De abstracte
Achtergrond
De ARID1A Om de rol van onderzoeken ARID1A Onze gegevens suggereren dat ARID1A Citation:. Wang Dd, Chen Yb, Pan K, Wang w, Sp Chen, Chen Jg , et al. (2012) verminderde expressie van de ARID1A Uitgever: Patrick Tan, Duke-National University of Singapore Graduate Medical School, Singapore Ontvangen: 19 januari 2012; Aanvaard: 6 juni 2012; Gepubliceerd: 13 juli 2012 Copyright: © 2012 Dandan et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd Financiering:. Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (30973398) en Guangdong Natural Science Foundation (925.100.890). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan Introductie Maagkanker is de vierde meest voorkomende maligniteit in de wereld en de tweede meest voorkomende oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen per jaar (10,4% van de sterfgevallen door kanker) [1]. Behandeling van maagkanker omvat een combinatie van chirurgie, chemotherapie of radiotherapie. Echter, bijna 60% van de patiënten die bezwijken voor maagkanker zelfs na een curatieve resectie alleen of na adjuvante therapie [2]. Het is al lang bekend dat maagkanker resultaat van een combinatie van milieufactoren en de accumulatie van algemene en specifieke genetische veranderingen. Veel van de genetische of epigenetische veranderingen in verband met maagkanker, met inbegrip van verlies van heterozygositeit, microsatelliet en chromosomale instabiliteit en Hypermethylering, zijn gerapporteerd [3]. Inzicht in deze veranderingen en de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij de maag carcinogenese zal van cruciaal belang voor de verbetering van de diagnose, de behandeling en de prognose voorspelling van deze ziekte. De eukaryotically geconserveerde SWI /SNF chromatine remodeling complex speelt een essentiële rol in een verscheidenheid cellulaire processen, zoals differentiatie, proliferatie en DNA repair [4]. Verlies van SWI /SNF subeenheden gerapporteerd in de meeste tumoren, en een groot aantal experimentele waarnemingen suggereren dat dit complex is essentieel voor tumorsuppressie [5]. De complexen bevatten zeven of meer katalytische subeenheden die vermoedelijk te moduleren het richten en de activiteit van de ATPase [6]. Een subeenheid van dit complex, hSNF5 /Ini1 /BAF47, is geïdentificeerd als een tumorsuppressor [7], [8]. De andere katalytische subeenheid, p270 /ARID1A /BAF250a (adenine-thymine AT-rijke interactieve domein-bevattend eiwit 1A), is aangetoond essentieel voor normale celcyclus te zijn [9]. Knockdown van ARID1A Onlangs, ARID1A ARID1A Het mRNA niveau van de ARID1A ARID1A eiwitexpressie geanalyseerd door Western blotting Western blotting werd uitgevoerd op 25 maagkanker monsters en overeenkomstige naburige niet-kankerachtige weefsels maagslijmvlies van de 66 gepaarde monsters. De resultaten toonden een ARID1A band bij de verwachte grootte van 242 kDa en de hoeveelheid ARID1A aanwezig eiwit werd verder gemeten door densitometrie. Consistent met de kwantitatieve real-time PCR resultaten, een afname in ARID1A expressie werd waargenomen in 13 (52%) van de maag tumorweefsels in vergelijking met matchende naburige niet-tumorweefsels ( P = 0,0015 Om de clinicopathologische en prognostische rol van ARID1A meningsuiting verder te onderzoeken, voerden wij immunohistochemische analyses van de 224 in paraffine ingebedde maagkanker weefsel blokken. Overall, 115 van de 224 (51,3%) gevallen bleek negatief ARID1A expressie in kankerweefsel (Figuur 3B), terwijl 109 (48,7%) gevallen vertoonden positieve immunokleuring (Figuur 3C & D). Normaal maagslijmvlies het sterkst ARID1A positieve kleuring (Figuur 3A). De correlatie tussen de expressie van ARID1A en diverse clinicopathologische parameters zijn opgesomd in Tabel 1. De gegevens lieten zien dat het verlies van ARID1A expressie was significant gecorreleerd met de diepte van tumorinfiltratie (T stadium P Expression van ARID1A en klinische uitkomst De 5-jaars totale overleving bij patiënten met positieve en negatieve ARID1A expressie waren 68,8% en 52,2% respectievelijk. De totale overleving van patiënten met een negatieve ARID1A uitdrukking was beduidend slechter dan die van ARID1A-positieve patiënten ( P Om de effecten van ARID1A Ondanks de grote