PLoS ONE: makrofagin Induserer Gastric Cancer Invasivitet av Aktivering av β-catenin Pathway

Abstract

Bakgrunn

Til tross for bevis som aktiveres makrofager handle i en inflammatorisk mikromiljø for å fremme gastric tumorigenesis via β-catenin signalering, effekten av β-catenin signal på magekreft celle metastaser og forholdet mellom disse cellene med omkringtumorassosierte makrofager har ikke vært direkte undersøkt.

Metoder

Immunhistokjemisk farging ble ansatt for å analysere 103 pasienter. En invasjon analyse ble anvendt for å evaluere forholdet mellom makrofager og magekreftceller. P-catenin gain-of-funksjon og tap-av-funksjon tilnærminger ble utført. For å vurdere β-catenin Reguleringen i magekreftceller, Western blotting og omvendt transkripsjon polymerase chain reaction ble brukt.

Resultater

Økt tetthet av makrofager ble assosiert med avansert stadium og dårlig overlevelse . Gastric kreft cellelinjer co-dyrket med makrofager kondisjonerte mediet viste økt kjernekraft akkumulering av β-catenin og økt invadere evne. AKT men ikke Erk regulert β-catenin trans. MMP7 og CD44, både β-catenin nedstrøms gener, var involvert i makrofag-aktivert magekreft celle invasjon.

Konklusjon (e)

Sammen de kliniske data tyder på at makrofag infiltrasjon er korrelert med økt grad og dårlig prognose for mage kreftpasienter som gjennomgikk radikal reseksjon. Makrofager kan indusere invasivitet ved å aktivere β-catenin veien

Citation. Wu MH, Lee WJ, Hua KT, Kuo ML, Lin MT (2015) makrofagin induserer Gastric Cancer Invasivitet av Aktivering av β-catenin Pathway . PLoS ONE 10 (7): e0134122. doi: 10,1371 /journal.pone.0134122

Redaktør: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanita, ITALIA

mottatt: 16 september 2014; Godkjent: 06.07.2015; Publisert: 30.07.2015

Copyright: © 2015 Wu et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer

Finansiering:.. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra National Science Council, Taiwan (NSC 98-2314-B-002-055-MY2)

konkurrerende interesser: forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP (GC) er blant de vanligste kreftformene i verden og nesten to tredjedeler av slike pasienter vil dø av. deres sykdom. [1] GC er nært forbundet med Helicobacter pylori
infeksjon, noe som fører til kronisk inflammasjon. [2] Denne inflammatoriske mikromiljøet er karakterisert ved tilstedeværelsen av verts leukocytter med hovedsakelig makrofager i begge bære stroma og tumorvev. [3] Undersøkelser viser at tumor-assosiert inflammatoriske responser, både lokale og systemiske, er viktige uavhengige faktorer i tumorprogresjon og metastasering. [4, 5] Men sammenhengene mellom disse molekylære meklere og kronisk betennelse er ikke fullt ut forstått .

Aktivering av Wnt veien er et viktig skritt i kreftutvikling. Mutasjoner langs Wnt-β-catenin veien oppstår i omtrent 90% av tykk- og hepatocellulære karsinomer og i omtrent 30% av GCer. [6, 7] I tillegg, tumor nekrose faktor-α (TNF-α) avledet fra aktiverte makrofager fremmer β-catenin aktivitet i GC-celler. [8, 9] imidlertid, til tross for bevis på at aktivert makrofager handling i en inflammatorisk mikromiljø for å fremme gastrisk tumorgenese via β-catenin signalering, effekten av aktivert β-catenin signalering på GC cellemetastase og forholdet av disse cellene med omgir tumorassosierte makrofager (TAM) er ikke blitt direkte studert.

