Proteinske kinaze igraju važnu ulogu u razvoju tumora i napredovanje. Mnogo inhibitora kinaze su ušli na tržište i pokazuju obećavajuće kliničke koristi. Ovdje donosimo otkriće novog male molekule, dobro podnošljivog oralno inhibitor aktivni kinaze, R1498, majorly ciljanje i angiogenskih i mitotičke putova za liječenje hepatocelularnog karcinoma (HCC) i karcinom želuca (GC). Niz biokemijskim i staničnim testovima pokazuju da je meta kinaze klaster R1498 uključene Aurora kinaze i VEGFR2 et al. R1498 je pokazao umjerenu in vitro Izvor:. Zhang C, wu X, Zhang M, Zhu L, Zhao R, Xu D, et al. (2013) s malim molekulama R1498 kao dobro podnosi i oralno aktivan kinaze za hepatocelularni karcinom i raka želuca liječenje preko ciljanje angiogeneze i mitozu putevi. PLoS ONE 8 (6): e65264. doi: 10,1371 /journal.pone.0065264 pregled Urednik: Claude Prigent, Institut de Génétique et Développement de Rennes, Francuska pregled Primljeno: 22. veljače 2013. godine; Prihvaćeno: 23. travnja 2013; Objavljeno: 5. lipnja 2013 pregled Copyright: © 2013 Zhang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan financiranja. The financijere nije imao ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled suprotstavljenih interesa: Svi autori su zaposlenici ili ranijih zaposlenika Roche R &D centar (Kina), osim Taiping Chen. koji je zaposlenik CRO tvrtka pod nazivom kruna Bioscience Inc. Pekingu, Kina. To ništa ne mijenja pridržavanje autorovih svim PLoS ONE politika na razmjenu podataka i materijala. Pregled Uvod pregled Proteinske kinaze poslužiti kao mete za terapijsku intervenciju u raka, koji je provjerava i dokazuje uspješno i široka primjena inhibitora protein-kinaza u više vrsta raka, bilo kao pojedinačan lijek ili u kombinaciji režimima. Međutim, kao heterogene bolesti uzrokovane kumulativnih više mutacije gena, a ne vođeni jednom kinaze mutanta, rakova koji imaju dobar odgovor na jednu komponentu terapije su vrlo ograničene. Osim toga, stečena otpornost tumora sami pomoći da brzo izbjeći od kemoterapije, a zatim recidiva. Kompleks netipična signalizacija u karcinomima privlači razvoj strategija koje su usmjerene na više bioloških puteva koji su relevantni za tumorske biologije, kao što su proliferacija, metastazama i anti-apoptoze. Jedna strategija uključuje racionalne kombinacije lijekova. Na primjer, kombinacija VEGF ciljani monoklonsko protutijelo s konvencionalnom kemoterapijom pokazala značajnu prednost preživljavanja kod raka dojke, debelog crijeva i pluća [1]. Druga strategija je razviti spojeve koji pokrivaju više mehanizama unutar jednog agenta. Ovaj pristup ima nekoliko potencijalnih prednosti u odnosu na kombinaciju strategija, uključujući jednostavnosti put razvoja, brzine do tržišta, a manje preklapanja nuspojava. Trenutno, inhibitor multikinase sorafenib koristi se kao prva linija liječenja za napredne i metastatski HCC s poboljšanjem srednja vrijednost vremena preživljenja sa 7,9 mjeseci (placebo grupe) do 10,7 mjeseci [2]. Međutim, liječenje sorafenib rezultira statistički značajne, ali klinički blagim, poboljšanja u ukupnom preživljavanju, vrijeme do progresije bolesti i kontrolu brzina [3]. U međuvremenu, tradicionalna cisplatin-based terapija je još uvijek široko koristi u kliničkim uvjetima za napredne i metastatske GC. Za HER2 /neu ekspresijom želučane adenokarcinome, trastuzumab u kombinaciji s kemoterapijom produžuje Prosječno preživljenje od 11.1 mjeseci (kemoterapiju) 13.8 mjeseci [4]. Iako companioned dijagnostički metodologija je utvrđeno da se ciljanim ekran pacijenata, trastuzumab nema aktivnosti u velikoj podskupini bolesnika koji nose visoku razinu HER2 /neu s razlogom da se identificiraju [5]. S obzirom na visoke smrtnosti HCC i GC i dosadašnjih terapeutskih