PLoS ONE: Geresnis priešvėžiniai veikla nanodalelių albuminu sujungto Paklitakselis eksperimentinėmis Skrandžio Cancer

Anotacija

Skrandžio vėžys yra antra dažna vėžio susijusių mirčių visame pasaulyje ir trūksta labai veiksmingo gydymo, progresavusia liga. NAB-paklitakselis yra naujas mikrotubulės slopinantis citotoksinis agentas, kuris nebuvo išbandytas skrandžio vėžio kol kas. Šiame tyrime, žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos "AGS, NVI-N87 ir SNU16 buvo tirta. NAB-paklitakselio slopina ląstelių proliferaciją su 5 Nm SNU16, 23 nm AGS 49 nm NVI-N87 ląstelių po 72 valandų gydymo IC50, kuris buvo mažesnis nei oksaliplatina (1,05 m iki 1,51 mkm) ir epirubicino ( 0,12 m iki 0,25 mkm). NAB-paklitakselio gydymo padidėjo išraiška mitozinis-veleno, susijusio fosfo-stathmin nepriklausomai nuo pradinio viso ar fosforilinto stathmin lygio, ir sukeliama mitozinę ląstelių mirtį, kaip patvirtinta didinant išraiška suskaldyti-PARP ir kaspazė-3. Po dviejų savaičių krantinė-paklitakselio, oksaliplatina arba epirubicino gydymą, in vivo vietos naviko augimo slopinimas norma vidurkis buvo 77, 17,2 ir 21,4 proc, atitinkamai (p = 0,002). Poveikis terapija Auglio proliferacijos ir apoptozinių indeksų susirašinėjo su naviko augimo slopinimas duomenimis, o išraiška fosfo-stathmin taip pat padidėjo audiniuose. Įvyko vidurine gyvūnų išlikimo padidėjo po krantinė-paklitakselio gydymo (93 dienos), lyginant su kontroline grupe (31 dienų, p = 0,0007), oksaliplatina (40 dienų, p = 0,0007), arba kitų gydymo kursų (81 dienų, p = 0,0416) , Stiprus priešnavikinis aktyvumas nab-paklitakseliu eksperimentinės skrandžio vėžiu, duomenys patvirtina tokį mikrotubulės slopinantis strategiją klinikinėje praktikoje. NAB-paklitakselį nauda buvo pastebėta nepriklausoma nuo fosforilinto stathmin išraiška pradinio, išleisti abejonių dėl krantinė-paklitakselio vartojimo apsvarstyti skrandžio vėžio remiantis šio spėjamą biologinis žymuo

nurodomoji dalis:. Zhang C Awasthi N. Schwarz MA, Hinz S Schwarz RE (2013) Geresnis priešvėžiniai veikla nanodalelių albuminu sujungto Paklitakselis eksperimentinėmis skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (2): e58037. Doi: 10,1371 /journal.pone.0058037

redaktorius: Lu-Gang "J., University of Liverpool, Jungtinė Karalystė

Įstojo lapkričio 20 d, 2012 m Priėmė: Sausis 29, 2013 m Paskelbta 27 vasario 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Zhang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Autoriai neturi paramą ar finansavimą pranešti

konkuruojančių interesų. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra ketvirtas labiausiai paplitusi. vėžys ir antra dažniausia vėžio susijusių mirčių visame pasaulyje [1] - [3]. Dauguma pacientų progresavusio arba metastazavusio ligos diagnozės metu [4], [5]. Iš oksaliplatinos ir 5-fluorouracilu, derinys su ir be epirubicino, tapo plačiausiai naudojamas režimas į pirmos eilės chemoterapija, išplitusiu skrandžio vėžiu, [6], [7]. Tačiau šis derinys gydymas turi nemažų šalutinio poveikio potencialą ir vis dar neša ribotą efektyvumą, o pacientų prognozės išlieka niūrus su išgyvenamumo mediana maždaug 10 mėnesių [8] - [11]. Siekdama pagerinti išgyvenamumą bei sumažinti toksiškumą, molekules skirta terapija yra aktyviai tiriami dėl skrandžio vėžio [12] gydymą.