vooruitgang in de diagnostiek en therapie blijft maagkanker één van de meest dodelijke tumoren met een sombere prognose na radicale gastrectomie [14], [15]. De klinische resultaten van maagkanker wordt bepaald door een reeks tumorkarakteristieken, zoals locoregionale tumorgroei en invasie, differentiatiegraad, angiogenese, metastasen en voortgang van de celcyclus, welke door een verscheidenheid van verwante genen, zoals oncogenen en tumorsuppressor genen. Daarom identificatie van maagkanker biomerkers bij deze procedure is zeer belangrijk voor de diagnose, therapie en prognose voorspelling kliniek. ARID1A In de huidige studie hebben we aangetoond dat de ARID1A Tot op heden zijn de oorzaken van de ARID1A In de studie van Wang et al. Een Kaplan-Meier-analyse toonde een significante correlatie tussen het verlies van de ARID1A Wij verder onderzocht de functionele rol van ARID1A Tot slot hebben we het verlies van aangetoonde ARID1A Ethics Verklaring het onderzoek werd goedgekeurd door de ethische commissie van Sun Yat-sen University Cancer Center, en schriftelijke toestemming is verkregen van elke patiënt die betrokken zijn bij het onderzoek. cellijnen en Cultuur voorwaarden de maagkanker cellijnen, SGC7901, AGS, MGC803, en het maag-epitheliale slijmvlies cellijn GES1 werden verkregen uit het Comité van Type Culture Collection van de Chinese Academie van Wetenschappen (Shanghai, China). De cellijnen werden gekweekt in RPMI 1640 medium met 10% door warmte inactief foetaal runderserum (FBS) geleverd. De cellen werden bij 37 ° C in een vochtige kamer met 5% CO 2. Een totaal van 66 gepaarde kankercellen en geëvenaard aangrenzende goedaardige maagslijmvlies weefsels werden verzameld van maagkanker patiënten die gastrectomie bij Sun Yat-sen University Cancer Center tussen 2009 en 2011, en de diagnose werd bevestigd door pathologisch onderzoek. De 25 gepaarde kankercellen en bijbehorende aangrenzende goedaardige maagslijmvlies weefsels gebruikt om de ARID1A eiwitexpressie in western blotting detectie werden geselecteerd uit de 66 gepaarde monsters. Na chirurgische resectie werden verse weefsels onmiddellijk gedompeld in RNAlater (Ambion, Inc., USA) RNA degradatie te voorkomen, bewaard bij 4 ° C gedurende de nacht grondige penetratie van RNAlater penetratie in het weefsel en vervolgens ingevroren bij -80 ° C tot RNA en eiwitextractie werd uitgevoerd. Een andere 224 in paraffine ingebedde primaire maagcarcinoom monsters die waren verzameld tussen 2003 en 2005, werden verkregen uit de Sun Yat-sen University Cancer Center. Geen van deze patiënten had radiotherapie of chemotherapie kregen voorafgaande aan operatie. De follow-up gegevens van de maagkanker patiënten in deze studie zijn beschikbaar en volledig zijn. Postoperatieve follow-up vond plaats bij onze polikliniek en inclusief klinisch onderzoek en laboratoriumtests om de 3 maanden voor de eerste 2 jaar, elke 6 maanden in het derde tot en met vijfde jaar, jaarlijks voor nog eens 5 jaar of tot overlijden van de patiënt, wat het eerst optrad. De histopathologische type en het stadium van maagkanker werden bepaald op basis van de criteria van de World Health Organization classificatie en de TNM stadium door de Unie voor Internationale Kanker Controle. Totaal RNA werd geëxtraheerd met behulp van TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, California, USA) volgens het protocol van de fabrikant. Totaal RNA-concentratie werd bepaald door het meten van absorptie bij 260 nm met een spectrofotometer NANO DROP (ND-1000, Thermo Scientific, USA). Reverse transcriptie (RT) naar de eerste streng cDNA synthese werd uitgevoerd met 2 ug totaal RNA behandeld met M-MLV reverse transcriptase (Promega, USA) volgens de aanbevelingen van de fabrikant. Het resulterende cDNA werd daarna onderworpen aan real-time kwantitatieve PCR voor het evalueren van de relatieve niveaus van mRNA ARID1A Kopen en GAPDH De gehomogeniseerde maagkanker monsters, waaronder tumor en nontumor weefsels en cellijnen werden gelyseerd in RIPA lysisbuffer, en de lysaten werden gedurende 30 minuten geoogst door centrifugatie (12.000 rpm) bij 4 ° C. Ongeveer 50 ug eiwit werden vervolgens gescheiden door elektroforese in een 12% natriumdodecylsulfaat polyacrylamidegel en