režima s ograničenom rezultat, još uvijek postoji velika neostvarena potreba u medicini za obje vrste raka. Pregled Angiogeneza temelju terapija raka uključujući anti-VEGFR-2 antitijela, male molekule protiv VEGFR -2 signalizaciju [6], [7], i VEGFR kimerni protein [8], je dokazano da se učinkovit strategija za liječenje od više vrsta raka. Osim toga, djelotvornost multikinase inhibitori sunitinib i sorafenib će dijelom pripisati VEGF signala blokiranja [9]. Međutim, brojni pacijenti su intrinzično rezistentni ili razvijaju otpornost na anti-antiangiogenog terapiju nakon nekoliko ciklusa liječenja [10], [11]. Prema tome, klinički pokusi kombinirajući angiogenih inhibitora i lijekove s alternativnim mehanizmom djelovanja očekuje se da bi se poboljšala djelotvornost i nadvladati otpor antiangiogenog liječenju [12]. To je široko priznat da je prekomjerna ekspresija Aurora kinaza u različitim oblicima raka koji su uključeni u proces tumorigenezi [13], [14]. inhibitor Aurora kinaze VX-680 je bio u mogućnosti da učinkovito inhibira rast stanica raka In vitro pregled i in vivo pregled, a potom ušao u kliničkim ispitivanjima, sugerirajući da su Aurora kinaze su druggable ciljevi [15] . pregled U svjetlu kumulativnih dokaza angiogeneze i Aurora kinaza u raka i njihove terapijske vrijednosti dokazuju bioloških i malih molekula inhibitora, otkrili smo inhibitor kinaze, R1498, što značajno utječe na ključne puteve angiogeneze i mitoza. R1498 ima jedinstveni profil inhibicije kinaze, visoku potentnost i dobre farmakokinetičke i toksikokinetičke profile, sve to podržavaju daljnji klinički razvoj. Pregled materijali i postupci Etika Izjava pregled Korištenje i briga o pokusnim životinjama je odobren od strane njega i uporaba odbora Institucionalna životinja (IACUC), Roche R &D Center (Kina). Kruna biomedicine, A CRO tvrtka za pružanje usluga zalaže za zaštitu privatnosti pacijenata i pratiti sva etička načela za pacijenta izvedeni materijala prikupljenih svježe odbačenih uzoraka humanog tumora, s IRB-a (lokalna bolnica ekvivalent odbor) odobravanje i strpljiv zahtjeva pristanak. Sve stanične linije su kupljene od ATCC, SAD, ili Šangaj instituta za biokemiju i staničnu biologiju, Kineske akademije znanosti pregled Spojevi pregled R1498 (čistoća = 98%). Sintetiziranje Roche R & D centar (Kina). Za enzimatska ispitivanja i in vitro staničnim linijama Sve stanične linije iz American tipične Centra Collection (ATCC) i staničnu banku, Šangaj instituta biokemije i biologije stanice, kineske akademije znanosti su održavane na 37 ° C s 5% CO 2 vlažnoj atmosferi u mediju za uzgoj te preporučiti strane distributera i podvrgnuti in vitro stanične proliferacije pregled Svaka stanična linija se zasije u pločici za kulturu tkiva s 96 jažica (Corning, NY) na unaprijed određenoj gustoćom u 180 uL kompletnom sredstvu, vezan preko noći i tretira spojem za drugi 72 h. Zatim je medij uklonjen i zamijenjen s 10% CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) u kompletnom mediju, potom inkubira ploče još 2 h. OD 450 je izmjeren SpectraMax 190 spektrofotometra (MDS, Sunnyvale, CA). Pozadina apsorbancija OD trupu oduzeta je od svih jažica. Zatim stopa inhibicije (IC) određen je pomoću sljedeće formule:. IR (%) = (OD DMSO-OD spoj) /OD DMSO × 100% pregled U VEGF-inducirani HUVEC proliferacije analize, HUVECs su suspendirane u 170 ul EGM-2 s 0,5% FBS su nasadeni i inkubirane preko noći. Nakon stanice vezani, 10, ul 1 ug /ml rekombinantnog humanog VEGF165 (R &D Systems, Minneapolis, MN), doda se u svaku jažicu, zajedno s 20 ul spoja otopinama pripravljenim u EGM-2 s 0,5% FBS. CCK-8 test kao što je gore je korišten za određivanje stanične održivosti. Pregled Analize kinaze pregled Afinitet R1498 protiv 402 kinaza je