Mikrovamzdeliai jau seniai laikoma interesų tikslą kai priešvėžinių vaistų, nes universalus jų vaidmuo proliferuojančias ląstelių ir jų esminis vaidmuo mitozės [13] - [15]. Paklitakselis ir docetakseliu klasikiniai mikrotubulės inhibitoriai, darančių savo veiklą skatinant tubulino polimerizacija ir stabilizuoti mikrovamzdeliai todėl G2-M fazės arešto ir mitoziniam ląstelių mirtis [15]. Mitozinis ląstelių mirtis yra ląstelių mirties režimas vyksta specifiškai per mitozės etapus sukeltų DNR kenkia agentų ir suklio nuodų /mitozės inhibitorių [16], [17]; tai daugiausia kaspazės priklauso, bet pagal retais atvejais taip pat gali būti kaspazės nepriklausomą [18]. Paklitakselis buvo išbandytas pažengusiems ir pasikartojančių skrandžio vėžio su atsako dažnis 43% kartu su 5-fluorouracilu ir folino rūgšties [9], [19]. Palyginti su atsako norma 38~45% uždirbtų gavus iš oksaliplatina kartu su 5-fluorouracilu ir folino rūgšties, paklitakselio nesukėlė aukščiausios išlikimo, bet sukelia daugiau šalutinių poveikių, ypač senyviems pacientams [9], [20] - [ ,,,0],22]. Paklitakselis reikia emulsija su tirpikliais leisti į veną, kuri lėmė padidėjusio jautrumo reakcijų ir potencialiai dramatiškų šalutinį poveikį [23], [24] pacientų. Nanodalelių albuminu sujungto (Nabi) paklitakselis yra naujas albuminu stabilizavosi, Cremophor-nemokamai ir vandenyje tirpaus paklitakselio nanodalelių preparatas. Jis yra gerai toleruojamas, be padidėjusio jautrumo reakcijų po intraveninės infuzijos būdu [25]. Klinikinių ir eksperimentinių tyrimai parodė, kad, palyginti su tirpiklio pagrindo paklitakselio, Nabi-paklitakselis buvo didesni naviko užlaikymą, mažesnį toksiškumą [23], [26] ir daugiau stiprių priešvėžinius poveikį krūties vėžio, nesmulkiųjų ląstelių plaučių karcinoma (NSLPV), kasos vėžio, melanomos, ir galvos ir kaklo vėžys [27] - [31]. Tačiau, galimas vaidmuo nab-paklitakseliu skrandžio vėžio ląstelių nėra patikrintas kol kas

Stathmin A mikrotubulės-destabilizuoti fosfoproteinu, yra svarbus reguliatorius mikrotubulės polimerizacijos ir dinamikos [32] - [34]. ir buvo nustatyta, kad susijęs su atsparumu taksano kai naviko tipų per keičiant vaistą privalomas ir vėlesnis G2-M fazės perėjimą [33], [35]. Stathmin slopinimas buvo sinergetinį antiangiogeniniai ir priešvėžinėmis su Taxol [36]. Stathmin išraiška buvo nustatyta, kad būti pateikti įvairių žmogaus vėžio, įskaitant skrandžio vėžio, ir todėl gali yra patraukli tikslą vėžio gydymo [34], [37], [38]. Jeon ir kt. nustatė, kad stathmin gali tarnauti kaip prognostinis persekiotoją ir galimą terapinį tikslą skrandžio vėžio [37]. Fosforilinimas stathmin sumažina savo mikrotubulės destabilizuojančius poveikį, reiškinį, kad taip pat buvo priskirta prie taksano veiklos [34].

Šis tyrimas įvertino priešvėžiniai veiklą nab-paklitakseliu žmogaus skrandžio vėžio ląsteles in vitro ir in vivo. Mes palyginti priešvėžiniai efektyvumą nab-paklitakseliu kitiems citotoksiniais preparatais dėl vietos naviko augimui ir gyvūnų išlikimą. Mes taip pat išmatavo visų stathmin ir fosfo-stathmin in vitro ir in vivo išraiška įvertinti kaip prognozavimo žymenų NAB-paklitakselio priešvėžiniai reagavimo savo vaidmenį.

Medžiagos ir metodai

Mobilaus ryšio kultūrą ir reagentai

žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas, AGS, NVI-N87 ir SNU16 buvo gauta iš amerikiečių tipas kultūros kolekcijos (ATCC, Rockville, MD) ir auginamos RPMI 1640 terpė ( "Sigma Chemical Co St Louis, MO ), papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS), esant 37 ° C temperatūroje drėgnoje 5% CO _{2 atmosferos. Nab-paklitakselis buvo įsigytas iš Abraxis Bioscience (Los Andželas, CA). Oksaliplatina buvo įsigytas iš "Sanofi Aventis (Bridgewater, NJ). Docetakselis, epirubicino ir 5-fluorouracilu buvo gauti iš vietos vaistinėje. Ląstelių proliferacija reagentas WST-1 buvo įsigytas iš Roche Diagnostic Corporation (Indianapolis, IN).}

Mobilusis gyvybingumo tyrimą

Ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas kolorimetriniu WST-1 metodu. Matavimo remiasi gyvybingų ląstelių gebėjimą skilti Sulfonintus tetrazolio druskos BTS-1 (4- [3- (4-jodfenil) -2- (4-nitrofenil) -2H-5-tetrazolio] -1, 3- benzeno disulfonatas) iki mitochondrijų dehidrogenazės [39]. Skrandžio vėžio ląstelės (5000 ląstelių viename šulinėlyje) buvo padengtą į 96-šulinėlių plokštelės, kad reguliariai augimo terpėje ir buvo gydomi nab-paklitakselio, 5-fluorouracilo, oksaliplatinos ir epirubicino po 16 valandų inkubacijos. Tas koncentracijos vertes naudojamas (1 nm iki 10 mkm) buvo panašus į jų kliniškai pasiekiamus koncentracijos. Po to, kai papildomos inkubacijos 72 valandų, 10 mikrol, BTS-1 reagentas buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį po inkubacijos 2 valandas. Absorbcija esant 450 nm buvo matuojamas naudojant microplate skaitytuvą.

