Eis virdrun Fuerschung Resultater weisen, dass souwuel Ras homolog Familljemember C (RhoC) an IQ-Domain GTPase-activating FAQ 1 ( IQGAP1) waren an gastric Kriibs Stoffer an Zellen iwwer-ausgedréckt, mä hir Roll an tumorigenensis ass haut net gëtt. Ëmzestoussen gemellt mir d'Prolifératioun op gastric Kriibs Zellen an der Interaktioun tëscht zwee Proteinen am Regulatioun d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen Effet vun RhoC an IQGAP1 stimuléiert. Plasmids an Haren gesond Zeechesaatz Zil- siRNA an DNA sech benotzt den Ausdrock vun RhoC an IQGAP1 ze vergréisseren. MTT Method an BrdU Aktivitéiten assay sech fir analyséiert den Effet vun RhoC a verschiddene Strukture vun IQGAP1 op Prolifératioun benotzt. Protein Niveau vun IQGAP1 an RhoC zu Zell Strecken vun Western blotting fonnt. Immunofluorescence a Co-Immunoprecipitation assays sech applizéiert der Lokalisatioun an obligatoresch tëscht RhoC an IQGAP1 ze ermëttelen. D'Resultater weisen, datt RhoC, IQGAP1 an der C-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1 bedeitend d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen stimuléiert, a verstäerkt den Ausdrock vun cyclin E an cyclin D1. Par contre, Reduktioun vun endogenous IQGAP1 oder RhoC vun siRNA attenuated Zell Prolifératioun. D'Ausschöpfung vun IQGAP1 Ausdrock vun siRNA blockéiert bedeitend der proliferative Aktivitéit vun constitutively aktiv RhoC, iwwerdeems RhoC vun siRNA silencing keng Wierkung haten op IQGAP1-entschlof Verbreedung zu gastric Kriibs Zellen. Co-immunoprecipitation an Immunofluorescence assays zougedréckt datt RhoC an IQGAP1 all aner gebonnen. Zu der Konklusioun, eis Resultater hindeit, datt RhoC d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen duerch zousätzlech IQGAP1 als effector koum VerfÜgung
Fro:. Wu Y, Tao Y, Chen Y, Xu W (2012) RhoC d'Zouhuelen vun Gastric reguléieren Cancer BTS duerch Zesummespill mat IQGAP1. PLoS NËMMEN 7 (11): e48917. Doi: 10.1371 /journal.pone.0048917 VerfÜgung
Redakter: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, Éisträich VerfÜgung
Arnaque: 26 Juni, 2012; Akzeptéiert: 2 Oktober 2012; Publizéiert: November 7, 2012 VerfÜgung
Copyright: © 2012 Wu et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Etude war vun der spezialiséiert Research Fund fir Senior Personal plangen vun Jiangsu University (Nee. 11JDG114) ënnerstëtzt an der National Natural Science Foundation of China (Nee. 31040002). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Rho GTPases kann bestëmmte intracellular Signal transduction induce a verschidde bewosst Aktivitéiten Impakt, dorënner eng Zwangsëmgestaltung vun der actin cytoskeleton, Gentherapie Transkriptiouns, Survival, an Prolifératioun [1], [2]. Obwuel dräi Rho isoforms, RhoA, RhoB, an RhoC, weise méi wéi 85% Aminosaier Identitéit, eegens se Differenzen an Funktioun vun Zellen [3]. RhoA an RhoC Proteinen goufen eng positiv Roll an Prolifératioun an malignant opgegraff ze hunn dës [4], [5], [6] hierkommen d'Roll vun RhoB an dës Prozesser ebenfalls méi Duden ze ginn [7], [8]. Déi meescht vun de