određen KINOMEScan® (domašaj bioznanosti, San Diego, CA) a podaci su prikazani kao konstantom disocijacije (KD) vrijednosti [16]. Inhibicija na aktivnost kinaze Aurora kinaze i VEGFR2 je dalje karakteriziran Z'-LYTE analize aktivnosti kinaze u odgovarajućim koncentracijama ATP. Pregled HUVEC Tube Dobivanje Test pregled Test HUVEC formacija cijevi je provedena kako ranije izvijestili [17]. Ukratko, Matrigel ™ (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) je otopljen pri 4 ° C 3~4 h. 100 ul tekućine Matrigel ™ se doda prethodno ohlađenu pločici za kulturu tkiva s 96 jažica, i ploča je inkubirana na 37 ° C, 5% CO 2 vlažnoj atmosferi kroz 1 sat da se skrutne Matrigel ™. HUVEC se kultiviraju u EGM-2 s 0,5% FBS preko noći, i zasijane u 90 uL EGM-2 s 0,5% FBS, uz gustoću od 2.2 x 10 5 stanica /ml na Matrigel ™ obloženu ploču. Stanice su tretirane spojem ili ekvivalentnom količinom DMSO. Ploča se inkubira na 37 ° C, 5% CO 2 vlažnoj atmosferi tijekom 7 sati, a zatim morfologija stanica bio zarobljen sa faznokontrastne mikroskopom (IX71, Olympus, Hamburg, Njemačka). Pregled Western blot pregled Stanični lizat je bio pripravljen u RIPA puferom i kvantificiran je metodom bicinkroniničnoj kiselini (BCA) (Pierce, Rockford, IL). Trideset mikrograma proteina po uzorku je nanesen na 4~12% NuPAGE® Novex SDS gel (Invitrogen). Protein je prenesen strane iBlot® suhog blot uređaja (Invitrogen) na nitroceluloznim membranama. Nakon blokiranja nespecifično vezanje s TBS /Tween20 (0,1%) (TBS /T) koji sadrži 5% non-masnoće mlijeka tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi, membrana se inkubira u fosfo-Aurora A (Thr288) (C39D8) zečjim monoklonsko protutijelo ( cell Signalling Technology, CSTij9, Beverly, MA) ili fosfo-histon H3 (Ser10) poliklono zečje antitijelo (CSTϊ1) (1:1000 u TBS /T sadrži 3% goveđi serum albumin (BSA), i blago tresla na 4 ° C preko noći. membrana je isprana s TBS /T tri puta da se ukloni nevezano antitijelo, a zatim inkubirane sa sekundarnim protutijelom (HRP-konjugirani kozji anti-mišji IgG, ili kozjim anti-zečji IgG, 1:10000, KangChen Biotech, Shanghai, Kina) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi, respektivno. Proteinske vrpce su vizualizirani s hemiluminiscencija (ECL) kit (Pierce, Rockford, IL). Imunofluorescencija Stanice nasađene na komoru Rezovi su fiksirani u 4% paraformaldehidu na sobnoj temperaturi, permeabilizirane sa 0.15% Triton-X100 u TBS i blokirane u 3% BSA u TBS /T. primarna antitijela (fosfo-Aurora a (Thr288) (CSTĵ7), fosfo -Histone H3 (Ser10) (CSTϊ1) i MPM2 (anti-fosfo-Ser /Thr-Pro) Millipore-368) su inkubirani s preparata u vlažnu komoru na 4 ° C preko noći. Sekundarnih antitijela Alexa Fluor® 488 kozjim protiv-kunića IgG (H + L) i Alexa Fluor® 594 kozji anti-mišji IgG (H + L) (Invitrogen) dodane su redom jedan sat nakon što je objektna stakalca su isprana s TBS-om temeljito. Nakon što su uklonjeni nevezane antitijela, stakalca su osušeni i montiraju pomoću montažnog DAKO antifide mediju. Slike su snimljene s IX71 u skladu s odgovarajućim uzbude i emisije filtera. Pregled Tekuća citometrija pregled Sadržaj DNA mjerena je s FACS_Calibur citometru (Becton Dickinson, San Jose, CA) i distribucija staničnog ciklusa je izračunata kao što je opisano [18]. pregled tubulina in vitro pregled polimerizacija test pregled In vitro pregled test polimerizaciju tubulina je izveden kako je prethodno opisano [18 ] pregled Jedna doza farmakokinetičkih (SDPK) Studija pregled korištenje i briga o pokusnoj životinji je odobren od strane institucionalnog Animal care i korištenja odbora, Roche R &d. Centar (Kina). Mužjaci miševa (tjelesne težine: 19 do 24 g) su bili korišteni u SDPK studiji. Prije farmakokinetičkog istraživanja, životinje su nasumce