Mobilaus ryšio ciklo analizė

Mobilusis ciklo analizė buvo atlikta tėkmės citometrijos su fluorescencinė propidiumo jodido (PI) dėmių. Ląstelės buvo auginamos ir apdorojimo su nab-paklitakselio, oksaliplatinos, epirubicino ir docetakseliu 8 iki 24 valandų. tada ląstelės buvo surinkti ir sumontuoti 75% etanolio-PBS per naktį -20 ° C temperatūroje. Ląstelės buvo centrifuguojamas 5 min, esant 2000 × g. Ląstelių nuosėdos buvo resuspenduotos ir inkubuojami 0,05 mg /ml PI, 0,1% Triton X-100, ir 1 mg /ml RNaze A PBS 45 min kambario temperatūroje. po to suspensija buvo analizuojama Becton Dickinson FACScan. Iš ląstelių sub-G1 santykis, G1, S ir G2-M fazės ląstelių ciklo buvo

imunocitocheminiam analizė

Skrandžio vėžio ląsteles (1 × 10 lemia jų DNR kiekiui. ^{5 ląstelės per kamerą) buvo padengtas į 4 kamerų skaidrę reguliariai augimo terpėje. Po to, kai 24-valandą ląstelės buvo gydomi nab-paklitakselio 16 valandų ir tada tvirtinama 4% paraformaldehido. Ląstelės inkubuojamos su CAS blokuojančio buferio po 1 val inkubavimo su fosfo-stathmin antikūnas (1:100) ir 40 minučių inkubacijos su Cy3 (1:200 skiedimo) antrinio antikūno. Skaidrės buvo sumontuoti naudojant tvirtinimo tirpalas, kuriame yra 4 ", 6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) (Invitrogen, Karlovi Varai, Kalifornija). Fluorescencijos mikroskopija buvo naudojamas siekiant aptikti liuminescencines signalus per IX81 Olympus mikroskopą įrengta Hamamatsu "Orca skaitmeninio fotoaparato (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ).}

Vakarų dėmė analizė

subfondas monosluoksniai ląstelių buvo gydomi nab-paklitakselio, oksaliplatina ir epirubicino. buvo gauti ląstelių fragmentai, ir naviko fragmentai kaip buvo aprašyta anksčiau [40]. Supernatantų, padengtos centrifuguojant 13000 rpm, baltymų koncentracija buvo matuojamas ir lygios sumos nuo bendros baltymų buvo atskirtos SDS-PAGE. Baltymai buvo perkelti į PVDF membranų (Bio-Rad, Hercules, CA) ir membranos buvo blokuojamas 1 valandą TBS-T. Membranos buvo inkubuojami per naktį 4 ° C temperatūroje su šių antikūnų: bendras stathmin, fosfo-stathmin (ser38), suskaldyti poli (ADP-ribozė) polimerazę-1 (PARP-1), suskaldyti kaspazė-3 (visi iš ląstelių signalizavimo technologijos Beverly, MA), α-tubulino ir β-aktino (tiek Sigma, St Louis, MO). tada Membranos buvo inkubuojami su atitinkamais HRP-konjuguoto antrinių antikūnų (Pierce biotechnologijos, Santa Cruz, CA) vieną valandą. Konkretūs juostos buvo nustatytas taikant sustiprintas chemoilluminescence reagentą (ECL, Perkino Elmer Gyvosios gamtos mokslai, Bostonas, MA) ant autoradiografinę filmas.

oda naviko augimo tyrimas

Visi bandymai su gyvūnais buvo atliekami pagal gaires ir patvirtinti protokolai Teksaso pietvakarių medicinos centro (Dallas, TX) instituciniai gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto (leidimo numeris 2012-0081) universitete. Gyvūnai buvo stebimi kasdien visame bet kokios nelaimės ženklas eksperimentą. Moteris SCID peles (nuo 6 iki 8 savaičių) buvo naudojamas lyginamasis modeliavimas oda naviko augimą. Skrandžio vėžio ląstelės (10 × 10 ^{6 NVI-N87 arba 20 × 10 6 SNU16 ląstelių) buvo po oda sušvirkšti į kiekvieną pele. Pelių buvo pasverti du kartus per savaitę. Praėjus keturiolikai dienų po naviko ląstelių injekcijos, visos pelės turėjo išmatuojamą naviką (vidutinis naviko dydį nuo 100 iki 150 mm 3). Pelės buvo tada atsitiktinai sugrupuoti (n = 6~8 kiekvienai grupei) ir apdorojimo pilvaplėvės ertmę su PBS (reguliuojamas), NAB-paklitakseliu (10 mg /kg, 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę), oksaliplatina (5 mg /kg iš 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę), o epirubicino (1 mg /kg 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę) už 14 dienų. Navikas dydis buvo matuojamas du kartus per savaitę per slankmačiu, ir naviko tūris (V) buvo apskaičiuojamas pagal formulę V = ½ [L × (W) 2], L = ilgis ir W = plotis. Santykinis naviko tūris (RTV) buvo nustatomas pagal formulę RTV = V _{N /V 0 čia: V 0 ir V 1 atstovauti naviko tūris diena 0 ir tolesnės matavimo dieną, atitinkamai. Navikas augimo slopinimo greitis buvo apskaičiuojamas pagal formulę (1-RTVt /RTVc) × 100%, kur t ir C pavyzdžiai gydymui ir kontrolei grupę. Baigus gydymą, visos pelės buvo numarinti CO2, augliai buvo pašalintas, pasverti, išpjaustytų ir tvarkomi histologinių, Imunohistocheminiais ir Vakarų blot analizė.}}

