Plos ONE: Vpliv intratumorska ekspresivnih nivojev fluoropirimidinski-presnovnih encimov o zdravljenju izidov adjuvantne S-1 terapije želodčnega raka

Povzetek

Analizirali smo raven izražanja, fluoropirimidinski presnovnih encimov (timidilatne sintaze [TS], dihidropirimidin dehidrogenaza [DPD] timidin fosforilaza [TP] in orotat fosforiboziltransferaze [OPRT]) za prepoznavanje potencialnih biomarkerjev povezanih na izidih zdravljenja pri bolnikih z rakom želodca bolnikov (GC), ki prejemajo adjuvantno s-1 kemoterapijo. V tej študiji so bili vključeni 184 bolnikov, ki so prejemali kurativno želodca (D2 bezgavko razkosavanjem) in adjuvans S-1. Imunohistokemija in kvantitativno reverzno transkripcijo verižne reakcije s polimerazo smo izvedli merjenje beljakovin in ravni mRNA TS, DPD, TP in OPRT v tumorskem tkivu. V univariantne analizi, je bila nizka intratumorska DPD protein izraz, povezan slabše 5-letno preživetje brez bolezni (DFS, 78% proti 88%; P = 0,068). Nizka intratumorska DPD mRNA izraz (1. [najnižja] kvartil) se je nanašala tudi na slabše DFS (69% proti 90%; P < 0,001) v primerjavi z visoko intratumorska DPD izražanja (2. do 4. kvartile). V multivariatnih analizah je nizka intratumorska DPD protein ali mRNA izraz, povezan s slabšo DFS (P < 0,05), neodvisno od drugih kliničnih spremenljivk. TS, TP, in OPRT izražanje vrednosti niso bile povezane z rezultati zdravljenja. Smrt ni hematoloških toksičnosti (razreda ≥ 3) so imeli trend pogostejšega razvoju pri bolnikih z nizko intratumorska DPD mRNA izražanja (29% v primerjavi s 16%; P = 0,068). Skratka, bolniki GC z visoko intratumorska DPD izražanja niso imeli slabše rezultate po adjuvantno S-1 zdravljenja v primerjavi s tistimi z nizko izražanje DPD. Namesto tega je bila nizka intratumorska DPD izraz, povezan s slabo DFS

Navedba. Kim J-Y, Shin E, Kim JW Lee HS Lee D-W, Kim S-H et al. (2015) Vpliv intratumorska ekspresivnih nivojev fluoropirimidinski-presnovnih encimov o zdravljenju izidov adjuvantne S-1 Zdravljenje želodčnega raka. PLoS ONE 10 (3): e0120324. doi: 10,1371 /journal.pone.0120324

Akademska Urednik: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, UNITED STATES

Prejeto: 13. november 2014; Sprejeto: 20. januar 2015; Objavljeno: 20. marec 2015

Copyright: © 2015 Kim et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v prispevku

Financiranje:. Ta študija je bila delno podprta z raziskovalne štipendije iz Seoul National University Bundang Hospital raziskovalnega sklada (02-2014-019) in Jeil Pharmaceutical Company (Seoul, Koreja). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi. Ta študija je bila s Jeil farmacevtsko podjetje delno financira v obliki financiranja raziskav na Keun -Wook Lee. Drugi avtorji poročajo, ni navzkrižja interesov. Ni patenti, izdelki v razvoju, ali se tržijo proizvodi deklarirajo. To ne spremeni pripadnost avtorjev vseh PLoS ONE politike o izmenjavi podatkov in materialov, kot je podrobno na spletu v priročniku za avtorje.

Uvod

Rak želodca (GC) je peti najpogostejši rak in tretji vodilni vzrok smrti zaradi raka po vsem svetu. Približno polovica primerov pojavijo v vzhodni Aziji [1]. Operacija je zdravljenje izbire pri lokalizirano GC in D2 seciranju, se šteje, da je standardni pristop. Kljub D2 seciranje, je ponovitev navedeno v več kot 40% bolnikov z napredovalim stadijem GC po samo operacijo [2, 3]. Pred kratkim sta prihodnje študije so pokazale, da je adjuvans kemoterapija za izrezanega GC učinkoviti pri zmanjševanju stopnjo ponovitve [2, 3].