raspoređeni u skupine za uzorkovanje (3 životinje po vremenskom intervalu). Deset dodatnih miševi su korišteni za prikupljene plazma umetkom za kalibracijske krivulje. Miševi su postili preko noći prije oralnog davanja. Pregled Uzorci krvi prikupljeni su retro-orbitalnom punkcijom u odnosu na prethodnu dozu i 0,033, 0,083, 0.25,0.5, 1, 2, 4, 6, 8, i 24 sata nakon doze. Uzorci plazme i formulacije doze su pohranjeni na -20 ° C do bioanalizi. Sustav za prikupljanje podataka i kontrola su stvorene pomoću analitičar 1.4 softver iz ABI Inc. Koncentracije u plazmi ispod granice kvantifikacije (LOQ = 1 ng /mL) su označeni kao nula. Farmakokinetički analiza podataka provedena je pomoću analize podnošljivosti module WinNonlin stručnog v5.2 (Pharsight, USA) .The bioraspoloživost se izračuna kao F (%) = (Doza iv × AUC PO (0-∞)) /(doza po × AUC iv (0-∞)) * 100%. Za štakora, pasa i majmuna SDPK, uzorci krvi prikupljeni su iz jugularne vene punkcije. Pregled ksenografta studija provedena sa staničnim linijama i strpljiv Izvedena Tumori Korištenje i briga o pokusnoj životinji je odobrio Institucionalna skrb o životinjama i koriste odbor, Roche R &D centar (Kina). Tumorske stanice su nasadi se u desni bok BALB /C nu /nu pregled ženski miševe (5~6 tjedana, 16~18 g, dobiveni iz kinesko-britanske SIPPR /BK laboratoriju. Animal Ltd, Šangaju, Kina) na optimalnu gustoću na temelju naše in-house ocjenu valjanosti. Nakon što je osnovana tumor i dostigle 100~150 mm 3, miševi su nasumično podijeljeni u deset miševa po skupini i dobio tretman prema rasporedu. Rast tumora je zabilježen tri puta tjedno s mjerenjem duljine (L) i širinu (W) od strane čeljusti, a izračunava se kao volumen tumora (TV, mm 3) = 0,5 * L * W * W (mm) , Inhibicija rasta tumora je izračunat kao% TGI = (1- (srednja vrijednost volumena tumora u tretiranoj grupi u prvom volumenu dana srednje tumora u tretiranoj grupi na kraju dan) /(srednja vrijednost volumena tumora u kontrolnoj skupini na prvom dana srednja volumen tumora u kontrolnoj skupini na kraju dan)) × 100%. Tumor regresija pojedinog miša je definirano -, volumen tumora na kraju je bio manji od volumena tumora kada je liječenje započne pregled modele ljudskog primarnog tumora, svježe ljudskih tumorskih tkiva želučanih se direktno ugrađuju u pretili i dijabetička teška kombinirana imunološki s manjkom (NOD-SCID) miševe roku od 5 sati nakon operacije sa 5 mm 3 fragmenta utvrditi osnovne modele tumor sa stranim tijelom. Svaki model tumora je provjereno najmanje tri serijski in vivo Imunohistokem pregled 8 pm uklopljenog u parafin, tobogani tumorskog tkiva pripremljeni od tumora in vivo Doza Raspon Pronalaženje i Studija toksikokinetike pregled Doza raspon nalaz i toksikokinetike Istraživanje je provedeno na štakorima i Beagle psi se temelji na In vitro pregled metaboliti identifikaciju. Wistar štakori (muški: 3, ženka 3 u svakoj skupini, od vitalne rijeke, Peking, Kina) su postili preko noći, a onda primio testni članaka kao 0, 6.25, 50 i 100 mg /kg dva puta dnevno po oralnom sondom za 14 -dnevno kontinuirani režim. Promatranje pokretljivost je primijenjen na dnevnoj bazi kako bi pronašli najveću tolerantnu dozu za životinje. Životinje su žrtvovane na D14, a sljedeće opažanje toksikologija su provedena uključujući promjene tjelesne težine, kliničkim zapažanjima, gruba autopsija, hematologiju kemije i histopatologijom. Na dan 1 i dan 14, uzorci krvi su dobiveni putem jugularne vene punkcijom iz svih životinja (ako živa pomoću EDTA K2 cijevi). Uzorci su se blago miješaju se i stavlja na lomljenog mokro-leda dok je centrifugiranje, koja se provodi odmah. Uzorci su centrifugirani otprilike 15 minuta, na 4 ° C, 2.700 okretaja u minuti. Dobivena plazma je odvojena, prebačena u jedinstveno