Basert på ovennevnte funn, hypotese vi at β-catenin reaksjonsvei kan også være involvert i regulering av makrofag-indusert GC metastasering. I denne studien undersøkte vi først tettheten av infiltrerte makrofager og ekspresjonen av β-catenin i gastrisk karsinom vev ved hjelp av immunhistokjemi (IHC). De clinicopathological karakteristikker av magekreft og prognose ble demonstrert. Videre fant vi at makrofager indusere kjernefysisk translokasjon av β-catenin og forbedre invasjonen evne til GC celler. Våre funn viser og videre støtte et viktig bindeledd mellom TAM og dens nedstrøms signal mekler, β-catenin, i å regulere GC metastaser.

Materiale og metode

Pasienter og Prøvene

studien ble godkjent av Institutional Review Board og samfunnsetiske komité for National Taiwan University Hospital. Skriftlig samtykke for bruk av prøver for forskningsformål ble innhentet fra alle pasienter før operasjonen. Pasientinformasjon ble anonymisert og avidentifisert før analysen.

Studiet retrospektivt registrert 205 pasienter diagnostisert med GC som fikk radikal kirurgisk reseksjon ved Institutt for generell kirurgi, National Taiwan University fra januar 1998 til januar 2002. Av disse ble 102 pasienter som manglet oppfølgingsdata eller som døde av perioperative komplikasjoner utelukket, og de resterende 103 pasienter ble inkludert i analysene. Clinicopathological variabler ble klassifisert i henhold til TNM-klassifikasjon (5. utgave, 1997) og egenskapene er oppsummert i tabell 1. Generell overlevelse (OS) ble definert som intervallet mellom kirurgi og død eller mellom kirurgi og den siste oppfølging av pasientoverlevelse.

monoklonale antistoffer og IHC

resected eksemplarer av GC ble fiksert i formalin og innstøpt i parafin. Seksjonene ble undersøkt for TAM infiltrasjon og β-catenin ved anvendelse av monoklonalt anti-CD68-antistoff (klon KP1, DakoCytomation, Glostrup, Danmark) og monoklonal β-catenin antistoff (klon 15B8, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), henholdsvis.

Evaluering av Farging

for å vurdere tettheten av vev-infiltrerende CD68 + makrofager, ble vevssnitt skjermet av et styre sertifisert patolog (CI jan) på lav effekt (100 ×) og de fem mest representative feltene ble valgt på 400 × forstørrelse. Resultatene ble tellet manuelt, og ble uttrykt som summen av antall celler i fem 400 x mikroskopiske felt for hvert område i hver prøve.

Cellekultur

GC-celler AGS, N87 (innkjøpt fra American Type Culture Collection (Manassas, Virginia)), MKN45 (kjøpt fra Health Science Research Resources Bank (Osaka, Japan)) og TSGH (kjøpt fra Bioresource Collection og Research Center (Hsinchu, Taiwan)) og menneskelig monocytic celle linje THP-1 (innkjøpt fra American Type Culture Collection (Manassas, VA)) celler ble dyrket i RPMI-1640-medium (Life Technologies, Inc., Rockville, MD) med 10% føtalt bovint serum (FBS, Life Technologies, Inc. ) og 2 mM L-glutamin (Life Technologies, Inc.).

THP-1-celler ble sådd ut på kulturskåler og induseres til å differensiere til makrofager ved inkubering med 100 ng /ml 12-O-tetradekanoylforbol-13 acetat (TPA, Sigma-Aldrich) i 24 timer. Makrofagene ble vasket tre ganger med RPMI-medium inneholdende 10% FBS, inkubert i dette medium i ytterligere 24 timer for å eliminere virkningen av TPA og inkubert i serum-fritt medium i ytterligere 24 timer. De høstede og sammenslåtte kultursupernatanter ble anvendt som makrofag-kondisjonert medium (CM) som beskrevet tidligere. [5, 10]

Proliferasjon /Levedyktighet Assay

GC-celler ble sådd i 96-brønns plater og ko-dyrket med eller uten makrofag CM. Utbredelsen /levedyktighet ble bestemt ved en kolorimetrisk analyse ved anvendelse av 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) (Sigma-Aldrich).