Studien weisen dass RhoC verschidde Funktiounen am entholl Metastasen hat, d'Aktioun vun Multiple afgerappt effectors orchestrating, ofgeschnidden a Rekonstruktioun vun der extracellular Matrixentgasung (ECM). Mä et bleift e kontroverse iwwer d'Roll vun RhoC zu Regulatioun Zell Prolifératioun [9], [10], [11], [12]. D'Resultater vum Koup Labo uginn dass RhoA an RhoC siRNA vertrieden mächteg Handwierksgeschir fir inhibiting Kriibs Zell Prolifératioun, invasiveness, an angiogenesis souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung [9]. Sun et al VerfÜgung fonnt dass intratumoral Sprëtz vun RhoA oder RhoC siRNA zu Sauna Mais kann entholl Wuesstem [13] inhibit. Am Géigesaz, Faried et al VerfÜgung gemellt dass RhoA wéi RhoC méi Wuesstem entholl ënnerstëtzt hierkommen RhoC am Verglach zu RhoA wäit Metastasen induces [11], am Accord mat deenen Observatioune vun Clark a Kollegen [14]. Eng Etude vun Ikoma a Kollegen gewisen, datt RhoC net entholl Wuesstem Afloss huet awer verbessert der metastatic Natur vun haett Kriibs duerch Zell motility Spannend [10]. Dofir, ass weider studéieren waren d'Roll vun RhoC zu Regulatioun biologescher Aktivitéite vun entholl Zellen ze identifizéieren. VerfÜgung IQ-Domain GTPase-activating Proteinen (IQGAPs) si wichteg Reglementatioun vun der bewosst Prozesser datt cytoskeletal rearrangements zu Zell Migratioun gehéiert , Prolifératioun an cytokinesis [15], [16], [17]. IQGAP1 ass eent vun den Memberen vun den dräi Zesummenhang mammalian IQGAPs an den Operateur zu intracellular IQGAP1 Ausdrock oder Funktioun huet gemellt Zell Aktivitéiten ze vergréisseren [17], [18], [19], [20]. Als scaffold FAQ, Photo'en IQGAP1 Multiple Proteinen, wéi oncogenes β-catenin an Src, entholl suppressor E-cadherin an der Rho GTPases Cdc42 an Rac1, a bewierkt de Verfall vun bewosst Verhaalen, besonnesch fir Kriibs Zellen. Eis virdrun Etude gewisen, datt d'héich Ausstralung vun RhoC an IQGAP1 an Otemschwieregkeeten gastric Kriibs vill reversely mat der dat vun der gastric Kriibs Zellen [21] soll sech. Desweideren, goufen d'FAQ Niveauen och relevant fir d'Verbreedung an Wanderung vun de Kriibs Zellen. Dofir, hypothesize mir dass souwuel RhoC an IQGAP1 wichteg Roll an Kriibs Zell spille kann Transformatioun an Prolifératioun an et ass eng potentiell association tëschent hinnen. An der haiteger Fuerschung, studéiert mir den Afloss vun RhoC a verschiddene Strukture vun IQGAP1 op Kriibs Zell Prolifératioun an Zell Zyklus Zesummenhang Proteinen. Mir propagéieren och d'Bezéiung tëscht den zwou Molekülle vum gemeinsame Programm vun siRNA Amëschen an Haren Wonn Technik. VerfÜgung Reagents VerfÜgung D'gastric Kriibs Zell Linnen BGC-823 [22] an afrikanesch gréng Af Nier fibroblast Zell Linnen Cos-7 goufen duerch den Institut vun Zell Biologie (Shanghai, China) gëtt. D'Green D'Protein (GFP) plasmid an Zell transfection reagent Lipofectamin ™ 2000 goufen aus Invitrogen (Karlsbad CA); D'plasmids Zeechesaatz Fändel afp IQGAP1 (pFlag-IQGAP1), Fändel afp IQGAP1 C-Uschloss ofgesprengt (pFlag-IQGAP1-C), an Fändel afp IQGAP1 N-Uschloss