obilježenim jasne polipropilenske epruvete, te odmah smrznute po krutina ugljik dioksida (suhi led), dok se prenosi do otprilike -80 ° C. Svaka životinja je uzeta krv u sljedećim vremenskim točkama: približno 5 min, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 8 i 24 sata nakon prve doze u određenom danu. Koncentracija lijeka u plazmi određene su LC-MS /MS. Farmakokinetički analiza je provedena su softverom WinNonlin (verzija 5.2, Pharsight Corporation, CA, USA), a farmakokinetički parametri su izračunati pomoću Non-Compartmental postupak modela. Beagle pasa (približno 8-10 mjeseci, od Peking Marshall Biotehnologija Co Ltd, Peking, Kina) su podvrgnuti protokolu studije kao što je gore opisano. Svaka skupina ima jedan muški i jedan ženski pas, doze ispitivane članka su: 0, 1, 7,5 i 15 mg /kg. Uporaba i briga o pokusnoj životinji je odobren od strane institucionalnog Animal Care i korištenja odbora, Roche R &. D centar (Kina) pregled Analiza podataka i statistika pregled Nezavisni t-test je korišten za kontinuirano podataka analiza i χ2 test je primijenjen na rangirane podatke. Podaci su uzeti u obzir značajan kada p vrijednosti bile. ≪ 0,05 pregled Rezultati 1. Karakterizacija R1498 je kao inhibitor Multikinase pregled pirazolobenzodiazepina analogni R1498, sa skele temelji na fuziju benzodiazepin i pirazolnog prstena (slika 1A), ranije identificiran kao slaba ciklinu ovisne kinaze 2 (CDK2) inhibitor [19]. Ova molekula pokazala prirodu inhibitora multikinase kada smo analizirali inhibitor kinaze knjižnice. Profil inhibicija kinaze od R1498 (1 uM) se karakterizira pomoću KINOMEScan® pri koncentraciji ATP oko km svake kinaze. Stopa inhibicija R1498 je više od 80% u odnosu 39 kinaza izvan 402 kinaza, uključujući 359 divljeg tipa kinaze i 43 kinaze mutanata (Slika S1). Konstante disocijacije (Kd) od 39 učitavanju kinaze određene su, i kinaze s Kd < 0.2 uM prikazane su na Slici 1B. Većina potencijalnih hitova pripadaju tirozin kinaze (TK) obitelji i obitelji AGC. Osim toga, Z-LYTE ispitivanje provedeno je za daljnje određivanje aktivnosti inhibicije kinazne R1498. Rezultati su pokazali da IC50 R1498 su 25 ± 6 67 ± 4 167 ± 13 nM protiv VEGFR2, Aurora kinaze A i B, odnosno (Slika 1C). Tada je naša studija je usmjerena na antiangiogenih i anti-mitotički puteva majorly pogođene R1498. Pregled Ploča stanične linije 16 raka, uključujući hepatocarcinoma, raka želuca i nazofarinksa stanične linije karcinoma, korištena je za određivanje In vitro pregled protiv proliferacije sposobnost R1498. Većina stanične linije su uspostavili iz azijskih vrsta raka, kao što je azijski rasprostranjen raka su naš fokus. Hepatocarcinoma i karcinom želuca stanične linije panela su više osjetljivi na R1498 liječenja od nazofarinksa staničnim linijama karcinoma. Ukupna Srednje vrijednosti IC50 bile su 7,81, 7,55 i 30,07 um, što odgovara epatocellular karcinoma, karcinoma želuca, i nazofaringealni stanične linije karcinoma, respektivno. Osjetljivost staničnih linija izvedenih iz azijskih populacija (BEL-7402, QGY-7701 i QGY-7703) bio je usporediv s osjetljivošću Hep3B da je od Kavkaza (Slika 1D). Pregled 2. R1498 inhibira Aurora kinaze i inducira staničnog ciklusa pregled Aurora kinaze inhibicija R1498 je vizualizirana imunofluorescencije u rak želuca stanične linije SGC-7901. Izravna fosforilacijska mjesta fosfo-Aurora kinaza A (T288) i fosfo-histon H3 (S10) koristi se za označavanje aktivnost kinaze Aurora A i B, odnosno [20], [21]. Fosfo-Ser /Thr-Pro mitotička protein monoklonsko(MPM2) je korišten kao mitotičkim markerom (crveno) za označavanje mitozi. Aurora kinaze A (T288) fosforilacija događa u centrosomi od mitoze stanice (zeleno). Nakon stanice su tretirane s 5 uM MR1498 24 sata, Aurora A T288 