S-1 je oralna sredstvo, ki vsebuje tegafur (predzdravilo fluorouracil), gimeracil (an inhibitor dihidropirimidin dehidrogenaze [DPD]) in kalijevega oxonate (inhibitor 5-fluorouracil [5-FU] v prebavnem traktu) [4]. Adjuvans Kemoterapija Trial TS-1 za želodca raka (AKTI-GC) je pokazala, da adjuvans S-1 kemoterapijo za 1 leto zmanjšuje tumorja ponovnega pojava bolezni pri bolnikih z kurativno odstranjenimi GC [3]; stopnja preživetja brez recidiva po 5 letih je bilo 65,4% v adjuvantno S-1 skupine in 53,1% v le-kirurgije skupine (nevarnost razmerje [HR] 0,653; 95% interval zaupanja [IZ], 0,537-0,793). Na podlagi teh rezultatov, adjuvans S-1 kemoterapijo se trenutno pogosto uporablja za preprečevanje GC ponovitve v vzhodnoazijskih državah [5-7].

timidilatne sintaze (TS), timidin fosforilaza (TP), orotat fosforiboziltransferaze (OPRT ) in DPD so povezane s fluoropirimidinom presnove. Številne študije kažejo, da imajo stopnje izraženosti teh-fluoropirimidinski presnovnih encimov združenja z rezultati preživetja pri bolnikih z metastatskim GC prejemajo paliativno kemoterapijo na osnovi S-1 [8-10]. Vendar te študije niso konsistentni rezultate na napovedno vrednost teh encimov v paliativni kemoterapijo na osnovi-S-1, ki so lahko zaradi majhnega števila bolnikov in razlik v S-1, z režimom, ki se uporabljajo pri raziskavah. Do zdaj so raziskave o odnosu med izražanjem-fluoropirimidinski presnovnih encimov in rezultatov adjuvantno S-1 zdravljenja v PK bilo malo. Zato smo analizirali profile beljakovin in mRNA Izražanje-fluoropirimidinski presnovnih encimov (TS, DPD, TP in OPRT) opredeliti oznake, povezane z rezultati zdravljenja z adjuvantno S-1 kemoterapijo pri bolnikih GC.

Materiali in metode

populacijo

Uporaba raka GC kohorte bolnik, ki je bil naprej vzdržuje na Seoul National University Hospital Bundang [5, 6], je bila ta študija naknadno izdelana. V prospektivni kohorte, vsi bolniki doživel kurativno želodca z D2 seciranje in so bili zdravljeni z adjuvantno S-1 kemoterapijo. Bolniki izpolnjene naslednje upravičene merila: histološko potrjeno gastroezofagealnem prehodu ali želodčni adenokarcinom; patološki faza II-III z Skupni odbor ameriškega raka (AJCC, 7 ^{th izdaja); Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) stanje zmogljivosti (PS) 0-2; in ustrezno kostnega mozga, ledvic in jeter. ([11], in sicer, N2 bezgavkah metastaze, ki ga japonski klasifikaciji počivališču) so bili vključeni tudi dve bolniki z odpovedjo IB in dodatnimi dejavniki tveganja.}

Pri bolnikih, ki so šli skozi želodca med novembrom 2006 in septembrom 2010 je bilo vpisanih (N = 184 ). V tej študiji so prejeli pisno obveščeni soglasja pri bolnikih, za uporabo arhiviranih tumorskih tkiv in kliničnih podatkov. Pregled odbor Institucionalni za Seoul National University Bundang bolnišnici odobril te študije. (IRB številka: B-1205 /154-006)

Zdravljenje in toksičnost ocena

S-1 je podana ustno na 4 tedne, nato 2 tedna. Trajanje S-1 zdravljenja je bilo načrtovano, da je 1 leto, če ni bilo dokazov o tumorja ponovitve, nesprejemljivih neželenih učinkov, ali zavrnitev bolnikov. Začetnega odmerka in modifikacija N-1 odmerjanja med zdravljenjem smo določili kot v prejšnjih poročilih [5, 6]. Toksičnost je bila ocenjena v skladu z merili National Cancer Institute Skupno toksičnost (različica 3.0).

Intenzivnost odmerek (DI) je bila opredeljena kot razmerje med celotno S-1 odmerek na kvadratni meter bolnika, deljeno s celotna S-1 trajanje zdravljenja. Intenzivnost Relativna odmerek (RRI) je bila izračunana tako, da se prejeto DI z načrtovano DI.