ofgesprengt (pFlag-IQGAP1-N), an adenoviral vectors Zeechesaatz β-galactosidase (Heft-LacZ), engem constitutively aktiv Form vun RhoC (Heft-RhoC-V14), voll Längt IQGAP1 (Heft-IQGAP1), an der C-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1 (Heft-IQGAP1-C) waren Aart Spende vum Dr. Gerry Boss a Dr. Renate Pilz am University of California, San Diego, USA. Mënsch-EGF, BrdU, Mouse anti-BrdU antibody, DNase ech, MTT, Hoechst 33342, FITC- an Cy3-conjugated Secondaire antibodies sech aus Fläch (St. Louis, MO). D'Anti-IQGAP1 antibody (géint N-Uschloss ofgesprengt, 314-422 AA), anti-RhoA antibody, anti-IgG antibody, anti-CDK1 /CDK2 antibody, kuerz-interfering RNAs (siRNA) fir RhoC an negativ Kontroll goufen aus Santa Cruz Déi (Santa Cruz, CA). De Rho C siRNA ass en pool vun 3 Zil--spezifesch 20-25 NG siRNAs der Gentherapie Ausdrock mat de Message ze hummeren verwandelt entworf wéi follegt zesummen: sequence1, Sënn 5'-CUACUGUCUUUGAGAACUAtt-3'and antisense 5'-UAGUUCUCAA- AGACAGUAGtt-3 "; sequence2, Sënn 5'-GCAGGAAGACUAUGAUCGAtt-3 'an antisense 5'-UCGAUCAUAGUCUUCCUGCtt-3 "; sequence3, Sënn 5'-CAC- ACCAGCACUUUAUACAtt-3 'an antisense 5'-UGUAUAAAGUGCUGGUGUG- tt-3 ". D'Anti-IQGAP1 antibody (géint C-Uschloss ofgesprengt Saieren 863-1657 vum Mënsch IQGAP1 zu Aminosaier entspriechend) war vun Millipore (Billerica, MA). D'Anti-RhoC antibody war vun Abcam (Cambridge, MA). D'Anti-cyclin B antibody war vun Bioworld Technology (St. Louis Park, Punktzuel). D'Anti-cyclin D1 antibody an Anti-cyclin E antibody sech aus Boster (Wuhan, China). D'siRNA fir IQGAP1 Wierderbuch war vun QIAGEN (Valencia, CA), war d'Zil Haaptrei IQGAP1 5'-AAGTTCTACGGGAAGTAATTG-3 "(5058-5078 BP). Horseradish peroxidase (HRP) -conjugated Secondaire antibody war vun Rockland Immunochemicals (Gilbertsville, PA). Protein G Plus /Protein A-Agarose war vun Calbiochem (San Diego, CA). Electrochemiluminescence (ECL) reagents sech aus Millipore (Billerica, MA). All reagents an dëser Etude benotzt goufen vun analytesch Schouljoer. VerfÜgung Zell Kultur, Transfection an Wonn VerfÜgung BGC-823 an Cos-7 Zellen sech cultured zu 1 × Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel- (DMEM) ergänzt mat 10% an et Bovine serum (FBS) bei 37 ° C an 5% CO 2 Atmosphär. Mëttelfristeg huet all zweeten Dag geännert an d'Zellen sech sub-cultured um Niewebaach. Fir transfection, goufen d'Zellen sub-cultured den Dag ier de Prozess an der transfection vun gastric Kriibs Zellen mat plasmids oder siRNA war no den Hiersteller d'Uweisunge gesuergt. Fir Wonn, goufen 293A Zellen mat adenoviral vectors transfected Heft-LacZ, Heft-RhoC-V14, Heft-IQGAP1 an Heft-IQGAP1-C, an d'Haren vun den Zellen sech produzéiert Deelercher gesammelt an Kick. Déi Viren waren Ad-LacZ, Ad-RhoC-14, Ad-IQGAP1 an Ad-IQGAP1-C bzw. genannt a sech benotzt BGC-823 Zellen ze globalen. Op den Dag virun der Wonn, BGC-823 Zellen sech frësch bei 70-80% Niewebaach rakommen an d'Wonn Prozess war no der Uweisunge d'Hiersteller op zweeten Dag gesuergt. VerfÜgung Western Blotting VerfÜgung Cultured Zellen sech dräi Mol am PBS an lysed