PLoS ONE: Fas Signalering Bevordert Gastric uitzaaiing van kanker door middel van STAT3-Dependent opregulatie van Fascin

De abstracte

Achtergrond

Fas-signalering geactiveerd signaal transducers en activatoren van transcriptie 3 (STAT3) is vereist voor fascin opregulatie. Als actine bundeling eiwit kan fascin maagkanker (GC) celmigratie mediëren.

Methods

Maagkanker AGS cellen werden behandeld met anti-Fas (5 ug /ml) gedurende 2 h , teneinde de activering van de Fas signalering stimuleren. De In vitro
migratie van Fas-signalering geactiveerde AGS cellen werd beoordeeld met behulp van Transwell kamers. De niveaus van gefosforyleerde STAT3 fascin en werden gedetecteerd door Western blotting analyses. Naakt muizen werden intraveneus geïnjecteerd met AGS cellen behandeld met anti-Fas of behandeld met STAT3 remmer zonder anti-Fas; tumor longmetastasen werden gemeten. Fascin eiwit expressie in tumor weefsels werd gedetecteerd door immunohistochemie. De Fas en fascin mRNA niveaus in de tumor weefsel van patiënten met GC werden gemeten door real-time PCR en hun correlatie werd geanalyseerd.

Resultaten

Het activeren van Fas signalering bevorderd cel migratie en resulteerde in STAT3-afhankelijke fascin opregulatie in AGS-cellen. STAT3 verbeterde fascin niveaus In vivo
. Fascin was de mediator van Fas-geïnduceerde signalering AGS celmigratie In vitro Kopen en In vivo
. Verder was er een positieve correlatie tussen Fas en fascin mRNA niveaus in de tumor weefsel van GC patiënten.

Conclusies

Fas signalering bevordert GC metastase via de STAT3 /fascin route, die een nieuwe kunnen voorzien doelwit voor GC therapie

Visum:. Yang Y, Zhao Q, Cai Z, Cheng G, Chen M, Wang J, et al. (2015) Fas Signalering Bevordert Gastric uitzaaiing van kanker door middel van STAT3-Dependent opregulatie van fascin. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10.1371 /journal.pone.0125132

Academic Editor: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, VERENIGDE STATEN

Ontvangen: 6 januari 2015; Aanvaard: 11 maart 2015; Gepubliceerd: 18 mei 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier

Financiering:. Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China nr 81200014 te JLW (http://www.nsfc.gov.cn/); het Natural Science Foundation van de provincie Zhejiang No. LY14H160011 te YsY; Nee LY12C08002 te ZJC en nr LY12H13003 naar MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Maagkanker (GC) is de vierde meest voorkomende vorm van kanker en de tweede belangrijkste oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen wereldwijd. Zoals kanker, metastase is de belangrijkste oorzaak van het falen van de klinische behandeling van GC. Gediagnosticeerd in een vroeg stadium zonder metastase, kunnen GC worden uitgeroeid door chirurgie. Eenmaal metastase optreedt, de prognose van de GC is beduidend slechter. Bij patiënten met uitgebreide metastasering, het resultaat van de ingreep in combinatie met chemotherapie en immunotherapie is verre van optimaal, met een totale 5-jaars overleving wordt slechts 24% [1,2]. Daarom is er dringend behoefte aan een beter begrip van het mechanisme van metastase GC teneinde een betere therapeutische strategie te ontwikkelen.

Fas signaleringsroute is een van de klassieke mechanismen om apoptose te induceren [3]. Na ligatie met zijn natuurlijke ligand, FasL, Fas receptor vormt de dood-inducerend signalering-complex, waardoor de activatie van caspase-8, dat op zijn beurt de stroomafwaartse caspasen activeert, waardoor apoptose [4]. Vermeld is dat Fas-bemiddelde celdoding verantwoordelijk is voor de anti-kanker werking van Fas signaalweg bij prostaatkanker [5]. In de meeste tumoren, in plaats van het induceren van apoptose, Fas signaleringsactiviteit bevordert tumorprogressie [6,7]. Tumorcellen reageren vaak Fas stimulatie met verhoogde proliferatie [8,9]. Verscheidene studies hebben ook aangetoond dat Fas signalering tumorcel migratie en invasie [10-12] kan bevorderen. In een recente studie heeft hoge Fas expressie in GC cellen aangetoond te correleren met het optreden van uitzaaiingen regionale lymfklieren [13], wat suggereert dat Fas signalering bevordert de uitzaaiing van maagkanker.