Imunohistokemija (IHC)

Pred obarvajo Hematoxylin in eozinom diapozitivi so bili pregledani, ter po en predstavnik formalina fiksno -parafin vgrajeni je bil izbran (FFPE) arhivski blok. Tkivo zaporedji bloki so bili pripravljeni, kot je opisano v prejšnji raziskavi (SuperBiochips Laboratories, Seoul, Korea) [8]. Uporabljene so bile naslednje osnovne protitelesa: anti-človeške TS (klon TS106, miška monoklonska, Thermo znanstvena; 1:70 razredčitev), anti-človeški OPRT (klon 2F5, miška monoklonska, Abnova, razredčenje 1: 1000), anti-človeški TP (. klon P-GF 44C, miška monoklonska, Thermo znanstvena; 1: 500 redčenje) in anti-človeški DPD (klon ERP8811, zajec monoklonsko; Abcam; 1: 500 redčenje). Protitelesa vezavo smo zaznali uporabo avidin-biotin-peroksidaza kompleks (Universal Elite ABC komplet PK 6200; Vectastain, Burlingame, Kalifornija, ZDA) 10 min in raztopino diaminobenzidine tetrahidroklorid (Kit HK 153-5K; BIOGENEX, San Ramon, CA, ZDA). Oddelki so jih nasprotno z 0,1% hematoksilin, dehidrirani, in vgrajeni. Obarvanje je pregledal dve neodvisni preiskovalci slepo na klinični izid. intenzivnosti obarvajo so semi-kvantitativno merjeno pri 200-kratni povečavi in ​​označimo kot negativno (rezultat = 0), šibko (točkovni = 1), zmerno (točkovni = 2) ali močno (število točk = 3). Ocenjen je bil tudi odstotek imunoreaktivnih celic. Neverjetna IHC je bila izračunana kot sledi:. Kakšen je bil rezultat barvanja intenzivnosti smo pomnožili z odstotkom obarvajo površino vzorca tumorja

Kvantitativna reverzno transkripcijo verižne reakcije s polimerazo (QRT-PCR)

nivoji mRNA ekspresije genov kvantificiramo s QRT-PCR. RNA (500 ng) iz FFPE tkiva je bil izpostavljen cDNA sinteze po amfiRivert Platinum cDNA zbirno Master Mix (GenDEPOT). Sedem geni (štiri fluoropirimidina procesi geni in tri referenčne genov) so bili pred razširja na končni razredčitvi 0,05 × prvotne koncentracije TaqMan testa (Applied Biosystems Life Technologies). pogoji termo kolesarske so bili naslednji: 1 cikel 95 ° C (10 min), ki ji sledi 14 ciklov 95 ° C (15 s) in 60 ° C (4 min). Po ciljni ojačevanje smo vzorce razredčiti v razmerju 1: 5 z vzmetenja DNA pufrom, nato pa qPCR je bila izvedena na Fluidigm 48.48 dinamično polje z uporabo sistema Biomark HD po protokolu proizvajalca. Vzorce smo izvedli v treh izvodih. Tri referenčnih genov (ACTB GAPDH in FTL) so bila porabljena za normalizacijo podatkov genske ekspresije. Referenčne geni so bili izbrani na podlagi njihove nizke variabilnosti izražanja v naših prejšnjih podatkov mikromrež (podatki niso prikazani). Za normalizacijo podatkov QRT-PCR, pomeni prag cikla vrednosti (CT) so bile pretvorjene v relativnih izraz vrednot (-ΔCt) z odštevanjem povprečje referenčnih genov, kjer vsaka enota odraža z 2-kratno povečanje izražanja. Uporabljene sonde so bili naslednji: TS (Hs00426586_m1), OPRT (Hs00923517_m1), TP (Hs01034319_g1), DPD (Hs00559279_m1), ACTB (Hs01060665_g1), GAPDH (Hs02758991_g1) in FTL (Hs00830226_gH); Podrobnejše informacije so na voljo na http://www.appliedbiosystems.com (Applied Biosystems Life Technologies).

Statistična analiza

Razlike v kliničnih značilnosti so primerjali s pomočjo χ2-testi, t
-tests ali Mann-Whitney U
preizkus. χ2-testi so bili uporabljeni v primerjavo frekvenčne porazdelitve v sorodnih-S-1 toksičnih učinkov med različnimi skupinami. Bolezen preživetje brez (DFS) je bila izračunana od datuma operacije na čas prve ponovitve ali smrti iz kateregakoli vzroka. Celokupno preživetje (OS) je bil opredeljen kot intervalu od kirurgije do smrti iz kateregakoli vzroka. Metoda Kaplan-Meier je bila uporabljena za analizo DFS ali OS. Univariatne in multivariatne analize na DFS ali OS so bile izvedene s pomočjo testov na log-ranga in Cox sorazmerna nevarnosti regresijski testi oz. Dvostranski vrednosti P < 0.05 so pomembna. Vse analize podatkov so bile izvedene s pomočjo IBM SPSS Statistics 21 za operacijski sistem Windows (IBM Corp., Armonka, NY, ZDA).