In Vitro Assay invasjon

invasjonen analysen ble utført ved bruk av Transwell cellekulturkammer (Millipore Corp., Billerica, MA). De invaderer celler ble talt på 400 × forstørrelse i 10 forskjellige felt for hver innsats. Forsøket ble gjentatt tre ganger.

RNA ekstraksjon og RT-PCR

Etter stimulering med eller uten makrofag CM i 6 timer, GC-celler ble samlet og total RNA ekstrahert ved anvendelse av Trizol reagens-sett ( Invitrogen, Carlsbad, California) etter produsentens anvisninger. cDNA ble forsterket av polymerase chain reaction (PCR) ved hjelp av primere for MMP7 (frem: 5'AGTCAATCCTGCCTTCTTAGCC, omvendt: 5'GCTCCCACCTTCCCTCTTGG), CD44 (forover: 5'TGCCGCTTTGCAGGTGTAT, omvendt: 5'TCCCATGTGAGTGTCTGGTAGC), cyclin D1 ( frem: 5'CCCAGCCATGGAACACCA, omvendt: 5'GGAGGGCGGATTGGAAATGA), c-myc (forover: 5'AAAGAAGGTGTTGGGGTCGG, omvendt: 5'TGGCTCCCCCTGTTATTTGG) og GAPDH (forover: 5'GGGTGATGCAGGTGCTACTT, omvendt: 5'GGCAGGTTTCTCAAGACGGA) .

Nuclear og Cytoplasmatiske Fraksjone

etter stimulering med eller uten makrofag CM i 6 timer, ble GC cellene lysert i 300 mL lysis buffer på is og sentrifuger ved 5400 rpm. Supernatanten ble samlet opp som en cytosoliske fraksjon. Atom fraksjoner ble oppsamlet, og deretter kjøre inn natriumdodecylsulfat polyakrylamid gelelektroforese (SDS-PAGE) for Western blot-analyse.

Western blotting-analyse

Etter stimulering med makrofag CM, cellene ble vasket med PBS , skrapet inn RIPA buffer og sentrifugert. Cellelysatene ble utsatt for 10% SDS-PAGE og overført til en polyvinyliden fluorid (PVDF) membran (Millipore Corp.) Membranen ble probet ved bruk av primære antistoffer for β-catenin, AKT, ERK, JNK (SC1496, SC8312, SC154, SC474, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA, USA), MMP7 (MAB3322, Chemicon, Temecula, CA, USA), CD44 (ab51037, Abcam, Cambridge, MA, USA), c-myc (GTX103436, GeneTex, Hsinchu City , TAIWAN), cyclin D1 (SC246, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA), β-aktin (ab8226, Abcam), HDAC1, p-AKT, p-ERK, p-JNK (SC7872, SC7985-R, SC7383, SC6254, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA) og sekundært antistoff (Santa Cruz Biotechnology).

Immunocytochemistry

Anti-total β-catenin antistoff ble brukt som det primære antistoff, og anti- mus immunoglobulin G (IgG) Alexa 594 ble anvendt som det sekundære antistoff. Dekkglass ble deretter montert ved hjelp av monteringsmedium som inneholder DAPI for nukleær farging.