overgebracht naar een polyvinylideen fluoride membraan. Na het blokkeren van de niet-specifieke bindingsplaatsen voor 60 min met 5% magere melk werden de membranen gedurende de nacht geïncubeerd bij 4 ° C met een monoklonaal antilichaam tegen ARID1A (Abgent primair antilichaam Company, USA, op 1:1000 verdunning) . De membranen werden vervolgens drie keer gewassen met TBST (Tris-gebufferde zoutoplossing met Tween-20) gedurende 10 min en geprobed met het mierikswortelperoxidase (HRP) geconjugeerd konijn anti-muis IgG antilichaam (Immunology Consultants Laboratory, USA, op 1: 2000 verdunning) bij 37 ° C gedurende 1 uur. Na drie wassen werden de membranen ontwikkeld door een versterkte chemoluminescentie systeem (Cell Signaling Technology, Danvers, Massachusetts, USA). De band intensiteit werd gemeten door densitometrie met de Quantity One software (Bio-Rad Laboratories, Hercules Inc., CA, USA). De eiwitniveaus werden genormaliseerd aan die van GAPDH gedetecteerd met muis-anti-humaan GAPDH monoklonaal antilichaam (Kang Chen Shanghai, China, bij een 1:10000 verdunning). De weefselcoupes werden paraffine ontdaan met dimethylbenzeen en gerehydrateerd tot 100%, 95%, 90%, 80% en 70% ethanol. Na drie wassingen in PBS (fosfaatgebufferde zoutoplossing), werden de objectglaasjes gekookt in antigeenterugtrekking buffer die 0,01 M natriumcitraat-zoutzuur (pH = 6,0) gedurende 15 min in een magnetron. Na spoelen met PBS werden de weefselcoupes geïncubeerd met primair antilichaam en de glasplaatjes werden daarna gespoeld in 3% quenching peroxidase oplossing (Invitrogen) om endogeen peroxidase te blokkeren. De coupes werden vervolgens geïncubeerd met een muizen monoklonaal antilichaam tegen ARID1A (Abgent primair antilichaam Company, USA, op 1:300 verdunning) bij 4 ° C geïncubeerd en vervolgens geïncubeerd met mierikswortel peroxidase (HRP) (DAKO ChemMateTM enVision Detection Kit) bij kamertemperatuur gedurende 30 min. Na wassen in PBS, werd de visualisatie signaal ontwikkeld met 3, 3'-diaminobenzidine (DAB) oplossing, en alle objectglaasjes werden tegengekleurd met hematoxyline. Als negatieve controles werden aangrenzende secties verwerkt zoals hierboven beschreven, behalve dat ze gedurende de nacht geïncubeerd bij 4 ° C in blokkerende oplossing zonder het primaire antilichaam. De totale ARID1A immunokleuring score werd berekend als de som van het percentage positief gebeitst tumorcellen en de kleuring intensiteit. Kort samengevat, het percentage positieve kleuring werd gescoord als 0 (0-9% negatief), 1 (10% -25%, sporadische), 2 (26% -50%, focale) of 3 (51% -100%, diffuse) en de intensiteit 0 (geen kleuring), 1 (zwakke kleuring), 2 (matig kleuring) en 3 (donkere kleuring). De totale immunokleuring score werd berekend met de waarde van het percentage positiviteit score × kleurintensiteit score, die varieerden van 0 tot en met 9. De expressie niveau van ARID1A werd gedefinieerd als volgt: "-" (negatieve score 0), "+" (zwak positief, score 1-3), "++" (positief, score 4-6), "+++" (zeer positief, score 7-9). Gebaseerd op de ARID1A expressieniveaus werden de maagkanker patiënten verdeeld in twee groepen:. Negatieve ARID1A expressie groep (ARID1A-) en positieve ARID1A expressie groep (ARID1A +, ARID1A ++ of ARID1A +++) expressieplasmide en Voorbijgaande transfecties Een eukaryote expressieplasmide pCMV6-Entry met de volledige lengte van de menselijke ARID1A Voor de knock-down van ARID1A celgroeisnelheid van MGC803 of GES1 cellen werd gedetecteerd door MTS celproliferatie assay. Cellen werden gezaaid in een 96-wells plaat met een dichtheid van 5 x 10 2 cellen per putje. De celgroeisnelheid werd gedetecteerd met celproliferatie MTS kit volgens de instructies van de fabrikant (Promega, USA). Elk experiment werd in drievoud uitgevoerd. Voor de kolonie formatie assay, ARID1A
gen codeert voor adenine-thymine (AT ) rijke interactieve-domein-bevattende eiwit 1A, die deelneemt aan chromatine remodeling. ARID1A
is gebleken te functioneren als een tumor suppressor in verschillende kankertypes. In de huidige studie, onderzochten we de expressie en prognose waarde van ARID1A
in het primair maagkanker. Intussen is de biologische rol van ARID1A
werd verder onderzocht met behulp van mobiele model in vitro.