mat Ripa Prellbock (50 mm Tris-HCl, pH 7.4, 1% (v /v) Triton X-100, 1 mm héich, 1 mm leupeptin, 1 mm phenylmethylsulfonyl fluoride, 10 mm NaF Katakombe , 1 mm Na 3VO 4). Gläich Montanten vun FAQ sech vun 8% oder 12% SDS-PAGE laut d'FAQ molekulare Gewiicht getrennt. Der Primärschoul antibodies sech bei 4 ° C iwwer Nuecht incubated, an déi entspriechend Secondaire antibodies sech fir 1 h op RT incubated. Dräi Mëtten huet mat TBS /T no all antibody incubation gesuergt. ECL reagents benotzt goufen op der Membran déi positiv Bands ze weisen. VerfÜgung MTT Assay VerfÜgung 0.5-1 × 10 BrdU Aktivitéiten Assay VerfÜgung D'DNA Synthes Taux mat BrdU Aktivitéiten vun Immunofluorescence gemooss gouf. D'Auslousung Montant vun Zellen war ugepasst eng Dicht vun 70-80% Niewebaach op den Dag vun transfection ze se. D'plasmid pFlag-IQGAP1, pFlag-IQGAP1-C oder pFlag-IQGAP1-N war mat GFP plasmid an BGC-823 Zellen Co-transfected 2000 benotzt Lipofectamin ™ wéi uewe beschriwwen. 24 h der transfection, goufen d'Zellen serum-gehongert Iwwernuechtung, behandelt mat 200 μ VerfÜgung M BrdU a fir ronn 16 h incubated. D'Zellen sech dann mat PBS gewäsch, fixen an frësch preparéiert 4% (v /v) paraformaldehyde um RT fir 10 min, an permeabilized mat 0,5% (v /v) Triton X-100, gefollegt vun incubation mat DNase ech (0,5 U /μl) bei 37 ° C 30 Minutten fir. D'Zellen sech Nuecht op 4 ° C gefollegt vun Cy3-conjugated Secondaire antibody fir 1 h op RT mat Primärschoul antibody géint BrdU incubated. Endlech, Käre waren Konter Kierchefënster mat Hoechst 33342 fir 15 Minutten, rinsed mat PBS fir dräi Mol an ënner unisse microscopy visualized. All assay war zu schéissen an widderholl dräimol gesuergt. VerfÜgung Co-immunoprecipitation VerfÜgung Fir d'Interaktioun tëscht RhoC an IQGAP1, Cos-7 an BGC-823 Zellen sech ermëttelen Co-Krankheet mat Ad- IQGAP1 oder Ad-IQGAP1-C, an Ad-RhoC-V14 fir 48 h an dann sech mat Ripa gefiermt lysed ëmschriwwen. D'antibody géint RhoC, IQGAP1 oder isotype reagéiert IgG war fir immunoprecipitation benotzt, bzw.. Immunoprecipitates sech den uewe vun Western blotting analyséiert, mat anti-RhoC oder anti-IQGAP1 antibody. VerfÜgung Immunofluorescence Microscopy VerfÜgung D'cultured Zellen op Cover Ausrutscher mat frësch preparéiert 4% fix waren (v /v paraformaldehyde) zu PBS fir 15 min, mat 0.3% Triton X-100 vun PBS fir 10 min, an ass blockéiert mat 3% (w /v) Bovine serum albumin (BSA) zu PBS permeabilized. Fir Immunofluorescence, d'Zellen op Cover Ausrutscher sech Rei mat Kanéngchen polyclonal antibody géint IQGAP1 bei 4 ° C incubated Iwwernuechtung, FITC-conjugated Geess anti-Kanéngchen IgG fir 1 h op RT, Maus monoclonal antibody géint RhoC fir 2 h op RT, an endlech Geess anti-Maus IgG fir 1 h op RT mat Cy3 conjugated. Dräi Mëtten sech no all antibody incubation gesuergt. D'Käre waren Konter Kierchefënster mat Hoechst 33342. D'Resultat ënnert engem fluorescence microscope mat enger CCD Kamera (Leica) zesummekomm observéiert gouf. VerfÜgung statistique Analys VerfÜgung D'Date goufen eng zwee-tailed analyséiert benotzt ANOVA oder Student d' t