fascin, een actine -bundling eiwit is geïdentificeerd als een belangrijke molecule tumormetastase [14]. Fascin speelt een belangrijke rol bij de migratie van tumorcellen en expressie van fascin is verhoogd bij verschillende soorten kanker, waaronder GC [15,16]. Fascin een directe STAT3 doelgen als reactie op IL-6 in zowel muis als humane borstkankercellen [17]. Fas signalering is gerapporteerd betrokken te zijn bij de activering van STAT3 [18-20]. Daarom speculeren we dat Fas signalering bevordert de GC cel migratie en de daaropvolgende tumor uitzaaiingen via de STAT3-afhankelijke regulatie van fascin.

De huidige studie werd ontworpen om de betrokkenheid van Fas bij de regulatie van fascin expressie door middel van STAT3 activering tonen in AGS cellen. We hebben geprobeerd om de verbeterde fascin niveau te koppelen met een mobiele beweeglijkheid en metastase van AGS cellen In vivo
. We analyseerden ook de correlatie tussen Fas en fascin mRNA niveaus in de tumor weefsel van patiënten met GC. Er werd gehoopt dat onze bevindingen van een nieuw mechanisme voor GC metastase zou openbaren, die een basis voor de toekomstige ontwikkeling van Fas-gebaseerde therapeutische strategie voor geavanceerde GC.

Materialen en methoden

Human weefselmonsters

Human GC weefselmonsters werden verzameld van 23 patiënten (14 met metastase en 9 zonder metastase) die een operatie ondergaan voordat chemotherapie bij kanker ziekenhuis Zhejiang (Hangzhou, China) tussen 2012 en 2014. de klinische kenmerken van de patiënten met GC zijn samengevat in tabel 1. de studie voldeed aan de voorschriften van het ministerie van Volksgezondheid van China en de World Health Organization Research-ethische toetsingscommissie internationale richtlijnen voor onderzoek met mensen en de Verklaring van Helsinki over de ethische principes voor medisch-wetenschappelijk onderzoek met mensen. Het studieprotocol werd beoordeeld en goedgekeurd door de Institutional Review Board van Zhejiang kanker ziekenhuis goedgekeurd. Schriftelijke toestemming werd verkregen van elk van de patiënten voor aanvang bestuderen.

Reagentia

Mouse anti-humaan Fas (2R2) monoklonaal antilichaam werd gekocht van eBioscience (San Diego, CA, USA) . Muis-anti-humaan Fas (CH11) monoklonaal antilichaam en STAT3 remmer S3I-201 werden gekocht bij Merck Millipore (Billerica, MA, USA). Het konijn anti-humaan STAT3 (79D7) en anti-humaan gefosforyleerde STAT3 (D3A7) monoklonale antilichamen werden gekocht bij Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). De muis-anti-humaan fascin (D-10) monoklonaal antilichaam, humaan fascin siRNA, STAT3 siRNA, negatieve controle siRNA (NC siRNA) en STAT3 remmer, Stattic, werden verkregen van Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). De CCK8 celproliferatie kit werd gekocht van DOJINDO Molecular Technologies (Kumamoto, Japan). Het annexine V-FITC apoptose detectie kit werd gekocht bij Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). De Transwell kamers (8 um poriegrootte) werden verkregen van Costar (Cambridge, MA, USA).

Dieren

Zes weken oude athymische naakt muizen werden verkregen van SIPPR-BK Experimentele Animal Co. (Shanghai, China). De muizen werden gehuisvest in een pathogeen-vrij faciliteit. De experimentele protocollen werden beoordeeld en goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comite van Zhejiang kanker ziekenhuis.