Methodologie /voornaamste bevindingen
gen in primaire maagkanker pathogenese, real-time kwantitatieve PCR en western blotting werden gebruikt om de ARID1A
meningsuiting in gepaarde kankercellen en goedaardige weefsels te onderzoeken. Resultaten bleek afgenomen ARID1A
mRNA ( P
= 0,0029) en eiwitten ( P
= 0,0015) expressie in de meeste tumor dragende weefsels in vergelijking met het aangepaste naastgelegen niet-tumor weefsels, en maagkanker cellijnen. Om verder te onderzoeken van de clinicopathologische en prognostische rol van ARID1A
meningsuiting, voerden we immunohistochemische analyses van de 224 in paraffine ingebedde maagkanker weefsel blokken. Gegevens bleek dat het verlies van ARID1A
expressie was significant gecorreleerd met T-stadium ( P
= 0,001) en waardering ( P
= 0,006). In overeenstemming met deze resultaten, vonden we dat het verlies van ARID1A
expressie was significant gecorreleerd met een slechte overleving bij maagkanker patiënten ( P
= 0,003). Cox regressie analyses toonden aan dat ARID1A
expressie was een onafhankelijke voorspeller van de totale overleving ( P
= 0,029). Bovendien de functies van ARID1A
in de proliferatie en kolonievorming van gastrische cellijnen werden geanalyseerd door transfectie van cellen met volledige lengte ARID1A
expressievector of siRNA gericht ARID1A
. Het herstellen van ARID1A
expressie bij maagkanker cellen aanzienlijk geremd celdeling en de vorming kolonie. Silencing ARID1A
expressie in de maag epitheel cellijn aanzienlijk verbeterd celgroei tarief.
Conclusies /Belang
kan een belangrijke rol spelen rol bij maagkanker en kan dienen als een waardevolle prognostische marker en potentieel doelwit voor gentherapie bij de behandeling van maagkanker
Gene wordt geassocieerd met een slechte prognose in het jeugdwerk maagkanker. PLoS ONE 7 (7): e40364. doi: 10.1371 /journal.pone.0040364
in een leukemie cellijn resistentie tegen Fas-gemedieerde apoptose [10].
mutaties en verlies van BAF250a proteïne zijn gevonden correleren sterk met de ovariële clear-cell carcinoma en uterine laagwaardige endometrioïde carcinoom [11] - [13]. Deze waarnemingen geven aan dat ARID1A
is een potentiële kandidaat tumor suppressor gen. De klinische betekenis van deze differentiële expressie en de functie van het eiwit ARID1A worden niet genoemd vanwege het gebrek aan studies met verse humane tumormonsters. In de huidige studie analyseerden we de ARID1A
expressie bij maagkanker met behulp van real-time kwantitatieve RT-PCR, western blotting en immunohistochemie. Ondertussen hebben we gewezen op de relatie tussen de ARID1A
meningsuiting en clinicopathologische functies en geëvalueerd de prognostische waarde in post-resectie overleving van maagkankerpatiënten. Voorts evalueerden we de functionele rol van ARID1A
in de tumorigenese van primaire maagkanker door onderzoek van de in vitro proliferatie en kolonievorming in gastrische cellijnen.