Rezultati

bolnikov značilnosti in dostava S-1 kemoterapijo

izhodiščne značilnosti 184 bolnikih, so prikazani v tabeli 1. srednja starost je bila 57 let (razpon 30-79 let). Laparoskopska želodca je bila opravljena pri 50% bolnikov, in delež bolnikov s stopnjo III bolezni je bil 55%. Mediana spremljanja trajale 47,0 mesecev (razpon, 3.5-81.8 mesecev). Med spremljanjem, so tumor ponovitev in smrt potrjena v 29 (16%) in 22 (12%) primerih, v tem zaporedju. Petletna DFS in OS stopnje v vseh bolnikov je bilo 83% (sl. 1 (A)) in 87%, v tem zaporedju. Kot nadaljnje trajanje ni bilo dovolj za nadaljnjo analizo OS, smo izvedli analizo preživetja le za DFS. DFS rezultati po kliničnih spremenljivk so predstavljeni v tabeli 1, sl. 1 (B), in S1 slika.

Načrtno 1-letno zdravljenje z S-1 je bila končana v 139 bolnikih (76%), in povprečno število dobavljenih S-1 ciklov kemoterapije je 7,4 (95% CI, 7,0-7,8). Sredina in mediana RDIs v vseh S-1 terapije ciklov je bilo 77% (95% CI, 73-81) in 88% (razpon 4-100), oz. S-1 obravnava je bila na splošno sprejemljivo in profili toksičnosti, so predstavljeni v S1 tabeli

Vpliv izražanjem-fluoropirimidinski presnovnih encimov na izid zdravljenja. Univariatna analize

Od 184 bolnikov, IHC je bila uspešna pri 183 bolnikih. Postavili smo srednjo vrednost IHC točk za vsako beljakovin (TS, OPRT, TP in DPD) kot mejne vrednosti za razdelitev bolnikov v dve skupini. Medtem stopnje izraženosti štirih proteinov ni pomembno povezana z DFS (tabela 2), z nizko stopnjo izraz DPD (rezultat IHC < 10 [cut-off vrednost; mediana]) so pokazali tendenco slabše 5-letno DFS (78% vs. . 88% P = 0,068;. Slika 2 (A)). Poleg tega so bolniki z višjo TP izražanja imeli tendenco, da imajo krajše trajanje DFS, kot tiste, ki nimajo TP izražanja (78% proti 87%; P = 0,094) (točk IHC >; 0 [mediana cut-off vrednost]). Stopnje izraženosti TS in OPRT imela nobene povezave z DFS izidov (P = 0,914 in 0,109, v tem zaporedju).

testi QRT-PCR so bili uspešno opravljeni v 179 bolnikov. Kot v IHC testov, je bila srednja vrednost koncentracije mRNA izražanja posameznih genov določene kot mejne vrednosti za skupine. Med štirimi genov, le nivo izražanja DPD mRNA pokazala trend, ki imajo odnos do DFS rezultatov; bolniki z nižjo mRNA izražanja DPD imeli slabše DFS kot tisti z višjo DPD izražanja (P = 0,067;. sliki 2 (B)). nivoji mRNA izraz iz TS, OPRT in TP genov niso bili povezani s DFS (tabela 2). Dalje, smo razdeljeni mRNA ravni izražanja DPD na kvartile naj preuči, ali obstaja povezava med odmerkom in odzivom med ravnmi izražanja DPD genskih in rezultatov preživetje. Zanimivo je, da le skupina pacient v najnižjem DPD genske ekspresije kvartila pokazala slabše DFS drugim kvartilih, vendar niso opazili nobenih razlik v DFS stopnjah med 2 ^{nd, 3 rd, in 4 th kvartilih ( fig. 2 (C)). Zato smo razdeljeni bolnike v dve skupini, ki uporabljajo to mejno vrednost (1 st četrtina [najnižje mRNA izraz DPD] v primerjavi z drugimi Kvartili [več DPD mRNA izraz vključno z nd, 3 rd 2, in 4 th kvartilih]) v naslednjih analizah (slika 2 (D.), tabela 2)}