Cellen en celcultuur

De menselijke GC cellijnen AGS en MNK-45 werden verkregen van de American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) en onderhouden 1640 kweekmedium dat 10% foetaal runderserum (FBS) bij 37 ° C met 5% CO _2.

Western blotanalyse

Een totaal van 20 ug ruwe eiwitten geëxtraheerd uit cellysaten werd gescheiden door 10% natriumdodecylsulfaat polyacrylamide gelelektroforese en overgebracht op polyvinylideen difluoride membranen (Millipore, Billerica, MA). De membranen werden geblokkeerd met 5% BSA in Tris-gebufferde zoutoplossing plus 0,05% Tween-20 en vervolgens geïncubeerd met overeenkomstige primaire antilichamen bij 4 ° C overnacht. Na wassen met Tris-gebufferde zoutoplossing plus 0,05% Tween-20, werden de membranen geïncubeerd met overeenkomstige HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen. Eiwitten werden zichtbaar gemaakt met SuperSignal West Femto Maximum (Thermo, IL, USA).

Detectie van apoptose

AGS cellen (2 x 10 ^{5 /ml) werden behandeld met 1 of 5 ug /ml anti-Fas monoklonaal antilichaam (anti-Fas) of isotype antilichaam (ISO) gedurende 24 uur werden de apoptotische cellen gekleurd met Annexine V-FITC en propidiumjodide gedurende 5 minuten bij 4 ° C in het donker en vervolgens geanalyseerd door middel van flowcytometrie met een FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).}

Cancer celmigratie assay in vitro

AGS-cellen (1 x 10 ^{6 /ml) werden behandeld met 5 ug /ml anti-Fas of ISO gedurende 2 uur bij 37 ° C. Vervolgens 2 x 10 5 AGS tumorcellen werden overgebracht in 100 ul serumvrij medium en uitgezaaid naar de bovenste kamer van Transwell kamers (8 um poriegrootte). De onderste kamer was gevuld met 800 ul van 1640 kweekmedium dat 20% FBS. Na een 48-uur incubatie bij 37 ° C werden de cellen gefixeerd met methanol voor 20 minuten, en gewassen met PBS driemaal, 20 minuten elk. De gefixeerde cellen werden gekleurd met 10 mg /ml DAPI gedurende 30 minuten en gewassen met PBS. De gekleurde cellen werden onder een fluorescentie microscoop onderzocht. Om de effecten van STAT3 op de cel migratie te bepalen werd 10 uM Stattic aan het kweekmedium toegevoegd. Om de rol van fascin in de cel migratie vóór anti-Fas stimulatie bepalen totaal 40 nM fascin siRNA-duplexen werden getransfecteerd in AGS-cellen (2 x 10 5 /putje) via 3 pl INTERFERin siRNA transfectiereagens ( Polyplus, NY, CA, USA) op een 24-wells plaat. De efficiëntie van transiënte fascin silencing werd bevestigd door Western blotting.}

celproliferatie assay

AGS cellen werden behandeld met 5 ug /ml anti-Fas of ISO 24, 48 of 72 h, en 20 pl CCK8 werd aan elk putje toegevoegd en de cellen werden gedurende nog eens 4 uur. De absorptie van elk putje werd afgelezen bij 450 nm. cel proliferatie werd berekend met de ODS van de behandelde cellen te delen door de OD van de controlecellen.

Real-time PCR

Totaal RNA werd geëxtraheerd met de TRIzol reagens en cDNA werd gesynthetiseerd onder toepassing van een PrimeScript RT reagens kit (Takara Bio, Inc. Otsu, Shiga, Japan). De volgende PCR-condities werden toegepast: 1 cyclus bij 95 ° C gedurende 30 s en vervolgens 40 cycli van 5 seconden bij 95 ° C en 34 s bij 60 ° C. Real-time PCR werd uitgevoerd op een Applied Biosystems 7500 real-time PCR systeem (Foster City, CA, USA). De resultaten werden genormaliseerd tegen β-actine RNA. De sequenties van PCR-primers waren als volgt: sense 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'en anti-sense, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3' voor β-actine; sense, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'en anti-sense, 5'AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3' voor Fas; sense, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'en anti-sense, 5'-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3' voor fascin.