Resultaten
mRNA expressie geanalyseerd door real-time kwantitatieve RT-PCR
werd bepaald door real-time kwantitatieve RT-PCR-tests in 66 gepaarde kankercellen en de afgedekte aangrenzende normale weefsels maagslijmvlies. ARID1A
expressie was significant lager bij 43 (65,15%) tumordragende weefsels in vergelijking met het aangrenzende niet-tumorweefsels ( P
= 0,0029, figuur 1).
figuur 2A en figuur 2B). Evenzo werd de ARID1A eiwitexpressie aanmerkelijk verminderd bij maagkanker cellijnen SGC7901, AGS, vooral in MGC803, vergeleken met een normale maag cellijn GES1 (figuur 2C).
Immunohistochemische analyse van expressie ARID1A bij maagkanker Tissue monsters en de relatie met de klinische en parameters
= 0,001) en tumor waardering ( P
= 0,006), maar niet met de leeftijd, geslacht, grootte van de tumor, metastasen op afstand (M-stadium), en tumor locus of lokale lymfeklier metastase (N-stadium).
= 0,003, log-rank test, figuur 4). Univariate Cox regressie analyses toonden aan dat de diepte van de tumor infiltratie, lokale lymfeknoop metastase metastasen op afstand, tumorgrootte en ARID1A expressie significant geassocieerd waren met overleving (tabel 2). Verder een multivariate Cox regressie analyse bevestigde de diepte van tumor infiltratie, lokale lymfeknoop metastase metastasen en ARID1A expressie als onafhankelijke voorspellers van de totale overleving maagkanker patiënten (tabel 2).
De rol van ARID1A
in de cel proliferatie en Colony Formation in MGC803 en GES1 cellijnen
op celproliferatie, de ARID1A
expressievector en de controlevector waren getransfecteerd in respectievelijk MGC803 cellen. ARID1A
expressie in getransfecteerde cellen werden gedetecteerd door western blotting (Figuur 5A). De celgroei test bleek dat de celgroei tarief ARID1A
getransfecteerde maagkanker cellen waren significant lager dan de controle-vector getransfecteerde maagkanker cellen (figuur 5C). Intussen is de efficiëntie van de kolonie formatie was significant ( P
= 0,0379) remde in ARID1A
getransfecteerde maagkanker cellen vergeleken met controle-vector getransfecteerde maagkanker cellen (figuur 5D). Om de proliferatie onderdrukking functie van de ARID1A
verder te bevestigen, we zwijgen opgelegd de ARID1A
expressie in GES1 cellijn met siRNA. De ARID1A
expressie in getransfecteerde cellen werden gedetecteerd door western blotting (Figuur 5B). We vonden dat het zwijgen van de expressie van de ARID1A
in GES1 aanzienlijk verbeterd proliferatie in vergelijking met mock siRNA behandeling (Figuur 5E).
Discussie
een nieuw geïdentificeerde tumor suppressor gen dat codeert voor een lid van SWI /SNF complex, een hoge mutatiefrequentie in blaaskanker, baarmoeder endometrioïde carcinoom, eierstok en endometrioid clear cell carcinoma [11] - [13], [16], [17]. In ovariële clear cell carcinoma, wordt gemeld dat ARID1A
mutatie significant geassocieerd met ARID1A immuunreactiviteit [18]. Onlangs, exome sequencing studie toonde aan dat ARID1A
wordt ook vaak gemuteerd bij maagkanker [19], [23]. Echter, tot nu toe de uitdrukking klinische betekenis en biologische functies van ARID1A
bij maagkanker zijn niet onderzocht. Daarom onderzochten we de expressie van ARID1A
bij maagkanker door real-time PCR, western blotting en immunohistochemie, naast de clinicopathologische en prognostische betekenis een grote menselijke monster. Bovendien, met behulp van in vitro cel model, onderzochten we ook de tumor suppressor rol van ARID1A
in de maag cellen in detail.
werd uitgedrukt zowel lagere mRNA en eiwitniveau bij maagkanker weefsels dan de overeenkomstige niet-carcinomateuze mucosa. In overeenstemming met deze moleculaire biologische bevindingen, immunohistochemische chemie met een anti-ARID1A antilichaam toonde aan dat ARID1A
werd volledig het zwijgen opgelegd in 115 van de 224 patiënten maagkanker monsters, met positieve uitdrukking in een andere 109 patiënten. Onze waarneming is in overeenstemming met een reeks studies onthullen of ARID1A
expressie vaak verloren of verminderd verschillende kanker weefsels en cellijnen, zoals borstkanker, baarmoederkanker endometrioïde carcinoom, eierstok en clear cell carcinoma endometrioid [13,18,20 en 21].