Vpliv izražanjem-fluoropirimidinski presnovnih encimov na izid zdravljenja. z modelom analize

Med kliničnimi spremenljivk, dejavniki, ki so pokazali, p < 0.10 v univariatne analize za DFS (starost [< 60 let, v primerjavi z 60-69 let v primerjavi z ≥ 70 let; P = 0,003], kirurška metoda [laparoskopski vs. odprti; P = 0,082], limfna invazija [no vs yes; P = 0,068], venska invazija [no vs ja, so bili vključeni Tabela 1) v analizah multivariatna; P = 0,045], in stopnja [IB /vs. II III; P = 0,012]. Med proteini ali geni, povezanih s fluoropirimidinom metabolizma, tisti z P < 0.10 v univariatne analize za DFS bila vključena tudi v multivariatne analize (tabela 2). Kot je prikazano v tabeli 3, nizka DPD protein izraz raven (ocena IHC < 10, HR, 2,32; 95% IZ, 1,08-4,96; P = 0,030) in nizko DPD izražanje genov (1 ^{st četrtina [najnižje četrtina] , HR, 3,67; 95% iZ, 1,67-8,03; P = 0,001), so se nanašali na slabše DFS, ne glede na druge klinične spremenljivk. Starejša (≥ 70 let) in višji stopnji so tudi neodvisno povezano s slabim DFS.}

Razmerje med ravnjo DPD izražanja in odpornost na S-1 terapijo

A pozitivna korelacija med DPD IHC rezultati in stopnje izraženosti mRNA opazili (P = 0,022), čeprav so razponi IHC točk v obeh skupinah (1 ^{st kvartil DPD mRNA izražanja [DPD IHC ocena: srednji, 0, razpon, 0-200] v primerjavi z drugo Kvartili [DPD IHC ocena: mediana, 10, območje, 0-300]) prekrita v znatnem deležu primerov (S2 sl)}

Ni razlik v s-1 RRI ali frekvenčnem toksičnost (hematoloških ali ne-. hematoloških) od s-1 obravnavanja bolnikov so opazili z nizko (< 10) in visoke (≥ 10) DPD IHC točk [Tabela A v S2 tabeli]. Vendar pa je v primerjavi z bolniki z višjimi intratumorska ravni DPD mRNA (2 ^{nd do 4 th kvartilih), bolniki z najnižjim DPD mRNA (1 st četrtina) je pokazala tendenco razvoja resne ne-hematološke toksični učinki (≥ 3. stopnje) bolj pogosto, čeprav je statistično nepomembna (29% proti 16%; P = 0,068); Vendar je bila incidenca ≥ stopnje 3 hematoloških toksičnih učinkov ni razlikoval med obema skupinama. Poleg tega, čeprav je statistično nepomembna, je bil delež bolnikov, ki so med adjuvantno kemoterapijo vzdržujejo S-1 RDI ≥ srednjo vrednost (87,8%) nižje pri bolnikih v najnižjem kvartila DPD mRNA izražanja kot pri bolnikih v drugih kvartilih (40% proti 54%, P = 0,111;. Tabela B S2 tabeli)}

Pogovor

v tej študiji smo raziskali odnos med intratumorska izražanjem-fluoropirimidinski presnovnih encimov in rezultate preživetja adjuvantno s -1 kemoterapijo. Visoka intratumorska DPD izraz ni bil povezan s slabše rezultate preživetja; Namesto tega je bila nizka izraz DPD povezana z neugodnim DFS pri bolnikih GC zdravljenih z adjuvantno S-1therapy. Stopnje izraženosti drugih encimov ni bilo povezano s DFS. V naši raziskavi, so bile stopnje izraženosti of-fluoropirimidinski presnovnih encimov ocenjena na dva načina, in sicer IHC in QRT-PCR.

DPD je začetna in hitrost, ki omejuje encim v razgradnjo 5-FU. Številne predklinične študije so pokazale, da je spodnja intratumorska nivo DPD mRNA ekspresije ali aktivnosti, povezane z boljšim odziv na 5-FU in da je višja raven DPD v tumorskih celicah, povezane s 5-FU odpornosti [12-14]. so opazili tudi podobne ugotovitve pri bolnikih z različnimi čvrstimi tumorji, vključno z GC [14-22]. Učinkovitost fluoropirimidinom kemoterapije pri bolnikih GC se je izkazalo, da so odvisni od intratumorska ravneh DPD izražanja, bodisi v paliativne [22], adjuvans [19-21], ali neoadjuvantni [16-18] nastavitve.