longmetastasen assay In vivo

AGS cellen ( 5 x 10 ^{6 per muis) voorbehandeld met anti-Fas of ISO gedurende 2 uur via een staartader in 6-weken oude naakt muizen geïnjecteerd. Om de effecten van STAT3 op tumormetastase en fascin expressie bepalen In vivo
, AGS tumorcellen (5 x 10 6 per muis) werden intraveneus geïnjecteerd in 6-weken oude naakt muizen en 24 uur later ontvingen de muizen een intraveneuze injectie van S3I-201 (5 mg /kg, om de 2 dagen voor in totaal 3 keer). Drie weken na cel injectie werden de muizen verdoofd door het inademen chloraalhydraat en gedood en de longen werden verwijderd en het aantal foci longtumor werden onder een stereomicroscoop geteld.}

Immunohistochemie

De tumor foci van de longen werden gefixeerd in 10% formaline, gedehydrateerd in ethanol en ingebed in paraffine. Weefsel secties werden gesneden op 4 urn, aangebracht op objectglaasjes en gedroogd bij 60 ° C gedurende 4 uur. Na korte proteolytische digestie en een peroxidase blok van de weefselobjectglaasjes middels 2,5% waterstofperoxide in methanol gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur werden de objectglaasjes geïncubeerd met het anti-fascin antilichaam overnacht bij 4 ° C. Na wassen werden de objectglaasjes geïncubeerd met peroxidase-gelabeld polymeer en substraat chromogeen. Tenslotte werden de monsters geïncubeerd in fosfaatgebufferde zoutoplossing met diaminobenzidine gedurende 5 min. Een Olympus microscoop werd gebruikt voor de kleuring van de tumorweefsels visualiseren.

Statistische analyse

De resultaten werden vergeleken met behulp van ANOVA. De Spearman rangorde correlatie test werd gebruikt om correlaties tussen de niveaus van Fas en fascin mRNA in tumor weefsel van GC patiënten te onderzoeken. Een p waarde van < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd

Resultaten

Activering van Fas signalering bevordert de migratie van cellen AGS

Ten eerste hebben we de expressie van bevestigde. fas receptor in AGS en MNK-45 cellen door real-time PCR en Western blotting analyses en vonden MNK-45 cellen brachten hogere Fas receptor dan AGS cellen hadden (figuur 1A). Beide cellijnen toonde ook een hoog FasL-expressie (gegevens niet getoond). We vervolgens onderzocht of de ligatie van Fas receptor apoptose in AGS en MNK-45 cellen kunnen induceren. Na stimulatie met anti-Fas of ISO bij een concentratie van 1 ug /ml of 5 pg /ml, was MNK-45 maar niet AGS cellen vertoonden concentratie afhankelijke verhoging van apoptose (figuur 1B). Daarom onderzochten we of het activeren van Fas signalering andere effecten op cellen AGS plaats van apoptose-inductie in de volgende experimenten kunnen veroorzaken. De AGS celmigratie werd uitgevoerd in vitro Kopen en we vonden de migratie van AGS cellen werd significant verhoogd na stimulatie met 5 ug /ml anti-Fas (figuur 1C). De mogelijkheid dat toegenomen migratie van AGS cellen veroorzaakt door de verhoogde proliferatie na anti-Fas stimulatie sluiten, onderzochten we de proliferatie van ACS cellen en vonden geen duidelijke verschillen tussen cellen behandeld met of zonder anti-Fas (figuur 1D), wat suggereert dat de toename van celmigratie was niet het gevolg van de proliferatieve eigenschappen na anti-Fas stimulatie. Samengenomen geven deze resultaten aan dat Fas signalering de motiliteit van GC cellen kan verhogen in vitro
.