Lentiviral produksjon og infeksjon

Kort hårnål RNA (shRNAs) ble kjøpt fra National RNAi kjernen Facility ved Academia Sinica (Taipei, Taiwan). Målsekvensen av β-catenin shRNA 1 var 5'- CCGGTCTAACCTCACTTGCAATAATCTCGAGATTATTGCAAGTGAGGTTAGATTTTTG-3 '; at av β-catenin shRNA 2 var 5'-CCGGTTGTTATCAGAGGACT-AAATACTCGAGTATTTAGTCCTCTGATAACAATTTTTG-3 '. Den lentiviral vektor og dets emballasje vektorer ble transfektert inn 293T emballasje celler ved kalsiumfosfat transfeksjon. Kort fortalt ble 293T celler delt (10 ^{6) i 10 cm 2 retter en dag før transfeksjon. Deretter ble cellene transfektert med 10 ug shRNA vektorer og 10 ug av pCMVΔR8.91 (emballasjen vektor) og 1 ug av pMD.G (konvolutten vektor). Etter 5 timers inkubasjon, ble transfeksjon medium erstattet med friskt kulturmedium. Førti-åtte timer senere, ble lentivirus-inneholdende medium oppsamlet fra transfeksjon og spunnet ned ved 1500 rpm i 5 min for å pelletere celleavfallet ble supernatanten filtrert gjennom et 0,45 um filter, og målceller ble infisert med frisk lentivirus-holdige medium (supplert med 8 mikrogram /ml polybrene) i 24 timer.}

Statistical Analysis

Statistisk analyse av de kliniske funksjonene ble gjort ved hjelp av χ ^{2 test og graden av infiltrasjon mellom de to gruppene ble sammenlignet under anvendelse av t-test. Overlevelseskurver ble konstruert ved anvendelse av Kaplan-Meier-metoden, og statistisk signifikans ble analysert ved hjelp av log-rank test. En p-verdi på mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.}

Resultater

Korrelasjonen av Immunohistokjemiske Variabler med Clinicopathologic funksjoner i GC Pasienter

Immunhistokjemisk analyse viste en cytoplasma CD68 fargemønster for makrofager. CD68 + makrofager ble distribuert over hele peritumoral og intratumorale vev, men bare tynt spredt i normal slimhinne (fig 1A-1C). Tettheten av CD68 + makrofager var spesielt høy i patologisk tumorstadium 4 (pT4) tumorlesjoner sammenlignet med PT1 lesjoner (fig 1D). For å bestemme sammenhengen mellom kliniske karakteristika og CD68 + makrofag tetthet, ble tellinger av CD68 + makrofager delt inn i de som er ovenfor og nedenfor de medianverdiene. Antallet CD68 + makrofager ble funnet å være assosiert med tumor dybde og trinn (p = 0,001 og p = 0,043, respektivt) (tabell 1). Denne observasjonen tyder på at CD68 + makrofager kan være viktig for å fremme tumorinvasjon. For ytterligere analyse, ble Kaplan-Meier overlevelseskurver plottet for å bestemme sammenslutning av makrofager med overlevelse (fig 2). Tettheten av CD68 + makrofager i tumorvevet var negativt forbundet med total overlevelse (p = 0,0073). Pasienter med høyt antall tumor CD68 + makrofager hadde kortere total overlevelse enn de med lavt antall CD68 + makrofager.

Økt uttrykk og sterkere signal av β-catenin ble observert av IHC flekker i svulster. I de fleste tilfeller ble β-catenin ekspresjon hovedsakelig lokalisert i cytoplasma (figur 3A). Interessant nok var sterk nukleær farging av β-catenin GC-celler assosiert med CD68 + makrofager i tumor lesjoner, spesielt i front av tumorinvasjon (figur 3B). På bakgrunn av disse resultatene, hypotese vi at makrofag infiltrasjon kan aktivere β-catenin signalisering i magekreftceller, som deretter sannsynligvis fører til invasjon i mage malignitet.

Krav om Makrofager for tumorinvasjon i GC og aktivert Makrofagindusert invasjon av GC Cells

for ytterligere å bekrefte våre kliniske funn in vitro
, vi første co-cultured makrofager med ulike GC cellelinjer (AGS, N87, MKN-45 og TSGH) . Alle GC-cellelinjene som ble testet ville rekruttere makrofager til å migrere og den makrofag-rekruttering evne var avhengig av graden av malignitet av de kreftceller som bestemt ved deres invasivitet (figur 4A). [11] For å evaluere hvorvidt invasivitet eller proliferasjon av GC-celler kan reguleres av makrofager, AGS, N87, MKN45 og TSGH samtidig var dyrket med og uten makrofager eller CM fra makrofag for 24 timer og deres invasjon og spredning evner testet. Alle celletyper ko-dyrket med makrofag eller CM fra makrofag-viste en nær to ganger økning i antall invaderende celler (sammenliknet med negative kontroller, s < 0,05), som ikke er knyttet til deres spredning evne (figur 4B-4D ).