VerfÜgung Azeton mat SPSS statistesch Software, an ausdrécke wéi heescht ± normale deviation (Fils). P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 war bedeitendst als VerfÜgung RhoC d'Zouhuelen vun BGC-823 BTS Opstig VerfÜgung Den Effet vun RhoC op Zell Prolifératioun war och ze propagéieren. BGC-823 Zellen sech mat adenovirus Zeechesaatz Krankheet constitutively aktiv RhoC an Zell Prolifératioun war vun MTT assay fonnt. D'Resultater weisen, datt RhoC och d'Verbreedung vun gastric Kriibs Zellen BGC-823 gefördert. Iwwer-Ausdrock vun RhoC-V14 an BGC-823 Zellen ëmmer 48,7% Erhéijung vun Zell Prolifératioun (Figebam. 1A an B). Mëttlerweil, Ausschöpfung vun RhoC vun siRNA d'Prolifératioun vu BGC-823 Zell vun 43,1% (Figebam. 1c an D) reduzéiert. VerfÜgung Geographie IQGAP1 d'Zouhuelen vun BGC-823 BTS VerfÜgung fir de Beitrag vun IQGAP1 zu Prolifératioun, MTT assay benotzt gouf bewäerten d'Nuetsvolen vun gastric Kriibs Zell Linn BGC-823 ze entdecken. D'Resultater weisen, dass am Verglach mat Kontroll Zellen (Ad-LacZ Grupp), héich Ausdrock vun der C-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1 (Ad-IQGAP1-C Grupp) oder voll Längt IQGAP1 (Ad-IQGAP1 Grupp) verstäerkte Zell Prolifératioun vun 116% an 39%, respektiv ( * VerfÜgung P &Si besteet; 0,05, * VerfÜgung P &Si besteet;. 0,05, Lalumi 2A an B). Am Géigesaz, huet den N-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1 keng kloer Effekt op der Zell Prolifératioun. Wéinst dem Agrëff vun IQGAP1 Ausdrock mat siRNA reduzéiert Zell Prolifératioun vun 43%, am Verglach mat negativen Kontroll ( * VerfÜgung P &Si besteet;. 0,05, Lalumi 2C an D). Dës Resultater uginn dass IQGAP1 konnt Zell Prolifératioun ze Boost; déi aktiv Domän war an der C-Uschloss Brochstéck vun der FAQ wellkomm. VerfÜgung D'BrdU Aktivitéiten assay engem Muster vun Äntwert gläicht, datt observéiert Kriseperiod zu MTT assay. Ausdrock vun Fändel-IQGAP1 an Fändel-IQGAP1-C Ofstand DNA Synthes fir de Niveau gefördert bal 1-flod an 2-fantastesch wéi déi observéiert mat Fändel-D1 (* P &Si besteet; 0,05, * P &Si besteet;. 0,05, Lalumi 2E an F) , iwwerdeems IQGAP1-N keng Auswierkungen op d'DNA Synthes gewisen huet, suggeréiert datt IQGAP1 anescht DNA Synthes via verschidden Domainen reguléieren. VerfÜgung Association tëscht RhoC an IQGAP1 zu Stimulatioun Zouhuelen vun BGC-823 BTS VerfÜgung déi staark uewen Resultater hindeit, datt souwuel RhoC an IQGAP1 zu der Verbreedung vun BGC-823 Zellen bäigedroen. Fir d'méiglech association tëscht RhoC an IQGAP1 zu Regulatioun Zell Prolifératioun ze entschlësselen, ze propagéieren mir gesi wa IQGAP1 an RhoC hiren Ausdrock géigesäiteg beaflossen. BGC-823 Zellen sech mat siRNA transfected den Ausdrock vun RhoC oder IQGAP1 zu knockdown, a sech da mat adenovirus Zeechesaatz IQGAP1, IQGAP1-C oder constitutively aktiv RhoC Personal, ofginn. Western blotting applizéiert ze erkennen, ob de Ausdrock an Aktivitéit vun ee FAQ Änneren d'Expressioun vun der aner FAQ Afloss hätt oder net. D'Resultater weisen, datt waarden exogenous oder knockdown vun endogenous IQGAP1 oder IQGAP1-C, net de RhoC Ausdrock Afloss huet. Ähnlech, net den Ausdrock vun IQGAP1 oder IQGAP1-C Afloss huet constitutively aktiv RhoC oder Amëschen vun endogenous RhoC waarden (Figebam. 