Activering van Fas signalering fascin opgereguleerd expressie in AGS cellen via activatie van STAT3

vermeld is dat Fas signalering is betrokken bij de activering van STAT3 [18-20]. In de huidige studie hebben we onderzocht of het activeren van Fas signalering STAT3 activering in AGS cellen zou veroorzaken. Zoals getoond in figuur 2A, na stimulatie met anti-Fas voor een korte periode, de gefosforyleerde STAT3 was significant verhoogd in AGS cellen. Het is ook aangetoond dat fascin de motiliteit van tumorcellen kan verhogen en een direct doelwit gen STAT3 [17]. Aldus gedetecteerde we de expressie van fascin AGS in cellen na stimulatie met anti-Fas. Zoals getoond in figuur 2B, zijn de mRNA niveaus van fascin nam op tijdsafhankelijke wijze en is afgesloten na 12 uur van anti-Fas stimulatie AGS cellen. Om de opregulatie van fascin verder te bevestigen, ontdekt we het eiwit niveau van fascin en vond het verhogen fascin eiwitgehalten in anti-Fas maar niet ISO behandeld AGS cellen (Fig 2C). De relatie tussen STAT3 en fascin in AGS cellen na Fas signaleringsactiviteit demonstreren we behandeld AGS cellen met Stattic, een specifieke remmer van STAT3 vóór anti-Fas stimulatie en vonden dat de anti-Fas-geïnduceerde toename in fascin eiwit volledig is ingetrokken in aanwezigheid van Stattic (figuur 2D). We kunnen ook detecteren de activering van STAT3 in AGS cellen na anti-Fas stimulatie gedurende 24 uur, maar de mate geactiveerde iets lager dan die ontvangen 2h anti-Fas stimulatie (Figuur 2C en 2D). Om verder te bevestigen dat STAT3 is betrokken bij de regulatie van expressie fascin na anti-Fas stimulatie, we neergehaald de STAT3 expressie door STAT3 specifieke siRNA voor anti-Fas stimulatie en gedetecteerd de STAT3-knockdown werkzaamheid door Western blotting analyse. Zoals getoond in figuur 2E, STAT3 siRNA maar niet NC siRNA transfectie aanzienlijk remde de STAT3 expressie in AGS cellen. Zoals verwacht, was de fascin eiwit niet geïnduceerd in-STAT3 knockdown AGS cellen na anti-fascin stimulatie (figuur 2F). Deze resultaten suggereren dat geactiveerd STAT3 is vereist voor de opwaartse regulatie van expressie fascin door Fas signaleringsactiviteit in AGS cellen.

Fas-signalering bevorderd celmigratie afhankelijk STAT3 /fascin route

Het is aangetoond dat fascin bemiddelt migratie van tumorcellen [17]. In de huidige studie hebben we onderzocht of knock-down van fascin Fas-signalering geïnduceerde celmigratie zou verhinderen In vitro
. We vonden dat een daling van fascin eiwit kan worden gedetecteerd in AGS cellen getransfecteerd met siRNA fascin maar niet het NC siRNA (figuur 3A). Vervolgens voerden wij tumor celmigratie assays voor de beweeglijkheid van fascin-knockdown AGS cellen na anti-Fas stimulatie detecteren. Zoals getoond in figuur 3B, wanneer anti-Fas stimulatie sterk de migratie van cellen AGS bevorderd Dit effect werd duidelijk geremd in cellen behandeld met siRNA fascin, maar niet NC siRNA. Aangezien STAT3 is vereist voor het signaleren Fas-geïnduceerde fascin expressie in cellen AGS, we vervolgens de effecten geanalyseerd van STAT3 op de Fas signalering gemedieerde celmigratie in AGS cellen. Zoals getoond in figuur 3C, na behandeling met Stattic, Fas signalering versterkte celmigratie werd volledig afgeschaft. In overeenstemming met dit resultaat, STAT3 siRNA ook significant geremd Fas-signalering verbeterd AGS celmigratie (Figuur 3D). Deze resultaten geven aan dat Fas signalering bevorderen celmigratie en is afhankelijk van de activering van STAT3 /fascin route.