Nuclear Translokasjon av β-catenin i GC-celler ved aktiverte makrofager

Vi har utført et eksperiment in vitro å forstå om β-catenin signal var involvert i makrofag-aktivert GC celle invasjon. Som vist i figur 5A, ble β-catenin immunoreaktivitet som finnes i den kjernefysiske fraksjon av N87-celler så tidlig som 15 minutter etter makrofag CM behandling, og mengden av atom β-catenin protein økes på en tidsavhengig måte. I samsvar med disse funn immunfluorescens viste akkumulering og nukleær lokalisering av β-catenin i GC-celler ko-dyrket med makrofag CM sammenlignet med kontroller cocultured i N87 (figur 5B). Disse resultatene tyder sterkt på at de løselige faktorer avledet fra makrofager hjelpe megle akkumulering og kjernekraft translokasjon av β-catenin i GC-celler. Vi forbigående slått ned β-catenin av shRNA og funnet redusert β-catenin protein uttrykk innen 24 timer. Genetisk ablasjon av β-catenin i N87 cellene ikke klarer å øke sin invasive evne etter makrofag CM behandling. I motsetning til ikke-transfekterte og kontroll shRNA hadde ingen endring i den invasive evne i N87-celler i henhold til makrofag CM behandling (figur 5C). Mengden av kjernefysisk β-catenin protein ble også økt i AGS og MKN45 celler etter makrofag CM behandling (S1 figur).

Effekter av makrofager på Uttrykk for β-catenin og Nedstrøms Gener i N87 Cells

Vi har evaluert tradisjonelle Wnt /β-catenin nedstrøms gener MMP7, CD44, c-myc og cyclin D1 determinate hvis de er aktivert av makrofager. MRNA og proteinnivå MMP7, CD44 og c-myc-genene var alle signifikant økt i N87 celler inkubert med makrofag CM og nivåene av cyklin D1 økte svakt (figur 6A). Etter spørre redusert invasjon aktivitet fra banket ned β-catenin, MMP7, CD44 og cyclin D1, men ikke c-myc viste protein nedregulering (figur 6B). For å bekrefte at forholdet mellom invasjon evne og MMP7 og CD44, testet vi muligheten for en nøytraliserende antistoff for å blokkere MMP7 og CD44 aktivitet. Invasjon evne ble betydelig svekket ved forbehandling med 2,5 ug /ml anti-MMP7 og med 10 ug /ml anti-CD44 (figur 6C) henholdsvis, noe som tyder på involvering av begge gener i makrofag-aktivert GC celle invasjon. Vi fant protein nivåer av CD44 og cyclin D1 gener ble økt i de andre GC cellelinjer (AGS og MKN45) inkubert med makrofag CM men MMP7 og c-myc ble ikke vesentlig endret (S2 figur).

Annet har rapportert en mulig skjæringspunktet av MAPK-reaksjonsveien med den Wnt /β-catenin signalveien. [12, 13] Vi utførte derfor et tidsforløpsstudium og fant at bare fosfo-AKT og fosfo-ERK-ekspresjon ble oppregulert ved behandling med makrofag CM (S3A fig). For å bekrefte interaksjonen mellom AKT /ERK-reaksjonsveien og β-catenin, forbehandlet vi celler med enten ERK-inhibitor (U0126) eller AKT-inhibitor (LY294002). Reduksjon av β-catenin translokasjon inn i kjernen ble bare funnet i celler behandlet med AKT-inhibitor, men ikke ERK-inhibitor, som indikerer makrofag-avtivated Wnt /β-catenin signalveien kan bli regulert av AKT (S3b Fig). I GC-celler, synes AKT virkning å være dominerende i makrofag aktivert Wnt /β-catenin signalveien. Tidligere studier har også foreslått at TNF-α produsert av makrofager er en viktig mediator for inflammasjon og kan fremme β-catenin-aktivitet i tumorceller. Vi fant at bruk av nøytraliserende antistoff mot TNF-α i N87 undertrykke β-catenin aktivering etter eksponering for makrofag CM (S4 figur).