zelena žarišta u mitozi oslabio ili nestala (slika 2a, gornji panel), što pokazuje da djelovanje Aurora kinaze smanjena na R1498 liječenja. Fosforilacija histona H3 (S10), uglavnom je lokaliziran u centromera mitotičkih stanica. Nakon stanice su tretirane s R1498, fosfo-histon H3 (S10) oštro smanjen (zeleno). To opažanje sugerira da aktivnost Aurora kinaze B također pao dolje na R1498 liječenja. Ovi rezultati imunofluorescencije su potvrđene Western blot. Kao što je prikazano na Slici 2B, fosforilaciju fosfo-Aurora kinaze A (T288) i fosfo-histon H3 (S10) smanjena na način ovisan o koncentraciji u akutnom liječenju do R1498. Pregled inhibicija Aurora kinaza A i B proizvodi različite fenotipske promjene u staničnom ciklusu. Suzbijanje Aurora A izazvanog staničnog ciklusa G2 faze uhićenja [22], dok je inhibicija Aurora kinaze B je izvijestio da uzrokuje poliploidiju u stanice, zbog endoduplication bez citokineze [15]. Nakon stavljanja stanica se pomiješa s 10 uM R1498, i SGC-7901 (rak želuca stanica) i BEL-7402 (hepatocelularni karcinom) pokazala G2 /M fazi zastoj i nakupljanje poliploidnih stanica. Za BEL-7402, stanice distribucija u G2 /M faze povećan sa 25,6% na 57,0%, u međuvremenu, stanice s ^ 4 sadržajem N DNA povećan je sa 6,7% na 17,6%. SGC-7901 je više osjetljiva s G2 /M populacije povećan sa 25,2% do 75,5%, i poliploidnih stanica povećan s 3,1% do 21,6% (slika 2C). Mikrotubula stabilizatora (na primjer taksol) i destabilizer (na primjer kolhicin) uzrokuje G2 /M fazi zaustavljanje i. Da bi razumjeli da li R1498 je mikrotubula ciljano reagens, In vitro pregled tubulin test polimerizacija je provedena. Podaci su pokazali da R1498 ne stabilizira, niti destabilizira polimerizaciju mikrotubula i pod visokom koncentracijom R1498 (40 um) In vitro pregled (Slika 2D), što ukazuje da je stanični ciklus G2 /M uhićenje nije bio uzrokovan mikrotubula stanični skelet poremećaja. Uzeti zajedno, ovi podaci predložio da R1498 inhibiraju Aurora kinaze A i B stanica i producirao fenotipske promjene u stanicama. Pregled 3. R1498 antagonizira angiogenezu napretku humanih endotelnih stanica pregled Angiogeneza je inicijaliziran sekrecija angiogenog faktora rasta iz tumorskih stanica, te endotelne stanice rastu, migriraju i oblik posude cijevi u odgovorima na VEGF stimulaciju. Kao odgovor na specifičnost R1498 antagonizira rast endotelnih stanica stimulirana VEGF, ljudske endotelne stanice umbilikalne vene (HUVEC) bile su izložene u dvije različite podražaje, VEGF i FBS, uz tretman R1498 72 sata. Pod uvjetima kulture koje sadrže VEGF ili FBS, HUVEC su pokazali različitu reakciju na R1498. IC50 su 89 i 2064 nM za VEGF i FBS, odnosno; to sugerira da R1498 antagonizirati rast HUVEC potaknut VEGF jači nego FBS (Slika 3A). U HUVEC analizu formiranja cijevi, nakon 8 sati izlaganja R1498, HUVEC formirana manje nepromijenjenim cijevi oka nego DMSO tretiranim skupinama (Slika 3b). R1498 nije utjecao HUVEC proliferaciju pod ovim uvjetom tretmana (podaci nisu prikazani). Pregled 4. R1498 potiskuje rast karcinoma Human ksenografta Netlogu farmakokinetičkih svojstava s jedne doze R1498 u su određene više vrsta. Vrijeme poluživota (T1 /2) i oralna bioraspoloživost (Oral BA%) favorizira dodatno studija provedena u golog miša (tablica S1) s dva puta dnevno oralno raspored kljukanje. Ploča ksenografta, uključujući azijske želučani karcinom, hepatocarcinoma i nazofarinksa raka bio zaposlen za usporedbu R1498 i drugih inhibitora multikinase sorafenib (Slika 4, Tablica S2). Sorafenib odobren je kao prva linija terapije za hepatocarcinoma [2], te je u kliničkom ispitivanju za kombinacijske terapije za napredno rakom želuca [23]. Paralelno Usporedba se sastoji od inhibicije rasta tumora, povlačenje i tjelesne težine