Imunohistocheminis analizė

vėžinių audinių mėginiai buvo nustatytas 4% paraformaldehidas ir įdėta į parafiną. Naviką proliferacija matuojama KI67 atominės antigeno dažymo pagal gamintojo protokolu (Abcam, Cambridge, MA). Parafino įterptųjų audinio skyriai buvo sumažinti (5 mkm), deparaffinized, rehidrataciją ir antigeno paimti. Audinių skyriai buvo inkubuojami su CAS blokuojančio buferio po 1 val inkubavimo su 1:200 praskiedimo pirminės KI67 ar fosfo-stathmin antikūnas (1:200) ir 40 minučių inkubacijos su Cy3 (1:200 skiedimo) antrinio antikūno. Skaidrės buvo sumontuoti naudojant tvirtinimo tirpalas, kuriame yra 4 ", 6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) (Invitrogen). Naviką proliferacijos žymuo ir stathmin veikla buvo įvertinta apskaičiuojant teigiamų ląstelių iš penkių skirtingų didelės galios laukų (HPF) A aklu būdu. Naviką aprotoninis veikla buvo įvertinta dažymo audinių atkarpas su "Apoptag apoptozę Detection Kit" Pasak gamintojo (MILLIPORE) nurodymus. Fluorescencijos mikroskopija buvo naudojamas siekiant aptikti liuminescencines signalus per IX81 Olympus mikroskopą įrengta Hamamatsu "Orca skaitmeninio fotoaparato (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ) ir SGS verpimo Confocal vieneto naudojant Slidebook programinę įrangą (" Pažangi Imaging Inovacijos, Filadelfija, PA).

gyvūnų išgyvenamumo analizė

gyvūnų išgyvenimo tyrimai buvo atlikti naudojant 6 iki 8 savaičių amžiaus Patelė SCID peles [41]. Pelės buvo pilvaplėvę įšvirkščiama SNU16 (40 × 10 ^{6) ląstelės ir kūno svorio buvo matuojamas du kartus per savaitę. Tris savaites po naviko ląstelės įpurškimo pelių buvo atsitiktinai sugrupuoti (n = 6 iki 8 vienai grupei).}

pirmą išgyvenimo tyrimo metu pelės buvo gydomi į pilvo ertmę su PBS (reguliuojamas), NaB-paklitakselio (10 mg /kg 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę), o oksaliplatina (po 5 mg /kg 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę) 2 savaites. Antroje išgyvenimo tyrimo metu pelės buvo gydomi į pilvo ertmę su PBS (reguliuojamas), NaB-paklitakselio (10 mg /kg kūno svorio 100 pL PBS, 2 kartus per savaitę), docetakselio (3 mg /kg 100 pL PBS, 2 kartus per savaitę ) arba oksaliplatina (5 mg /kg 100 iL PBS, 2 kartus per savaitę) 2 savaites. Gyvūnų kančios buvo sumažintas euthanizing sukant gaištantį pagal iš anksto nustatytus kriterijus, įskaitant greitas svorio kritimas ar padidėjimas (> 15%), nesugebėjimą valgyti ar gerti, letargija, nesugebėjimas likti vertikalioje padėtyje ir stiprybės stoką. Gyvūnų išlikimo buvo įvertintas nuo pirmos dienos gydymo iki mirties.

Statistinė analizė

išgyvenimo analizė buvo įvertintas GraphPad Prizmė 5 programinę įrangą (GraphPad Programinė įranga, San Diegas, CA). In vitro ląstelių proliferaciją duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis. Statistinė analizė buvo atlikta ANOVA daugkartiniam grupės palyginimo ir Stjudento t-testą dėl individualaus grupės palyginimui. Išgyvenimo grupė palyginimas buvo atliktas per žurnalo rango bandymo per Kaplan-Meier tipo analizės. buvo laikomi 0.05 atstovauti statistiškai reikšmingų grupinių skirtumų

Rezultatai

Stathmin išraiška skrandžio vėžio ląstelių

analizė žmogaus skrandžio vėžio ląstelių AGS, NCI-; P verčių <. N87 ir SNU16 atskleidė, kad visos trys linijos išreiškė stathmin. Ne visos stathmin išraiška skirtumas buvo tarp šių trijų ląstelių linijų. Išraiška fosfo-stathmin svyravo tarp ląstelių linijų, tokia tvarka: SNU16 > AGS > NVI-N87 ląstelės (1A pav.)