Diskusjoner

Den mikromiljøet av en svulst er av avgjørende betydning i bestemmelse av leukocyttfunksjonen og fenotype. Motstridende data har vist antitumorigenic eller protumorigenic funksjoner på makrofager i særdeleshet, men våre data indikerer makrofager spiller en protumorigenic rolle i GC pasienter. I de fleste tumorer, TAMs fremstille et utall av faktorer som fremmer tumorvekst og angiogenese. [14, 15] Graden av makrofag infiltrering inn i kreftcellen reir er også en signifikant prediktor for overlevelse i GC-pasienter. [16-18] IHC funn i denne studien viser klart at tettheten av makrofager i GC vev er korrelert med graden av klinisk stadium (spesielt i tumoren [T] stadium) og overlevelse hos pasienter. De nåværende studier antyder også at makrofager kan spille skadelige roller i avansert GC. Dette funnet er i harmoni med studier som tyder på at immunmikromiljøet kan være protumoral heller enn antitumor, til tross for noen motstridende data. [19, 20]

Nuclear akkumulering av β-catenin har blitt rapportert i omtrent en tredjedel av gastrisk adenokarsinomer, både intestinale og diffuse typer. [18] β-catenin er et 92 kDa-protein som virker direkte celle-til-celle-adhesjon. [21] Mutasjoner av β-catenin og avvikende ekspresjon av dets protein har vært implisert i tumorinvasjon og metastase. [22, 23] i våre IHC funn, β-catenin ble plassert i kjernen ved invasiv forsiden av tumorceller, men ikke i det mest sentrale området av de primære tumorer, hvor det lokaliserer til plasmamembranen . Slike observasjoner kan også bli funnet i kolorektal kreftprøver. [24] Wnt /β-catenin aktivering i kreftceller som ligger ved invasiv fronten har blitt foreslått som et viktig skritt i tumorvekst og progresjon. [25]