silencing nog niet volledig opgehelderd. De bestaande studies richten zich op mutaties in ARID1A
, met name in gynaecologische kanker. Het is gemeld dat een onzin of indel mutatie van ARID1A
werd gecorreleerd met verlies of vermindering van eiwit expressie in baarmoeder endometrioid carcinoom, eierstok endometrioid carcinoom en clear cell carcinoma [11] - [13], [18]. In een geïntegreerde genomische onderzoek, Mamo et al
. alleen te vinden een afgeknotte mutatie van ARID1A
in de T47D borstkanker cellijn, zonder enige mutatie in het 11 borstkanker monsters die DNA copy number verlies toonde op de 1p36.11 locus naast ARID1A
[22]. Acht van de negen monsters met DNA copy number verlies bij 1p36.11 hebben ook lage ARID1A eiwit expressie, wat suggereert een overeenstemming tussen DNA copy number verlies en ARID1A
inactivatie. In de exome sequencing studie van Wang et al
., In totaal 46 mutaties werd gevonden in 32 van de 109 (29%) maagkanker monsters, met 39 (85%) afgekapt mutaties [19]. Vierentwintig (75%) van de 32 maagkanker monsters met ARID1A
mutaties tonen ofwel verlies of aanzienlijk verminderd eiwitexpressie in vergelijking met degenen zonder ARID1A
mutatie. In tegenstelling, zijn er slechts 6 maagkanker monsters blijkt afwezig of zwak eiwit expressie in de afwezigheid van detecteerbare ARID1A
mutatie, wat suggereert dat andere mechanismen kunnen bijdragen aan ARID1A
inactivatie. Onlangs, een ander exome sequencing onderzoek van Zang et al
. Ook toonde ARID1A
mutaties in 8% van gastrische monsters, waarvan 75% verloren of verminderde de eiwitexpressie [23]. Interessanter beide studies toonden een hogere ARID1A
veranderingen in maagkanker monsters met microsatelliet instabiliteit (MSI) dan die met microsatelliet stabiliteit (MSS). Bovendien is de mutatie spectrum van ARID1A
verschilt tussen de twee genetische vormen van maagkanker, met de meeste indels in de MSI type en meer single-neucliotide variaties in het MSS type. MSI is gedefinieerd als indel mutaties binnen nucleotide repeats (bekend als microsatelliet gebieden) betrof DNA mismatch repair gen-inactivatie geïnduceerde replicatiefouten [24]. Voorgesteld als de initiërende genomische gebeurtenissen maagkanker, MSI leidt vaak tot oplopen van de kanker-gerelateerde genetische instabiliteit, zoals allelische verliezen en frameshift mutaties in genen betrokken bij celproliferatie regeling, apoptose en DNA herstel. Er is beschreven dat MSI optreedt in 25% tot 50% van sporadische maagkanker, die een unieke genetische ziekte type met verschillende klinische en pathologische kenmerken [24]. In de studie van Wang et al
., De indel mutatie snelheid (78%) van de ARID1A
in MSI maagkanker is vergelijkbaar met die van de TGFBR2
in MSI colon kanker, een gevestigde en functioneel gevalideerd bestuurder gen geïnactiveerd door MSI [25]. Deze gegevens geven aan dat de mutatie van ARID1A
met MSI kan een belangrijke rol spelen maagkanker. Daarom is de relatie tussen de ARID1A
wijzigingen en MSI status maagkanker, evenals zijn clinicopathologische betekenis, moet verder onderzoek in de toekomst onderzoek.