Nabi-paklitakselio slopina skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją

Nabi-paklitakselio slopina skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją nuo dozės priklausomas mados ir slopinti ląstelių proliferaciją pasirodė sekti pačia tvarka, kaip išraiškos fosfo-stathmin (1b pav.) 100 nM koncentracijos slopinimo ląstelių proliferaciją buvo 94,5, 66,7 ir 41,8 proc SNU16, AGS ir NVI-N87 ląstelių atitinkamai. Nab-paklitakselio parodė aukščiausią proliferaciją potenciją su mažiausią veiksmingą dozavimo rasti visose 3 ląstelių linijų išbandė, palyginti su 5-fluouracil, oksaliplatina ir epirubicino. IC _{50 nab-paklitakseliu buvo 5 Nm SNU16, 23 nm AGS ir 49 nm NVI-N87 ląsteles, kuris buvo mažiau nei 5-fluouracil (6,46 mkm SNU16, > 10 mkm AGS ir 10,2 mkm NVI-N87 ląstelių), oksaliplatina (1,51 mkm SNU16, 1,64 mkm AGS ir 1,05 mkm NVI-N87 ląstelių) arba epirubicino (0,12 mkm SNU16, 0,16 mkm AGS ir 0,25 mkm NVI-N87 ląstelių) ( 1C pav.)}

Nabi-paklitakselis sukelia G2 suėmimą ir mitozės ląstelių žūtį in vitro

Jei įvertinti sukeliančiam mechanizmui augimo slopinimo NAB-paklitakseliu, ląstelės ciklo profilis buvo analizuojami. Kaip parodyta 2A pav, krantinė-paklitakseliu (100 nm) lėmė G2-M ląstelės ciklo arešto SNU16 ląsteles. Iš propidiumo jodido teigiamų ląstelių procentas G2-M etape padidėjo nuo 35,6 iki 71,6, po 100 Nm krantinė-paklitakselio gydymo 12 valandų. Panašūs pokyčiai įvyko AGS ir NVI-N87 ląstelių su nab-paklitakseliu ir docetakselio vartojimą, bet ne su oksaliplatina ir epirubicino gydymo (duomenys S1 ir S2).

efektas nab-paklitakseliu apie mitoziniam ląstelių žūtį, saviraiškos fosfo -stathmin ir apoptozę susiję baltymai buvo matuojamas immunocystochemistry ir Vakarų dėmė. Nab-paklitakselio gydymo sukelia mikrotubulės sutrikimų ir mitozės areštų skrandžio vėžio ląsteles kaip pastebėjo branduolio fragmentacija ir karyopyknosis (2b pav.) Išraiška fosfo-stathmin buvo padidinta po krantinė-paklitakselio gydymo ir didesnė raiška fosfo-stathmin buvo susijęs su didesniu laipsniu mitozės suėmimus, branduolys skaidyti ar karyopyknosis ir ląstelių mirtį (2b pav ir 2C). Branduolinės suskaidymas ir karyopyknosis įvyko 16,7% Ląstelių, turinčių mažą išraiška fosfo-stathmin bet 95,7% Ląstelių, turinčių aukštos raiškos fosfo-stathmin (r = 0.672, p < 0,001). Taip pat buvo įrodymų laiko priklausomos padidėjusio išraiška fosfo-stathmin iki Nabi-paklitakselio gydymo (2d pav.)

Mes išnagrinėjome jei mitozinis ląstelių mirtis, sukelta NAB-paklitakseliu iš dalies galėtų būti susijęs su indukcija apoptozės , Vertinimas PARP-1 skilimo ir kaspazės-3 skilimo kaip žymenų indukcijos apoptozės atskleidė, kad skrandžio vėžio ląstelių krantinė-paklitakselio, oksaliplatina ir epirubicino gydymas sukėlė išraiškos padidinti tiek prilipdavo PARP-1 ir kaspazės-3. Tai apoptozės susijusių baltymų ekspresija atsirado didesnė po krantinė-paklitakselio gydymo, palyginti su oksaliplatina arba epirubicino gydymo (2e pav.)