3A). VerfÜgung MTT assay war benotzt an Spannend Prolifératioun der Relatioun tëscht RhoC an IQGAP1 ze entschlësselen. D'Resultater weisen, datt RhoC-siRNA haten net ze iwwersinn Effekt op Prolifératioun vun IQGAP1 (** P &Si besteet; 0,01, Lalumi 3B.) Verursaacht. Allerdéngs, Ausschöpfung vun IQGAP1 Ausdrock vun siRNA blockéiert d'vum Ausdrock vun constitutively aktiv RhoC ëmmer Prolifératioun (* P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0,01, Lalumi 3C.). Dëst uginn, datt während dem Prozess Prolifératioun vu BGC-823 Zellen vun Spannend, RhoC d'Participatioun vun IQGAP1 néideg. Ausserdeem, well RhoC d'Wierkung néideg IQGAP1 iwwerdeems IQGAP1 d'Wierkung net gemaach RhoC verlaangen, RhoC kéint d'Offloss vun IQGAP1 ginn an huet IQGAP1 als effector. VerfÜgung Effekt vun RhoC an IQGAP1 op der Expression vun Zell Cycle Contenu Proteinen weider fir d'Prolifératioun Spannend Effet vun RhoC an IQGAP1 an z'ënnersichen déi méiglech Mechanismus duerch deen konfirméiert dësen Proteinen der Verbreedung vun den Zellen regléieren, mir applizéiert Western blotting den Ausdrock vun Zell Zyklus Zesummenhang Proteinen vun Zellen mat Methode vun behandelt ze entdecken waarden oder RhoC an IQGAP1 ofgeholl. D'Resultater weisen, dass d'Erhéijung vun RhoC an IQGAP1 den Ausdrock vun cyclin E an cyclin D1 stimuléiert, wann et keen Effet vum Ausdrock vun cyclin B an CDK1 /2 haten. Wéinst dem inhibited de Verloscht vun RhoC an IQGAP1 den Ausdrock vun cyclin E an cyclin D1. Mëttlerweil, am Fall vun RhoC silencing vun siRNA, waarden IQGAP1 oder IQGAP1-C nach den Ausdrock vun cyclin E an cyclin D1 (Figebam. 4) verbesseren. Theses Resultater uginn dass RhoC an IQGAP1 kéint d'Prolifératioun duerch Änneren dem Wëllen vun Zell Zyklus Zesummenhang FAQ regléieren an dauernd méi Zellen S Phas ze trieden. VerfÜgung RhoC an IQGAP1 Co-en der an Bound All Aner zu BTS VerfÜgung Immunofluorescence a Co-immunoprecipitation Method huet de méiglech bindend tëscht RhoC an IQGAP1 fir weider ënnersicht applizéiert. Béid BGC-823 an Cos-7 Zellen sech Co-Krankheet mat Ad-IQGAP1 an Ad-RhoC-V14 oder Ad-IQGAP1-C an Ad-RhoC-V14 fir 48 h, an de ganzen Zell lysate war immunoprecipitated mat anti-RhoC antibody a mat antibody géint IQGAP1 Komedie, oder immunoprecipitated mat anti-IQGAP1 antibody a Komedie mat antibody géint RhoC, bzw.. D'Resultater zougedréckt RhoC an IQGAP1 all aner gebonnen, mat C-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1 als bindend Site mat RhoC (Figebam. 5A an C). Desweideren, Teamchef Immunofluorescence assay datt IQGAP1 war haaptsächlech am Zytoplasma verdeelt, wou et Co-en der mat RhoC (Figebam. 