promjene životinje s doziranjem od 25 mg /kg, dva puta dnevno po oralni. U svim ispitivanim ksenografta, R1498 je pokazao bolju stopu rasta tumora inhibicije (TGI%) u odnosu na sorafenib. Za hepatocarcinoma je TGI% od R1498 je 10-19% više nego TGI% od sorafenib, raka želuca, 2-12% tijekom TGI% od sorafenib. Regresijski stopa tumora također je registriran kao druge terapeutske krajnju točku. U hepatocarcinoma ploči regresijom tumora u BEL-7402 modelu, 8/10 (80%), životinje su imale regresije u R1498 skupinu, pri čemu 1/10 (10%) životinja imala regresije u sorafenib skupini (Slika 4, BEL-7402) , Za želučane ploči raka, MGC-803 i SGC-7901 stranih tijela ima istu stopu regresije u odgovoru na test članaka: 5/10 (50%) za R1498 i 2/10 (20%) za sorafenib (Slika 4, SGC -7901 i Tablica S2). Na temelju konačne efikasnosti iz svih 7 testiranih modela, R1498 ima bolju učinkovitost od sorafenib pod istim rasporedom liječenja. Štoviše, R1498 pokazivao je dobru efikasnost na jednoj nazofarinksa ksenograft karcinoma je TGI% od R1498 (90%, 25 mg /kg, dva puta dnevno, po oralnom sondom) bila je bolja od standarda brižljivo ciklofosfamid (60%, svakih 10 dana, intraperitonealno) (Slika 4, CNE-2). Promjene tjelesne težine koji su zabilježeni na svim modelima za usporedbu toksičnosti pokazala da je goli miš pokazali podnošljiva za R1498 tijekom cijelog tretmana u BEL-7402, SGC-7901 i CNE-2 modela, iako tjelesne težine neznatno smanjen 10 dana nakon tretman (Slika 4, Tablica S2). Međutim, sorafenib uzrokuje kontinuirani kap tjelesne težine. Za sorafenib tretira miša u BEL-7402 i SGC-7901 modela, postotak tjelesne mase prelazi 15% na dan raskida. Kao što je prikazano u tablici S2, R1498 je pokazao manji utjecaj na mišje tjelesne mase od sorafenib učinio, što sugerira da je R1498 održati bolji sigurnosni profil. Pregled 5. R1498 podregulira fosforilacije Aurorinog A i vaskularnih Gustoća na tumor pregled Fosforilirani Aurora A (T288) i CD31 u tumorima iz efikasnosti studije su korišteni za određivanje učinka na-meti R1498. Masa tumora dobivenih od BEL-7402 ksenografta Studija je izrađena u uklopljenog u parafin, dijapozitiva i podvrgnuti immunohistochemisty za vizualizaciju angiogeneza kavu ljudski CD31 i Aurora kinaze marker aktivnost fosfo-Aurora A (T288). U BEL-7402 tumora je CD31 bojenje R1498 liječenih grupa smanjena na način ovisan o dozi, koji je predložio vaskularizacija tumora inhibirana (slika 5A). Aktivnost Aurora kinaze također je smanjen na R1498 liječenja, koje se reflektira na slabiji bojanjem tumora fosfo-Aurora A (T288) u R1498 obradi (Slika 5B). Pregled Human primarni tumor želuca izveden ksenograft modela je korišten za predviđanje djelotvornosti za kliničku prevođenja. Kancerogenog tkiva triju pojedinačnih pacijenata oboljelih od raka želuca su presađenih u miša i stranih tijela nacrtana različite krivulje rasta in vivo pregled. U ksenografta pokazali različit utjecaj na promjene tjelesne težine domaćina. Miševi su tretirani s R1498 (25 mg /kg) na navedenom razdoblju konačni TGI% postignut 73,6 ~ 91,6%, a stope regresije 10~30%. Ograničene promjene tjelesne težine predložio da se tumor koji nosi miševi su i tolerantni na R1498 (Slika 6). Pregled 6. R1498 ima dobar farmakokinetički profil (PK) i terapijski prozor pregled SDPK pokazala da su prihvatljiva biološka i poluživota svojstva R1498 među golih miševa, štakora i pasa (tablica S1). Sakupljene mikrosomi jetre su korišteni za predviđanje glavnih metabolita u različitim vrstama. Rat i bigl pas sa sličnim mikrosom metabolita čovjeka su se u najvećoj tolerantna doza (MTD) studija odrediti terapijski prozor između efikasnih i otrovnih izloženosti (Tablica S4). Ženke i mužjaci štakora pokazala drugačiji odgovor na eskalirao doza R1498.