Med trije deli obsegajo s-1, ki je gimeracil uporablja kot inhibitor DPD vzdrževati daljša koncentracija 5-FU v tumorskih tkiv [23]. Čeprav so nekatere študije poročajo, da je učinkovitost S-1, ki ga intratumorska ravni DPD izražanja kot drugi fluoropirimidine [24, 25] vpliva tudi, da je večina raziskav dosledno kažejo, da je učinek S-1 zdravljenja ne vpliva intratumorska DPD ravni izraz, zlasti v GC [8-10, 19, 26-29]. Prejšnje študije kažejo, da je S-1 bolj učinkovito kot 5-FU in drugih fluoropirimidine v tumorjih z visoko DPD izražanja [19, 25, 28, 29]. Razmerje med učinkovitostjo kemoterapije, ki vsebuje S-1 in izražanjem-fluoropirimidinski presnovnih encimov so raziskovali v GC [8-10]; Vendar je večina teh študij vključenih majhno število bolnikov in so opravili na bolnikih z metastatskim GC, ki so prejemali različnih režimih, ki vsebuje S-1 kot paliativno zdravljenje. Zato prejšnje rezultatov ni mogoče posplošiti na bolnikih, GC, ki opravijo kurativno operacijo in adjuvantno S-1 kemoterapijo

V naši raziskavi, je bil skupni izid zdravljenja D2 želodca sledi adjuvantno S-1 kemoterapijo odlično.; 5-letno DFS stopnje bolnikih z odpovedjo IB /II in III je bilo 91% in 77%, v tem zaporedju (tabela 1). Med štirimi analiziranimi encimov (TS, DPD, OPRT in TP), le raven izraz DPD povezan z izidom zdravljenja z S-1. DPD protein ali mRNA prekomerno ni bilo povezano s slabšo DFS pri bolnikih, GC, ki prejemajo adjuvantno S-1 terapijo; Ta ugotovitev je v skladu s prejšnjimi poročili, da je S-1 učinkovit pri tumorjih z visoko intratumorska DPD [19, 25, 29, 30].

Zanimivo je, da v naši kohorti bolnikov, nizka intratumorska DPD izraz je bil povezan s slabše DFS, v primerjavi z visoko ekspresijo DPD. Ta ugotovitev je bila nepričakovana in zmedeno, ker, dokler ne bomo dokončno analiz podatkov o tej študiji, ni prišlo do študija o povezavi med-fluoropirimidinski presnovnih encimov in rezultatov adjuvantno S-1 kemoterapije pri bolnikih z GC. Vendar pa je skoraj ob istem času, ko smo poročali o rezultatih te študije na študijskem srečanju [31], je bila študija s skoraj enako zasnovo z našimi poročajo AKTI-GC raziskovalcev [32]. V tej študiji so AKTI-GC raziskovalci analizirali intratumorska izražanje 4 genov (TS, DPD, OPRT in TP), pri bolnikih, vključenih v aktih-GC in raziskali njihove morebitne vloge kot biomarkerjev za izide zdravljenja. Tako kot nas, AKTI-GC preiskovalci tudi, da je nizka DPD mRNA izraz v tumorjih, povezane neugodne DFS; pri bolnikih, GC, ki so prejeli adjuvantno S-1 kemoterapijo (N = 401), so imeli bolniki z nizko intratumorska DPD ekspresijo mRNA slabše 5-letno DFS (60,8% v primerjavi z 70,8%; P = 0,039) in OS (66,8% v primerjavi s 78,0 %; P = 0,015), kot tisti z visokim DPD ravni izražanja [32]. Zato študije iz obeh aktov-GC skupine in naši preiskovalci dosegla nepričakovano enak rezultat iz neodvisnih skupin bolnikov.