5B an D). VerfÜgung ongebremste Kriibs Zell Prolifératioun verlaangt de koordinéiert a rigoréis reegelen Funktioun vun vill Proteinen [23], [24], [25], [26]. Et ass, also, entscheedende de Mechanismus vun studéiere wéi déi Proteinen zesummekomm an der Kriibsfuerschung Zell Prolifératioun Regulatioun. Eis virdrun Resultater hun dokumentéiert, datt de Begrëff vun IQGAP1 an RhoC zu gastric Kriibs Stoffer fräi waren an Kriibs Zell Linnen [21]. Den Niveau vun hiren Ausdrock hat e wesentleche Korrelatioun mam aarm dat vun gastric Kriibs. Allerdéngs ass et net ganz kloer, ob IQGAP1 an RhoC sinn verbonne mat Zell Verbreedung zu tumorigenensis. An dëser Etude, huet den Ausdrock Niveau vun IQGAP1 an RhoC an hirem biologesche Aktivitéiten am gastric Kriibs Zell Linn BGC-823 duerch Krankheet ugepasst mat adenoviral gesond oder transfection mat plasmid DNA oder siRNA. D'Verbreedung vun der Zell ass dann mat BrdU Aktivitéiten assay an MTT Method ze propagéieren. D'Resultater weisen, datt constitutively aktiv RhoC bedeitend d'Prolifératioun Aktivitéit vun gastric Kriibs Zell Linn BGC-823 gefördert, an Ausschöpfung vun RhoC vun siRNA d'Spure inhibited. Fuerschung Donnéeën hunn gewisen, datt RhoC eng wichteg Roll an der Zell Wanderung an Metastasen haten [27], [28], [29], [30], [31], mä et waren e puer contradictions iwwer ob RhoC de Prozess vun Transformatioun regléieren an Prolifératioun zu entholl Zellen [27], [29], [32]. Eis Resultater Beweiser déi dat RhoC Prolifératioun Spannend Effekt op gastric Kriibs Zellen hutt. Dëst wäert zu elucidating d'Roll vun RhoC hëllefräich sinn zu Prolifératioun vu Kriibs Zellen Regulatioun. VerfÜgung Eis Resultater weisen, datt ähnlech ze RhoC, iwwer-Ausdrock vun exogenous IQGAP1 an IQGAP1-C och gefördert Prolifératioun vu BGC-823 Zellen, Obschonn vun endogenous IQGAP1 knockdown attenuated d'Prolifératioun Fähegkeet vun der Zell, wat beweist, datt IQGAP1 dréit och zu Zell Prolifératioun Regulatioun. Que dass souwuel RhoC an IQGAP1 hunn Roll Prolifératioun vu Kriibs Zellen an hir Ausstralung an Regulatioun héich soll goufen, lant mir weider de funktionell association tëscht RhoC an IQGAP1. D'Resultater weisen, datt an BGC-823 Zellen mat Fuesstëmmung-Ugrëff vun IQGAP1 Ausdrock, Wonn mat adenovirus Zeechesaatz constitutively aktiv RhoC kéint d'Prolifératioun Aktivitéit méi net stimuléieren; déi entspriechend DNA Zeechesaatz ëmmer nach héich Prolifératioun Aktivitéit iwwerdeems zu BGC-823 Zellen hummeren-verwandelt mat vun RhoC Ausdrock, iwwer-Ausdrock IQGAP1 oder IQGAP1-C duerch d'Zellen mat adenovirus Droberoderin. Dëst uginn dass RhoC gefuer entholl Prolifératioun duerch IQGAP1, speziell duerch d'C-Uschloss Brochstéck vun IQGAP1. Dëst funktionell association tëscht RhoC an IQGAP1 gouf weider vun Co-immunoprecipitation an Immunofluorescence ënnerstëtzt. Dës Resultater ugeholl datt RhoC huet IQGAP1 als effector zu Regulatioun Kriibs Zell Prolifératioun, geheit nei Uspillung op d'Relatioun vun dësen Proteinen. VerfÜgung Fir allem d'afgerappt Mechanismus Entdeckung duerch déi RhoC /IQGAP1 d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen regléieren , mir den Effet vun RhoC /IQGAP1 op den Ausdrock vun Zell Zyklus Zesummenhang Proteinen ze propagéieren, dorënner cyclin E, cyclin D1, cyclin B an cyclin ofhängeg kinase (CDK). D'Resultater weisen, dass souwuel RhoC