Interessant nok, også funnet vi β-catenin som ligger i kjernen av tumorceller med makrofager som ligger ved siden av hverandre, noe som tyder på en mulig sammenheng mellom makrofager og atomtranslokasjon av β-catenin i tumorceller. β-catenin ved invasiv foran GCer er delvis forklart av interaksjoner i svulsten mikromiljøet. Vi bekreftet in vitro Hotell som makrofager øke invasjonen evne til GC celler. Ved hjelp av immunfluorescens konfokalmikroskopi, bestemt vi lokalisering og akkumulering av β-catenin i kjernen i behandlede makrofager. Derfor mistenker vi at cytokiner utskilt av makrofager indusere β-catenin atomtrans i GC-celler, og dermed øke deres invasjon evne. Den invasive foran epiteltumorer representerer en mikromiljøet der makrofager samhandle med parenkymceller ved å produsere ekstracellulære matrise og ved å skille cytokiner og vekstfaktorer som lokalt fremmer celledeling og invasjon. [26, 27] Men i vår studie, økt β-catenin uttrykket in vitro
endret ikke spredning, noe som indikerer at ved seg selv, er ikke tilstrekkelig til å øke tumor malignitet. Dette funnet er også vist tidligere at β-catenin bare fremmer vedheft sider for å danne fokalt og stimulerer retnings migrasjon og invasjon av tykktarmskreftceller, men ikke involvert i spredning av mage og prostata kreft celler. [28-30] Likevel stromal celle parakrin modulering av signalisering Wnt i epitel-celler er sannsynligvis koordineres av et mer komplekst nettverk av fremmer og hemmer sekresjon faktorer. Nedstrøms effekter av ulike nivåer av Wnt /β-catenin (og i særdeleshet de som påvirker celleproliferasjon, EMT og lokal invasjon) er som foreløpig dårlig forstått. β-catenin translocates til kjernen hvor det binder til transkripsjonsfaktorene av T-celle faktor /lymfocytt forsterker faktor (TCF /LEF) familie og initierer transkripsjon av målgener for eksempel cyklin D1
, c- myc Hotell og MMP-7 product: [31, 32] involvert i spredning, tumorinvasjon og metastasering. [33, 34] Våre funn tyder på at signalveier gjennom hvilke makrofager indusere β-catenin også indusere uttrykk for målgener. I samsvar med vår tidligere arbeid, [5] MMP-7 og CD44 var to PCR-matriser identifisert etter coculture med makrofager som differensielt uttrykte gener assosiert med spredning av GC-celler. Nedbrytning av den ekstracellulære matrise formidlet av matriksmetalloproteinaser (MMP) er en viktig mekanisme i løpet av tumorinvasjon og metastasering. En slik nedbrytning er nødvendig for å skape en mikromiljøet som støtter veksten av primære svulster og metastaser. aktiverer β-catenin /TCF kompleks deretter et stort antall onkogener, inkludert VEGF, c-myc, c-jun, fra-en og gastrin som også kan være involvert i makrofag aktivert β-catenin nedstrøms hendelser. [35]

En rekke ruter sannsynlig modulere Wnt /β-catenin reaksjonsvei og regulering av β-catenin signalisering kan bli tilsvarende komplisert. Nyere studier har funnet at makrofagen CM utløser ERK sti og Wnt aktiverer ERK i endotelceller. [36, 37] Her fant vi at makrofager indusere fosforylering av både ERK og AKT i GC-celler. Vi viste at behandling med AKT-hemmer, men ikke ERK inhibitor reduserer β-catenin trans. Disse resultatene indikerer at Akt spiller roller i makrofag aktivert β-catenin signalisering i mage celletyper.

Konklusjoner

Sammen de kliniske data tyder på at makrofag infiltrasjon er korrelert med økt grad og dårligere prognose for GC pasienter som gjennomgikk radikal reseksjon. Makrofager kan indusere GC invasivitet ved å aktivere β-catenin veien. Følgelig undertrykkelse av makrofaginfiltrering og undertrykkelse av aktivering av β-catenin veien representere potensielle strategier for behandling av GC.

Hjelpemiddel Informasjon
S1 fig. . Effekt av makrofager CM på β-catenin sti
β-catenin akkumuleres i kjernen etter behandling med makrofag CM i 30 minutter i AGS og MKN45 celler
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s001
(TIFF)
S2 fig. Effekt av makrofag CM på protein uttrykk av β-catenin nedstrøms gener av AGS og MKN45 celler
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s002 plakater (TIFF)
S3 Fig. (A) Makrofag CM indusert AKT og ERK-aktivering i N87-celler. (B) N87-celler ble forbehandlet med 10 pM av de β-catenin inhibitorer:. LY294002 eller U0126 i 1 time og deretter dyrket i nærvær av makrofag CM i 1 ytterligere time
AKT, ERK og β-catenin proteinekspresjon ble bestemt ved Western blot
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s003 plakater (TIFF)
S4 fig. . Nøytraliserende antistoff mot TNF-α
N87-celler i nærvær av makrofag-CM i 24 timer ble forbehandlet med eller uten TNF-inhibitor α i 1 time
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s004 product: (TIFF)

• PLoS ONE: PRR11 Er en prognostisk markør og potensial Oncogene i pasienter med mage Cancer
• PLoS ONE: lymfeknutemetastase, en unik Uavhengig prognostisk faktor i tidlig Gastric Cancer