Fas signalering bevordert cel metastase in vivo door middel van STAT3 activering /fascin route

Om verder aan te tonen de tussen Fas signalering en GC metastase, we overgebracht anti-Fas-gestimuleerde AGS cellen intraveneus in naakt muizen en waargenomen de tumor foci in de longen. We vonden een toename tumor foci in de longen van muizen overgedragen met cellen voorbehandeld met anti-Fas maar ISO (figuur 4A). De relatie tussen fascin en Fas-gemedieerde signalering tumormetastase verduidelijken, voerden we immunohistochemie detectie van fascin in tumorweefsels. Wij namen een hogere fascin expressie in tumorweefsels uit muizen die anti-Fas-gestimuleerde AGS cellen dan die van muizen die ISO of niet-gestimuleerde cellen AGS (figuur 4B). Aangezien STAT3 is vereist voor de anti-Fas-geïnduceerde opregulatie van fascin en verhoogde beweeglijkheid in AGS cellen onderzochten we de effecten van STAT3 op AGS cel metastase In vivo
. Na behandeling met S3I-201, een chemische probe remmer van STAT3-activiteit [21], de tumor foci in de longen significant af (figuur 4C). Daarnaast werd fascin expressie in tumorweefsels van S3I-201 behandelde muizen geremd (figuur 4D), wat suggereert dat de controle fascin door STAT3 In vivo
. Samengenomen geven deze resultaten aan dat Fas signalering cel metastase kan bevorderen In vivo
, afhankelijk van de activering van STAT3 /fascin route.

fascin expressie is gecorreleerd met Fas expressie in de tumorweefsels van patiënten met GC

Sinds Fas signalering bevordert fascin meningsuiting, bepaalden we of er een verband bestaat tussen Fas en fascin expressie in de tumor weefsel van GC patiënten. We analyseerden de mRNA niveaus van Fas en fascin in de tumor weefsel van GC patiënten. Zoals getoond in figuur 5, de mRNA niveaus van Fas en fascin toonden een positieve correlatie. Dit resultaat levert het bewijs voor het idee dat Fas signalering bevordert fascin expressie in GC.

Discussie

In het algemeen, na trimerisatie van Fas na ligatie met FasL, apoptose wordt geïnitieerd. Fas cluster rekruteert FADD de adapter eiwit en vormt de dood inducerend signaleringscomplex, waardoor de activatie van caspase-8. Caspase-8 op zijn beurt activeert de stroomafwaartse caspasen, zoals caspase-3, culminerend in apoptose [4]. Naast celdood, Fas verzendt tevens proliferatie en activatie signalen in tumorcellen [22]. Vermeld is dat Fas medieert astric proliferatie mucosale cel ERK afhankelijk [23], maar activatie van ERK signaalroute kan de verspreiding van B16 muizen melanoomcellen [24] induceren. Daarom kan Fas de proliferatie van sommige, maar niet alle tumorcellen induceren en het desbetreffende mechanisme is nog grotendeels onbekend. Hierin vonden we Fas ongeldig was in het induceren van AGS cel proliferatie. Fas signalering is ook aangetoond motiliteit van apoptose-resistente tumorcellen induceren via urokinase plasminogeenactivator [10]. In de onderhavige studie hebben we ontrafeld een nieuw mechanisme van Fas-mediëren tumorcel motiliteit die afhangt van de opregulatie van fascin via activatie van STAT3.

Er wordt algemeen aangenomen dat apoptose ontsnappen door FasL-positieve T cellen werden tumorcellen verschillende manieren FasL-geïnduceerde celdoding effecten weerstaan ​​ontwikkeld. Tumorcellen is aangetoond dat het neerwaarts reguleren of zelfs verlies Fas receptor expressie [25] of intrekking van de intracellulaire signaleringsroute Fas door mutatie in Fas [26]. Tumorcellen kunnen eveneens opwaarts reguleren cellulaire FADD-like-IL-1β-omzettend enzym remmend proteïne of fosforyleren caspase-8 de activatie van caspase-8 te remmen en blokkeren de downstream signaling pathway van Fas [27,28]. In de huidige studie, vonden we de activering van STAT3 in AGS cellen na anti-Fas stimulatie. De activering van STAT3 is aangetoond dat kanker cellen tegen apoptotische stimuli afkomstig van de Fas-receptor [29]. Voorbehandeling van STAT3 remmer kon leiden AGS apoptose na Fas signaleringsactiviteit (gegevens niet getoond), hetgeen suggereert dat de activering van STAT3 niet is betrokken bij het voorkomen AGS cellen van Fas-geïnduceerde apoptose.