an IQGAP1 den Ausdrock vun cyclin E an cyclin D1 stimuléiert, mä hat keen Effet op d'Expressioun vun cyclin B an CDK. D'Verbreedung vun eukaryotic Zellen ass bei spezifesch Punkten an der Zell Takt, besonnesch am éischte Gruef Phase (G1) zu der DNA-syntheteschen Phase (S) an der zweeter Schéier Phase (G2) zu mitosis (M) ëmgebaut kontrolléiert haten. Vun deenen, ass de G1-S ëmgebaut déi grouss Regulatioun Punkt vun der Zell Zyklus. Cyclin D1 an cyclin E Kontroll der Zell Werdegang duerch G1 bis S Phase vun Zell Zyklus Spur. Eis Resultater ugeholl, datt wann RhoC vun extracellular oder intracellular Signal ausgeléist gouf, ass et zu IQGAP1 gebonnen an dann beaflosst den Ausdrock vun Zell Zyklus-Zesummenhang Proteinen direkt oder indirekt puer onkloer Signal transduction Schrëtt, déi schliisslech zu der Ännerung vun Zell Werdegang Féierung kéint an Prolifératioun (Figebam. 6). VerfÜgung an Konklusioun, dës Daten aus aktuell Etude, a Verbindung mat virdrun Donnéeën publizéiert [21], Ënnerstëtzung der Hypothes, datt RhoC bedeelegt zu souwuel Wanderung an Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen. IQGAP1 matmaachen och d'Regulatioun vun Kriibs Zell Prolifératioun als afgerappt effector vun RhoC. Dës Donnéeë kann iwwerzeegen Luuchten op der Entwécklung vun therapeutesch Approche fir gastric Kriibs. VerfÜgung Mir Merci Dr Gerry Boss a Dr Renate Pilz am University of California, San Diego, CA, USA, fir der Aart Spende vun adenoviral gesond. VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
(1) Resultater vun MTT assay. VerfÜgung
(2) Bilan vun BrdU Aktivitéiten assay. VerfÜgung
(1) RhoC an IQGAP1 den Ausdrock net géigesäiteg beaflossen. VerfÜgung
(2) IQGAP1 war eng effector vun RhoC zu Prolifératioun vun den Zellen stimuléiert. VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Arbeschterlidder VerfÜgung
Fuerschung kuckt op Aerobiome,
Darmmikrobiota kéint d'Gravitéit vum COVID-19 viraussoen
Mamm-a-Puppelchen SARS-CoV-2 Iwwerdroung an der Schwangerschaft méiglech awer selten,
E. coli superbug verbreet duerch schlecht Toilettehygiene,
Darmmikrobiom ass och eng Realitéit am Fetal Liewen
Wëssenschaftler maachen Typ A Blutt an en universalen Typ O,
Säure pH verbessert d'SARS-CoV-2 Infektioun duerch Up-Reguléierung vum ACE2 Rezeptor
Déi lafend Coronavirus Krankheet 2019 (COVID-19) Pandemie déi duerch en neie Coronavirus verursaacht gëtt, nämlech, schwéier akut Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2), huet weltwäit méi wéi 4,6 M
D'Halschent vun den Drogen, déi am Gebrauch sinn, beschiedegen Darmbakterien,
seet nei Studie Eng erstaunlech Presentatioun op der UEG Woch 2019, zu Barcelona, weist datt den Darmmikrobiom e grousse Risiko fir Schued ass all Kéier wann mir e Medikament aus enger oder méi vun 18
Xylitol a Grapefruit Som Extrakt weist Versprieche fir d'SARS-CoV-2 Infektioun ze vermeiden,
Etude fënnt DCoronavirus Krankheet (COVID-19), verursaacht vum schwéieren akuten Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2), huet weltwäit Schued gemaach. Et huet sech verbreet zënter sengem éischten O