Kot je le pri bolnikih, ki so prejeli S-1 zdravljenja so bili vključeni v to študijo, je še vedno negotovo, ali intratumorska raven DPD izraz je napovedno ali prognostični dvojno podajo pri bolnikih, GC, ki prejemajo adjuvantno S-1 terapijo. Vendar pa, kot je bilo treba AKTI-GC kontrolno skupino bolnikov, ki so šele na operacijo brez adjuvantne kemoterapije, akti,-GC raziskovalci so pokazali, da je korist adjuvantno S-1 zdravljenja večinoma omejeni na bolnike GC z visoko intratumorska DPD mRNA izražanja [ ,,,0],kirurgija sledijo adjuvans s-1 zdravljenju odvisnosti od samega kirurgiji; HR v OS, 0,52 (95% IZ; 0,38-0,72)]; V nasprotju s tem pa pri bolnikih z nizko intratumorska DPD izražanja, zdelo, da imajo manj koristi [operacijo, ki ji sledi adjuvans S-1 zdravljenja odvisnosti od samo operacijo adjuvans S-1 terapija; HR v OS, 0,85 (95% IZ; 0,56-1,28)] [32]. Zato je glede na rezultate študije iz obeh AKTI-GC preiskovalci in nas, previdno kažejo, da bi lahko bila intratumorska DPD mRNA izraz napovedni biološki marker učinkovitosti adjuvantno S-1 kemoterapijo pri bolnikih GC po D2 želodca. Vendar pa je treba naš predlog, da je treba dodatno raziskati v prihodnjih potencialnih poskusov.

Če intratumorska raven DPD izraz je napovedni biološki marker za adjuvantno S-1 kemoterapijo pri bolnikih GC, razloge, zakaj nizka intratumorska DPD izraz daje slabše DFS izid pri bolnikih, GC, ki prejemajo adjuvantno S-1 terapijo bo zahtevalo dodatne preiskave. Prvič, čeprav avtorji iz skupine za AKTI-GC ni preučila povezavo med profili toksičnosti ali RRI v S-1 in ravni intratumorska DPD izražanja [32], smo analizirali razlike v frekvencah toksičnosti in RRI v S-1 v skladu z se intratumorska stopnje izraženosti DPD. Nismo našli nobene razlike v toksičnih in RRI med DPD-visoko in DPD nizkimi bolnikov z oceno IHC. Čeprav statistično nepomembna, bolniki z najnižjimi intratumorska ravni DPD mRNA (1 ^{st četrtina), so pokazali tendenco več ne-hematološke toksičnosti ≥ stopnje 3 (29% v primerjavi s 16%, P = 0,068) in se je zdelo, da imajo nižjo toleranco za s-1 kot bolniki z višjimi ravnmi DPD mRNA (S2 tabela). V prejšnji raziskavi [5], smo poročali, da je RDI S-1 povezano s DFS bolnikov GC prejemali adjuvantno S-1 terapijo in da je najpogostejši vzrok za zmanjšanje odmerka S-1 enterokolitis, eden izmed najpogostejših non-hematoloških toksičnosti razvile med adjuvantno S-1 terapijo. Čeprav ali ravni DPD izraz korelaciji med tumorskih celic in normalnih celic gostitelja ostaja neznan, Bertino et al. [15] so poročali, da se nizka intratumorska DPD izraz lahko povezano s povečano toksičnosti kapecitabina pri bolnikih s pljučnim rakom. Cui sod. [33] so poročali, da je stopnja DPD izraz serum, povezane z razvojem toksičnosti kemoterapije s sedežem v S-1 pri bolnikih z metastatskim GC. Skupaj, smo hipotezo, da lahko intratumorska ravni DPD izraz odraža splošne ravni DPD v normalnih gostiteljskih tkiv, kar pomeni, da se nizka intratumorska DPD izraz lahko povezana s pogostejšo razvoja S-1 toksičnih in lahko zmanjša bolnikovo toleranco do S-1. To hipotezo lahko pojasni slabše DFS pri bolnikih z nizko intratumorska DPD izražanja, v primerjavi z bolniki z visokim izražanja DPD, ko so prejemali adjuvantno S-1 kemoterapijo. Drugič, visoka intratumorska DPD per se
lahko daje večjo občutljivost za S-1 kot nizko intratumorska DPD pri bolnikih GC. Shimizu et al. poročali, da je bil odziv precej višje v metastatskim želodčnih bolnikih scirrhous karcinomom z DPD-pozitivnih tumorjih kot v tistih z DPD-negativnimi tumorji pri zdravljenju s kemoterapijo na osnovi-S-1 [29]. Vsi navedeni predlogi so hipoteza ustvarja, in so potrebne dodatne raziskave.}