Nabi-paklitakselio slopina skrandžio vėžio audiniuose, augimą

vivo priešvėžiniai poveikis nab-paklitakseliu buvo įvertintas pelių ksenografiniuose modelį naudojant SNU16 ląsteles. NAB-paklitakselio gydymo 10 mg /kg kūno svorio du kartus per savaitę dvi savaites buvo gerai toleruojamas, be akivaizdžių toksiškumo požymių, kaip vertinami pagal pelės svorio ir kasdien vertinimą. Po dviejų savaičių gydymo, Nabi-paklitakselio gydymo rezultatai sąlygojo statistiškai reikšmingas vėžinių augimo slopinimo (p = 0,0004), kuri buvo didesnė nei oksaliplatina (p = 0,0361) ir epirubicino (p = 0,032), palyginti su transporto priemonių kontrolę, atitinkamai (paveikslas 3A). Navikas augimo slopinimo greitis po 2 savaičių gydymo Nabi-paklitakselio, oksaliplatinos ir epirubicino buvo 77, 17,2 ir 21,4 proc (p = 0,002), atitinkamai. Tik krantinė-paklitakselio gydymo sukūrė dydį sumažinti poodinių pažeidimų, palyginti su jų preestablished naviko dydžio. Reiškia naviko svoris buvo žymiai sumažėjo Nabi-paklitakselio gydymo (0.154 ± 0,075 g vs 0,756 ± 0.232 g, p = 0,037), tačiau ne oksaliplatina (0,408 ± 0,12 g) arba epirubicino (0,46 ± 0,172 g) gydymo, palyginti su transporto priemonės kontrolė, atitinkamai (3A pav.) Mes taip pat įvertino priešvėžiniai poveikį nab-paklitakseliu apie NVI-N87 svetimo pelės vietos navikų. Po dviejų savaičių gydymo, krantinė-paklitakselio gydymo lėmė didelė naviko tūrio slopinimo (p = 0,0023) (3b pav) ir naviko augimo slopinimo dažnis buvo 72,8 proc. Reiškia naviko svorį NAB-paklitakselio gydymo grupėje buvo žymiai mažesnis nei transporto priemonės grupės (0,093 ± 0,026 g vs 0,288 ± 0,02 g, p = 0,0054) (3b pav.) Nėra reikšmingų pokyčių pelių kūno masė buvo pastebėtas bet NAB-paklitakselio, oksaliplatina arba epirubicino terapijos grupes.

Nabi-paklitakselis sukelia mitozinę ląstelių žūtį in vivo

mechanizmų in vivo priešvėžinėmis iš krantinė-paklitakselis buvo toliau nagrinėjamas navikų audiniuose, gautų iš SNU16 ir NVI-N87 audiniuose,. Reikšmingas padidėjimas fosfo-stathmin išraiška buvo pastebėtas SNU16 (4A pav) ir NVI-N87 (4b pav) ksenografiniuose auglių su nab-paklitakseliu gydyti tiek immunohistological ir Vakarų dėmė analizuoja.

Naviko audinių iš Nabi-paklitakselio pelių demonstravo sumažėjo naviko ląstelių proliferaciją norma. KI67 išraiška pagrįsta naviką proliferacijos žymuo sumažėjo 90,7% (p = 0,001), palyginti su kontrolės NAB-paklitakselio gydytų pacientų grupėje, palyginti su 72,6% (p = 0,004) oksaliplatinos gydytų pacientų grupėje ir 67,7% (p = 0,003 ) į epirubicino gydytų pacientų grupėje (5a pav.) NAB-paklitakselis sukelia stipresnį slopinamojo poveikio naviko ląstelių proliferaciją nei oksaliplatina ir epirubicino.

nagrinėjimas apoptozę navikų audiniuose, atskleidė, kad apoptozės indeksas indukcija buvo 7,9 kartus per krantinė-paklitakselio grupės (p = 0,013 ), 5,7 kartus, kai gydyta oksaliplatinos gydytų gyvūnų (p = 0,024) ir 5,2 kartus per epirubicino gydytų pacientų grupėje (p = 0,042) nei bazinės linijos dažnį kontrolinėje grupėje (5b pav.)

Nabi-paklitakselio padidina gyvūnų išlikimą

Per pirmąjį išgyvenimo tyrimą, išgyvenamumo mediana SCID-NOD pelių buvo 24 dienų, o kontrolinėje grupėje. Tai padidino 86 dienų po krantinė-paklitakselio gydymo (p = 0,0004, palyginti su kontroline grupe, p = 0,0005 vs oksaliplatinos grupėje) ir 37,5 dienas po oksaliplatinos gydymo (p = 0,0004, palyginti su kontroline grupe). Grupė išlikimo ribos taip pat buvo pranašesnis po krantinė-paklitakselio gydymo (diapazonas: nuo 75 iki 95 dienų), palyginti su oksaliplatinos gydymo. (Ribos: nuo 34 iki 41 dienų) (6a pav)

Antroji išgyvenimo studijų, mediana išlikimo SCID-NOD pelių buvo 31 dienų, o kontrolinėje grupėje. Tai padidino iki 93 dienų po krantinė-paklitakselio gydymo (p = 0,0007, lyginant su kontrole ir oksaliplatinos grupės ir p = 0,0416 vs docetakselio grupėje), 81 dienų po docetakselio vartojimą (p = 0,0007 vs kontrolę) ir 40 dienomis oksaliplatina gydymas (p = 0,038, palyginti su kontrolinės grupės). Grupė išlikimo ribos buvo nuo 75 iki 96 dienų po krantinė-paklitakselio gydymo, palyginti su docetakselio vartojimą (diapazonas: 74 iki 93 dienų) ir oksaliplatinos gydymo (diapazonas: nuo 35 iki 45 dienų). (6b pav)

Diskusijos

Išplėstinė skrandžio vėžys yra pavojingas gyvybei ir yra didžiulis gydymo problema. Tradiciniai Dvigubas arba trigubas citotoksinis chemoterapijos schemomis ribotas poveikį ir gali sukelti šalutinį poveikį ir Atsparumas cheminėms [42] - [44]. Šis tyrimas aiškiai parodo, kad krantinė-paklitakseliu turi žymiai stipresnę priešvėžinius poveikį skrandžio vėžio ląstelių linijų, nei šiuo metu naudojami citotoksiniai vaistiniai preparatai oksaliplatina ir epirubicino in vitro ir in vivo, išmatuotas slopina proliferaciją poveikį, apoptozę mitozinis ląstelių mirtis, lokalizuota priešvėžiniai reagavimo ir išgyvenimo susijusios auglių naštos.