inhibiciju rasta na ploči tumorskih stanica s IC50 od raspona mikromola. in vivo pregled antitumorski učinkovitost R1498 procijenjena je na ploči GC i HCC ksenografta u paralelnoj usporedbi s drugim inhibitorom multikinase sorafenib. R1498 pokazali bolju učinkovitost i toksičnost u odnosu na profil sorafenib svim testnim modelima s > 80% inhibicije rasta tumora i regresiju tumora u nekim xenogratfts. Terapijski potencijal R1498 također je istaknuo njegovu učinkovitost na tri ljudska GC primarnog tumora dobivenih modela stranog tijela s 10-30% stope regresije tumora. R1498 je pokazano da se aktivno inhibiraju Aurora A aktivnost in vivo pregled i smanjiti vaskularizacije u tumorima. Nadalje, R1498 predstavljen dobro in vivo pregled ekspozicije i terapijski prozor u rasponu rezultatima provedenih studija farmakokinetičkih i doze. Teze dokazi ukazuju na to da R1498 je snažan, dobro podnosi, oralno aktivan inhibitor multitarget kinaze s jedinstvenim antiangiogenog i antiproliferativnog profila i pružiti snažnu povjerenje za daljnji razvoj za HCC i GC terapije pregled
staničnim testovima, R1498 je otopljen u DMSO kao 0.01 mol /L zalihe otopine. Za studije na životinjama, R1498 je otopljen u 1% Klucel EF /0,1% polisorbata 80 /0,09% metilparabena /0,01% propilparabena voda, otopina se pripravi na tjednoj osnovi. Sorafenib sintetiziranje Roche R & D Center (Kina) i otopi u Cremophor EL /etanol (50:50, Sigma) u pripravi 5 mg /ml otopine, folije koja je omotana i pohraniti na sobnoj temperaturi. Ova matična otopina je bila svježe pripremljena svaka 3 dana. Konačna rješenja za doziranje pripremljeni su na dan korištenja razrjeđivanjem koncentriranu otopinu sterilna voda. Pregled
testovi između prolaza 8~15 , stanične linije za istraživanja na životinjama su između prolaza 5~10. Ljudske pupčane vene endotelnih stanica (HUVEC), dobiven iz tvrtke Allcells (Emeryville, CA) se drži u EGM-2 (Lonza, Allendale, NJ) sa endotelnim dodataka za rast stanica i 10% fetalnog goveđeg seruma (Invitrogen, Carlsbad, CA).
prolaza pokazati stabilnost presatka. Tumori prolaza 4-7 potkožno inokulirane s trocars u pravom bočne BALB /c nu /nu ženke bezdlakih miševa (5~6 tjedana, 16~18 g). Liječenje je počelo kada je volumen tumora dosegla 100~150 mm 3. Protokol za mjerenje i upravljanje tumor je bio isti kao i stanične linije izvedene modelu tumora. Pregled
učinkovitosti studije su zagrijavani u suhom pećnici na 60 ° C 1 sat, a zatim deparafmizirani i hidrolizira Leica autostainer XL ST5010 na sobnoj temperaturi. Antigen dohvat se izvodi pri 95~99 ° C u citrat puferu (0.01 M, pH 6.0) grije medicinskog mikrovalnoj na 92-98 ° C 5 min, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Zatim peroksidazu blokiranje reagens (DAKO, DK-2600, Glostrup Denmark) primijenjen je kako bi se ugasilo endogene peroksidaze. Rezovi su inkubirani u blokiranju seruma tijekom 20 min, zatim pokrivena 100 ul fosfo-Aurora A (Thr288) (C39D8) zeca mAb (CSTij9, 1:200 u TBS /T) ili zečji anti-humani CD31 poliklonskih protutijela ( Santa Cruz Biotech, sC-broja 8306, Santa Cruz, CA, USA; 1:200 u TBS /T), na 4 ° C preko noći, zatim se inkubira u 100 ul DAKO EnVision + /HRP, zec /miša nakon temeljito ispere s TBS-om. Sto mikrolitara otopine supstrata-kromogeni (DAB) se primjenjuju na stakalca i inkubira na sobnoj temperaturi 10 min. Stakalca su blago isprane s vodom iz slavine 15 min. Counterstain i dehidracije je provedena XL ST5010 na sobnoj temperaturi. Konačno, slajdovi su napunjeni s pokrovnim staklom za montažu medija (Fisher Scientific, Miami, FL). Pregled
Glasnici proteina iz ljudskog mikrobioma rasvijetlili su ljudsko zdravlje
Ljudsko tijelo proučavalo se stoljećima, ali još uvijek postoje misteriji koji će se tek razotkriti. Na primjer, otkriveno je da u tijelu ima trilijune bakterija, one koje su korisne za zdravlje. Sada
Kemikalija za rak iz uobičajenog crijevnog mikroba
Mnoge uobičajene crijevne bakterije nose mutacije koje uzrokuju rak, kaže nova studija objavljena u časopisu Priroda 27. veljače 2020. Pozadina Trilijuni bakterija žive u i na ljudskom tijelu. C
Muškarci koji jedu jogurt dva puta tjedno imaju manju vjerojatnost da će razviti rak crijeva
Novo istraživanje otkrilo je da muškarci koji jedu dvije ili više porcija jogurta tjedno mogu smanjiti rizik od razvoja predkanceroznih izraslina koje mogu dovesti do raka crijeva. Ako se rezultati mo