Het is gemeld dat Lewis longcarcinoom cellen constitutief resistent tegen Fas-gemedieerde apoptose, maar de overexpressie van Fas op deze cellen laat Fas gemedieerde apoptose na verknoping met agonist anti-Fas antilichaam [30], hetgeen suggereert dat er een kwalitatief verschil in de geactiveerde signalering cellen te ontvangen, die hun lot na Fas signalering ligatie bepaalt. Het niveau van Fas expressie matig AGS-cellen en gestimuleerd met hoge dosis anti-Fas (20 ug /ml); We vonden dat AGS cellen vertoonden enigszins verhoogde apoptose (data niet getoond). Dit geeft aan dat de inductie van apoptose en migratie bevordering signalering kunnen beide worden geactiveerd na Fas receptor ligatie, wat gerelateerd kan zijn aan het niveau van anti-Fas in dergelijke experimenten. Indien hoge niveaus van Fas-signalering levering kan niet worden onder fysiologische omstandigheden bereikt, migratie promotie signalering zal dan na Fas receptor ligatie te nemen en tot een verhoogde GC metastase.

Om remote metastase implementeren krachtige motiliteit is vereist voor de tumorcellen . Fascin, als actine bundeling eiwit is belangrijk voor het behoud en de stabiliteit van filamenteus actine bundels, en dus bezig met celmotiliteit [31]. In de onderhavige studie hebben we aangetoond dat Fas signalering is betrokken bij de opwaartse regulatie van expressie fascin. IL-6 wordt gemeld dat fascin expressie van GC-cellen [32] upregulate. Het Fas signalering ook aangetoond dat IL-6 secretie in tumorcellen [33] bevorderen. Deze bewijzen tonen aan dat Fas signalering tot gevolg fascin opregulatie tot IL-6 versterkt waarschijnlijk. Verder hebben we aangetoond dat de Fas en fascin blijken nauw verwant met GC patiënten versterkt het belang van Fas-fascin as in het proces van metastase GC.

In overeenstemming met eerdere studies hebben we aangetoond dat Fas-geïnduceerde activering van STAT3 nodig was voor de opwaartse regulatie van fascin. In het naakt muis long metastase-model, de STAT3 remmer, S3I-201, zou de fascin expressie in tumorweefsels remmen. Murine recombinant FasL kon STAT3 activering (gegevens niet getoond) te activeren, suggereert dat signalering geïnitieerde geactiveerd door FasL op AGS cellen zelf volstaat STAT3 activering en downstream fascin opregulatie mediëren. Naast het reguleren van expressie fascin is STAT3 ook betrokken bij celproliferatie en overleving, oncogenese, en kanker metastase in GC [34-36]. Een oraal biobeschikbaar klein molecuul STAT3 remmer is ontdekt en een potentieel therapeutisch middel voor kanker bij de mens [37] kan zijn. We speculeren dat STAT3 remmer een veelbelovend middel dat kan worden gebruikt in klinische GC therapie in de nabije toekomst.

Concluderend tonen we aan dat Fas signalering is betrokken bij de GC metastase door middel STAT3-afhankelijke opregulatie van fascin. Onze resultaten suggereren ook de Fas /STAT3 /fascin route kan een moleculair doelwit voor GC therapie.

Dankwoord

Wij waardeerden Dr. Hua Wang voor het verstrekken van de cDNA geëxtraheerd uit tumor weefsels van GC patiënten . Wij waardeerden de redacteur van Medjaden voor de wijziging van dit manuscript.

• PLoS ONE: gezondheid gedrag van de Koreaanse maagkanker Overlevenden met hypertensie: een neiging analyse van KNHANES III-V (2005-2012)
• PLoS ONE: ATOH1 kunnen reguleren de tumorigeniciteit van maagkanker cellen door het induceren van de differentiatie van Kanker stamcellen