, de expressie van ARID1A
werd pas ontdekt in een klein formaat sample (32 gevallen), en er was geen verder onderzoek naar de klinische betekenis [19]. Hier, in groter maagkanker populatie (224 gevallen), we vonden dat het verlies van ARID1A
expressie was significant gecorreleerd met een hoger T-stadium van maagkanker, wat impliceert dat het ontbreken van ARID1A
expressie kan tumorgroei en invasie te bevorderen. Daarnaast ontdekte we lager ARID1A immunoreactiviteit in slecht gedifferentieerde maagkanker weefsels dan in goed gedifferentieerde degenen, wat suggereert dat verminderde ARID1A
expressie kan een rol spelen in tumor de-differentiatie te spelen. In overeenstemming met onze bevindingen andere onderzoekers vonden ook dat verminderde ARID1A
expressie significant geassocieerd met een hogere graad van borstkanker [22], evenals hogere FIGO stadium ovarium clear cell carcinoma [21]. ARID1A bevordert de vorming van BRG1 of BRM-contained SWI /SNF chromatine hermodellering complexen, die essentieel voor normale celcyclus [9] zijn [26].
meningsuiting en slechtere klinische uitkomst van maagkanker patiënten na radicale operatie. Cox hazard ratio regressieanalyses verder aangetoond dat de ARID1A
expressieniveau een onafhankelijke risicofactor voor overleving, suggereert dat het een waardevolle prognostische biomarker voor maagkanker patiënten na een operatie en een potentieel doelwit voor gentherapie in diene de behandeling van maagkanker. In ovariële clear cell carcinoma, werd ook gemeld dat patiënten met een positieve ARID1A
uitdrukking hadden een langere progressievrije overleving dan die met negatieve ARID1A
expressie [21]. Bovendien is het verlies van ARID1A
expressie significant gecorreleerd met chemoresistance ovarium clear cell carcinoma, die ook geassocieerd met een slechte prognose van kanker. Deze gegevens suggereren dat ARID1A
meningsuiting en mutatie onderzoek kan nuttig zijn voor het begeleiden van klinische behandeling zijn. Samengevat, onze waarnemingen dat het verlies van ARID1A
expressie maagkanker is toegewezen aan meer kwaadaardige fenotypes en een slechtere prognose impliceren dat het een tumor suppressor rol maagkanker kunnen spelen.
in de maag cellijnen. Het herstellen van ARID1A
expressie bij maagkanker cellen aanzienlijk geremd celdeling en de vorming kolonie. Tot zwijgen brengen van de expressie van de ARID1A
in de maag epitheelcellen aanzienlijk verbeterd de celgroei tarief. Deze aangegeven resultaten die ARID1A
kan een import rol spelen bij het remmen van de groei van tumorcellen te spelen. Onlangs, functionele testen van de ARID1A
bij maagkanker cellijnen door Zang et al
. gesuggereerd dat ARID1A
oefenen tumor-suppressor activiteit [23]. Guan et al
. aangetoond dat het herstel van de expressie van wild-type ARID1A
voldoende is om de proliferatie en tumorigenecity van xenotransplantaten met menselijke eierstokkanker cellijnen herbergen onderdrukken ARID1A
mutaties, terwijl RNA interferentie-gemedieerde ARID1A
silencing bevordert celproliferatie en tumorvorming in twee niet-getransformeerde humane epitheliale eierstokkanker cellijnen, IOSE-80pc en OSE4 [27]. Deze gegevens, samen met ons, wijzen erop dat het verlies van ARID1A
kan een belangrijke rol spelen in het proces van carcinogenese te spelen.
expressie in maagkanker en zijn correlatie met een kwaadaardig fenotype en slechtere prognose van een groot aantal klinische monsters. Daarnaast bleek dat we ARID1A
kan tumor celgroei en kolonievorming in vitro te remmen. Om het beste van onze kennis, de opgewekte in de huidige studie gegevens vormen de eerste rapport het correleren van de aanwezigheid van ARID1A hotels met klinisch-pathologische kenmerken en de algehele overleving van maagkankerpatiënten. Samen met de resultaten van Wang et al. Kopen en Zang et al
. [19], [23], we verder bevestigd dat de ARID1A
zou kunnen dienen als een kandidaat tumor suppressor en prognostische biomarker in de maag carcinogenese.