tyrimas in vitro parodė, kad Nabi-paklitakselis yra stipriai slopina ląstelių proliferaciją žmogaus skrandžio ląstelių linijų, nei oksaliplatina ir epirubicino. SNU16 ląstelės yra jautresnės Nabi-paklitakselio nei NVI-N87 ląsteles. Kai kurie tyrimai parodė, kad stathmin koreliavo su atsparumu taksano ir stathmin triuškinantis gali padidinti jautrumą taksano [33], [36]. Mes išbandė stathmin išraišką ir nerado skirtumo tarp šių trijų ląstelių linijų. Įdomu tai, kad, kai mes išnagrinėjo fosfo-stathmin išraišką mes nustatėme, kad iš nab-paklitakselio sugebėjimą inhibuoti in vitro ląstelių proliferacijos buvo toje pačioje eiliškumo kaip ir fosfo-stathmin išraiškos šių trijų skrandžio vėžio ląstelių: SNU16 > AGS > NVI-N87. Taigi pasirodė iš pradžių, kad PHOSPHO-stathmin išraiška koreliavo su krantinė-paklitakselio veiksmingumo, skolinimo tam tikrą paramą su hipoteze, kad PHOSPHO-stathmin gali tarnauti kaip potencialus biologinis žymuo prognozuoti krantinė-paklitakselio priešvėžiniai atsakymą skrandžio vėžio gydymo.

Mes atlikome NVI-N87 svetimo tyrimą, kuriuo siekiama įvertinti priešvėžiniai poveikį nab-paklitakseliu. O netikėtai, krantinė-paklitakselio žymiai slopinamas NVI-N87 svetimo naviko augimas, palyginti su kontroline grupe. Šie šiek tiek prieštaringi rezultatai, atrodo, rodo, kad in vivo priešnavikinis poveikis nab-paklitakseliu skrandžio vėžys gali būti nepriklausoma nuo pradinės išraiškos fosfo-stathmin ar visos stathmin. Kadangi tik tris ląstelių linijos buvo išbandytas, mes negalime padaryti aiškias išvadas apie ryšį tarp stathmin ar fosfo-stathmin ir Nabi-paklitakselio veiksmingumo santykio skrandžio vėžio. Tolesni tyrimai su stathmin išjudinti-out turėtų būti naudinga spręsti šį klausimą ir ištirti stathmin kaip biologinis žymuo už krantinė-paklitakselio veiksmingumo vaidmenį.

Šiame tyrime mes tada palyginti priešvėžinius poveikį nab paklitakseliu su oksaliplatina ir epirubicino nuo SNU16 ksenografiniuose vietos navikų. Nab-paklitakselio parodė didesnį priešvėžiniai efektyvumą nei oksaliplatina ir epirubicino kuris buvo suderintas su in vitro ląstelių proliferacijos rezultatų ir auglys audinių ląstelių proliferaciją ir apoptozę duomenis. Nors 5-fluouracil yra įsteigta vieno agentas narkotikų chemoterapinių skrandžio vėžio priežiūros, naviko atsakas iš 5-fluoruracilo Pranešama, kad nepakankamai prognozuojama SCID pelės modeliai iki taško, kur buvo pastebėtas net nėra priešvėžiniai poveikis [45]. Cisplatina ir oksaliplatina, galingesni induktoriai apoptozės ir taip pat dažnai naudojami skrandžio vėžio chemoterapijos gydymo, buvo pasirinkta dažniau kaip agentai palyginimui su naujais preparatais, turi būti išbandytas [22], [45]. Tirpikliniai paklitakseliu turi daugiau šalutinių poveikių ir nebuvo pridėti išgyvenimo naudą, palyginti su oksaliplatina klinikinėje gydymo skrandžio vėžio [22]. Mūsų tyrimų duomenimis, oksaliplatina nebuvo statistiškai skiriasi nuo epirubicino. Todėl mes renkamės oksaliplatinos kaip pradinis agentas gyvūnų išgyvenimo tyrimą ir nustatė, kad Nabi-paklitakselio padidėjo vidutinis pelės išgyvenimo maždaug 40 dienų per oksaliplatinos, yra daugiau nei dvigubai poveikį nei kad pasiekti oksaliplatinos. Docetakselis atrodo aktyvesnis taksanas, su greitesniu ląstelių įsisavinimą ir ilgesnį ląstelėje saugojimo palyginti su tirpiklio pagrindo paklitakseliu [46]. Mes atlikome dar vieną išgyvenimo tyrimą palyginti priešvėžinius poveikį nab-paklitakseliu su docetakseliu ir nustatė, kad vidutinis išgyvenamumo laikas buvo šiek tiek pratęstas po krantinė-paklitakselio gydymo (93 dienas vs 81 dienas, p = 0,0416). Mūsų rezultatai atitiko rezultatus neseniai II etapas krūties vėžio bandymus, kurie parodė, kad 100 mg /m ^{2 krantinė-paklitakselio turėjo ilgai bendro išgyvenamumo mediana (rizikos santykis 0,575, p = 0,008), palyginti su docetakseliu [47]. Remiantis mūsų rezultatus, krantinė-paklitakselio parodė didesnį priešvėžiniai veiksmingumą eksperimentinės skrandžio vėžio ir atrodo, kad atstovauti pagrįstai stiprus naują chemoterapinį agentą klinikinės skrandžio vėžio gydymo.}