Poleg tega je treba več vidikov je treba dodatno pojasniti. Standardizacija metod QRT-PCR in optimizacija mejno točko za ravni DPD mRNA v FFPE tumorskih vzorcev je treba izvesti. Preiskovalci iz skupine za AKTI-GC uporablja najnižjo tertile za intratumorska ravni DPD mRNA kot mejno vrednostjo [32]. V naši raziskavi smo najnižja četrtina uporablja kot svetlo-temno. Ko smo opravili še analize z uporabo najnižje tertile za intratumorska ravni DPD kot svetlo-temno, je bil vpliv stopnjah izražanja DPD o napovedovanju DFS še vedno veljavne v univariantne (S3 sliki) in multivariatne analize (S3 tabela). Treba je najprimernejši cut-off točka intratumorska stopnjah izražanja DPD mRNA za napovedovanje izidov zdravljenja adjuvantno S-1 zdravljenja treba potrditi v prihodnjih študijah. Poleg tega so intratumorska DPD ravni beljakovin izraz merjene z IHC ocen (intenzivnosti obarvanja pomnoži z odstotkom obarvanih površinah) nanašajo tudi na različnih rezultatov zdravljenja v naši raziskavi. Vendar pa je v študiji, ki jo je skupina AKTI-GC, v katerem so bile stopnje izraženosti beljakovin, izmerjena z le intenzitete barvanja, avtorji niso mogli najti povezavo med rezultati IHC in izidih zdravljenja [32]. Poleg tega AKTI-GC raziskovalci poročali, da so predvidevanja učinkovitosti adjuvantno S-1 kemoterapiji tudi intratumorska stopnje izraženosti TS mRNA. Vendar pa v naši raziskavi, so ekspresijski nivoji TS, ali je bil izmerjen z imunohistokemijo ali QRT-PCR, niso povezani z rezultati preživetja adjuvantno S-1 terapije. Zato je treba te različne ugotovitve med AKTI-GC raziskovalcev in nas (uporabnostjo intratumorska DPD koncentracije proteina izražanja, merjeno po IHC in TS mRNA stopnjah izražanja pri napovedovanju rezultatov zdravljenja), ki jih je treba dodatno raziskati v prihodnje.

na koncu, ko prejemajo adjuvantno s-1 zdravljenja, bolniki GC z visoko intratumorska DPD izražanja ni imel slabše rezultate za tiste z nizkimi izražanja DPD. Namesto tega je bila nizka mRNA ali proteinski izraz DPD povezani s slabo DFS. Dajanje nižjih odmerkov S-1 zaradi toksičnih bi lahko privedlo do tega nepričakovanega slabše izid zdravljenja pri bolnikih z nizko ravnjo DPD. Stopnje izraženosti drugih encimov, fluoropirimidinski presnovo (TS, OPRT in TP) niso bili povezani z rezultati preživetja adjuvantno S-1 zdravljenja. Prihodnji veliki prihodnje študije biomarkerjev napovedati učinkovitosti adjuvantno S-1 zdravljenja so utemeljene.

Podpora Informacije
S1 Sl. Preživetje rezultati po stopnjah: (A) preživetja brez bolezni in (B), celokupno preživetje
doi:. 10,1371 /journal.pone.0120324.s001
(DOCX)
S2 Sl. Razdelitev (A) IHC mnogo DPD in ravneh (B) mRNA izraženosti DPD
(C) Korelacija med IHC rezultati in mRNA izraženosti DPD
doi:.. 10,1371 /journal.pone.0120324. S002
(DOCX)
S3 sl. Bolezen brez krivulji preživetja po intratumorska ravni mRNA izraženosti DPD (Če se pri bolnikih, razporejenih v tertiles)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0120324.s003
(DOCX)
S1 tabeli. Toksičnosti razvile v S-1 kemoterapijo (na pacienta)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0120324.s004
(DOCX)
S2 tabeli. Primerjava dostave S-1 in razviti toksičnosti med intratumorska DPD-low in DPD-high izražanja skupin [(A), ki jih IHC rezultati in (b) ravni mRNA izražanja]
doi:. 10,1371 /journal.pone .0120324.s005
(DOCX)
S3 tabeli. . Vpliv intratumorska stopnjah izražanja DPD mRNA na preživetje brez bolezni
DPD mRNA izraz so bili razdeljeni v 3 skupine (tertiles)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0120324.s006
(DOCX )

Priznanja

Ta članek je bil predstavljen, v delu, kot predstavitev poster na 2014 ESMO (Evropskega združenja za internistično onkologijo) kongresu, Madrid, Španija (26-30 september 2014).

• Plos ONE: LAPTM4B-35, Rak-Related Gene, je povezana s slabo prognozo na TNM Faze I-III želodca Rak Patients
• Plos ONE: Čezmerno evkariontskih Translation Začetek Factor 5A2 (EIF5A2) korelira z Cell agresivnosti in Poor preživetje v želodcu Cancer