Materialen en methoden
Human Tissue Sample s
Extraction van Total RNA en real-time kwantitatieve PCR
(glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase, als een interne controle) met de volgende primers: ARID1A
forward: 5'-CTTCAACCTCAGTCAGCTCCCA-3 ', en reverse: 5'-GGTCACCCACCTCATACTCCTTT-3'; GAPDH
forward: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 ', en reverse: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'. Genspecifieke amplificatie werd uitgevoerd met een ABI 7900HT real-time PCR systeem (Life Technologies, Carlsbad, California, USA) met een 15 pi PCR-mix met 0,5 pi cDNA, 7,5 ul 2 x SYBR Green master mix (Invitrogen, Carlsbad , California, USA) en 200 nM van de geschikte oligonucleotideprimers. Het mengsel werd voorverwarmd tot 95 ° C (10 min) en vervolgens versterkt bij 95 ° C (30 sec) en 60 ° C (1 min) gedurende 45 cycli. De resolutie curve gemeten bij 95 ° C gedurende 15 sec, 60 ° C gedurende 15 sec en 95 ° C gedurende 15 sec. De Ct (cyclus drempelwaarde) van elk monster werd berekend uit de drempel cycli met het instrument software (SDS 2,3) en de relatieve expressie van ARID1A
mRNA werd genormaliseerd op de GAPDH
value . Gegevens werden geanalyseerd met de vergelijkende drempelcyclus (2 -ΔCT) methode.
Western vlekanalyse
Immunohistochemische analyse
cDNA werd verkregen uit de Asbio Technology Company (Guangzhou, China). Lege vector werd gebruikt als negatieve controle. MGC803 cellen werden gekweekt in 6-putjesplaten tot zij 85-90% confluentie bereikt, en vervolgens werden transiënte transfecties uitgevoerd met gebruik van Lipofectamine 2000 (Invitrogen) volgens de instructies van de fabrikant. Achtenveertig uur na transfectie werd genexpressie onderzocht door western blot analyse. En dan, cel proliferatie en kolonievorming werden uitgevoerd.
RNA oligonucleotiden en Cell transfecties
uitdrukking, de siRNA's werden gesynthetiseerd door GenePharma Company (Shanghai, China). Het siRNA sequenties waren als volgt: siRNA- ARID1A
, sense: 5'GCCCUAACAUGGCCAAUAUTT3 ', antisense: 5'AUAUUGGCCAUGUUAGGGCTT3'. De negatieve controle (NC), sense: 5'UUCUCCGAACGUGUCACGUTT3 ', antisense: 5'ACGUGACACGUUCGGAGAATT3'. 400 pmol siRNA- ARID1A
of NC getransfecteerd in 2 × 10 5 GES1 cellen met gebruik van Lipofectamine RNAi MAX reagens (Invitrogen, USA) volgens het protocol van de fabrikant. Daarna werd celproliferatie vervolgens uitgevoerd.
Proliferation Assay
Colony Formation Assay
tot expressie brengen MGC803 cellen of controle MGC803 cellen werden in een 6-well plaat bij een dichtheid van 5 x 10 2 cellen per putje. Na 10 dagen van cultuur, overlevende kolonies (> 50 cellen per kolonie) werden geteld met crystal violet (0,5%) kleuring. Kolonie vormende efficiëntie (CFE%) werd gedefinieerd als de verhouding van het aantal kolonies gevormd in een kweek het aantal cellen geïnoculeerd.
Migratie beïnvloedt de darmflora, wat op zijn beurt de gezondheid beïnvloedt, vinden onderzoekers
Darmmicrobioom verandert bij het koken van plantaardig voedsel,
Bepaalde bacteriesoorten kunnen het hiv-risico bij vrouwen verhogen,
Dieet en voeding beïnvloeden het microbioom in het colonslijmvlies
Darm- en orale microbiomen voorspellen de ernst van COVID-19
E. coli superbacteriën verspreiden door slechte toilethygiëne,
Antibioticum X-206 effectief tegen SARS-CoV-2 in vitro
De COVID-19-pandemie blijft veel ernstige en dodelijke gevallen van longziekte veroorzaken, vaak eindigend in multi-orgaandisfunctie en cardiovasculaire collaps. Zonder vaccin of bewezen therapie, kli
Orgaanchiptechnologie verbetert de studie van de darm voor gepersonaliseerde geneeskunde
Onderzoekers hebben orgaanchiptechnologie ontwikkeld met behulp van van donoren afgeleide menselijke darmcellen die voordelen biedt ten opzichte van organoïden en nieuwe mogelijkheden biedt voor geper
Plantaardig dieet kan je reumatoïde artritis genezen
Volgens de laatste recensie, het aannemen van een plantaardig dieet zou de gezwollen gewrichten en pijn van reumatoïde artritis (RA) goed kunnen verlichten. RA is auto-immuun van oorsprong, een pijn