Stathmin yra svarbus mikrotubulės mikrotubulės-destabilizuoti fosfoproteinu. Kai stathmin yra fosforilinamos, jo mikrotubulės-destabilizuoti veikla sumažėjo [32], [34], o tai gali pagerinti jautrumą taksano. Stathmin yra fosforilinamos daugiausia ant ciklino priklauso baltymų kinazės (CDKs) privalomas svetainę Ser38 į mitozės [32], todėl mes sutelktas mūsų išraiška analizuota ser38 likučių. Mes nustatėme, kad krantinė-paklitakselio gydymo padidėjęs fosfo-stathmin išraiška in vitro ir in vivo ir koreliavo su mitozės suėmimus, branduolinio skilimo, karyopyknosis ir mitoziniam ląstelių žūtį. Mitozinis ląstelių mirtis įvyko šių ląstelių su aukštos raiškos fosfo-stathmin. Zhou ir kt. [33] nustatė, kad žemyn reguliuojama stathmin išraišką po STMN1 genas nokdaunas kepenų karcinomos ląstelės pridėta 7,7 karto jautrumą Nabi-paklitakselio ir 2,7 kartus jautrumą su tirpikliais, paklitakselio, bet ne jautrumą doksorubicinu. Molekulinė prigimtis, kad sukelia ląstelių žūtį per ilgai mitoziniam arešto menkai apibrėžta [17], [32]. Frezavimo surinkimo kontrolės punktai jau seniai manoma, vaidina svarbų vaidmenį šiame procese [48] metu. Šiame tyrime Nabi-paklitakselio sukeltas fosforilinimo stathmin skrandžio vėžio ląstelių, kurios, kaip tikimasi stabilizuoti mikrotubulės aparatą, kuris savo ruožtu gali sukelti mitozinę areštų ir sukelti ląstelių žūtį. Nors tai yra anksti ir Preliminariais duomenimis, kai parama PHOSPHO-stathmin reguliavimo krantinė-paklitakselio priešnavikinis aktyvumas buvo pastebėta ir nusipelno būti toliau vertinami.

Taigi, dabartinis tyrimas rodo, kad vieno agentas Nabi-paklitakselio turėjo stipresnį priešvėžiniai aktyvumą eksperimentinės skrandžio vėžio nei dabartinio standartinio chemoterapiniais preparatais oksaliplatina ir epirubicino ir pasirodė pranašesnis taksanas palyginti su docetakselio. Tai stiprus priešnavikinis aktyvumas palaiko klinikinės vertinimo nab-paklitakseliu, kaip perspektyvus mikrotubulės slopinantis agentas skrandžio vėžio loginį.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
Nabi-paklitakselis sukelia G2-M fazės arešto skrandžio vėžio ląsteles. (A) histogramos rodo ląstelių ciklo profilius AGS ir NVI-N87 ląstelių skirtingu laiku po krantinė-paklitakselio gydymo. Skrandžio vėžio ląstelės buvo auginamos 24 valandas ir po to yra veikiamas 100 nM nab-paklitakselio 12 valandų arba 24 valandų. Ląstelės ciklo analizė buvo atlikta pagal tėkmės citometrijos metodą. Rodomi rezultatai yra atstovas iš dviejų nepriklausomų eksperimentų. (B), ląstelės ciklo paskirstymas skrandžio vėžio ląsteles, gydytiems 100 Nm nab-paklitakseliu. . Akcija * ženklai sąlygos, kuriomis ląstelės buvo suiro
Doi: 10,1371 /journal.pone.0058037.s001
(TIF)
S2 pav.
ląstelinį ciklą skrandžio vėžio ląstelių, apdorotų oksaliplatinos, epirubicino ir docetakselio. (A) histogramos rodo ląstelių ciklo profilius SNU16 ir AGS ląstelių po oksaliplatinos, epirubicino ir docetakseliu gydyti. Skrandžio vėžio ląstelės buvo auginamos 24 valandas ir po to yra veikiamas 10 mikromolių nab-paklitakselio, oksaliplatinos, epirubicino ir docetakselio 8 valandas. Ląstelės ciklo atliko tėkmės citometrijos metodą. Rodomi rezultatai yra atstovas iš dviejų nepriklausomų eksperimentų.

• PLoS ONE: Restauravimas miR-1228 * išraiška Stabdo epitelio-mezenchiminių perėjimas skrandžio vėžio
• PLoS ONE: MDM2 SNP309 rs2279744 polimorfizmas ir skrandžio vėžio rizika: metaanalizė