspresivnih nivojev fluoropirimidinski-presnovnih encimov o zdravljenju izidov adjuvantne S-1 terapije želodčnega raka
• Plos ONE: Aberrant CCR4 izražanja je vključena v tumorska invazija na bezgavkah negativni človeške želodčne raku