PLoS ONE: Aktivacija mczcnhimnog matične stanice makrofagi Prompts Ljudski rak želuca rast kroz NF-kB Pathway

Sažetak pregled

Prikupljeni dokazi ukazuju na to da makrofagi aktivirati mezenhimalne matičnih stanica (MSC) za stjecanje pro-upalnu fenotip. Međutim, uloga MSC aktivira makrofage u rak želuca ostaje u velikoj mjeri nepoznanica. U ovom istraživanju, otkrili smo da je MSC aktivirani makrofagi da daju povećane razine upalnih citokina. Cell formiranje kolonija i migracija testovi Transwell otkrio da supernatant od aktiviranih MSC mogao promovirati želuca epitelnih stanica i proliferacije rak želuca i migraciju stanica. Osim toga, ekspresija prijelaza epitelnog-mezenhimalnih (EMT), angiogeneze, i geni stemness povezanih povećana u aktiviranim MSC. Fosforilirani oblici NF-kB, ERK i STAT3 u stanica želuca povećani su aktivne MSC. Inhibicija NF-kB aktivacije PDTC blokira učinak aktiviranih MSC na želučane stanica raka. Ko-injekcija aktiviranih MSC sa želučanim stanicama raka mogla ubrzati rast raka želuca. Štoviše, humani monociti periferne krvi dobiveni su makrofagi i aktivirane MSC potaknuti proliferaciju i migraciju stanica raka želuca. Uzeti zajedno, naši rezultati ukazuju na to da MSC aktiviraju makrofage steći pro-upalni fenotipa i brz rast raka želuca u NF-kB ovisan način, koji pruža nove dokaze za modulaciju MSC strane tumora mikro okolinu i daljnji uvid na ulogu strome stanice u želučanom karcinogeneze i progresiju raka pregled

Izvor:. Yang T, Zhang X, Wang M, Zhang J., Huang F, Cai J, et al. (2014) Aktivacija mczcnhimnog Matične stanice makrofagi Prompts Ljudski rak želuca rast kroz NF-kB puta. PLoS ONE 9 (5): e97569. doi: 10,1371 /journal.pone.0097569 pregled

Urednik: Hiromu Suzuki, Sapporo Medicinski fakultet, Japan pregled

Primljeno: 18. veljače 2014; Prihvaćeno: 21. travnja 2014; Objavljeno: 13. svibanj 2014 pregled

Copyright: © 2014 Yang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane velikih istraživačkih plana Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (Grant br 91129718), Nacionalna zaklada Natural Science of China (Grant br. 81302119, 81201660, 81071421), Jiangsu Province za izvanredan Sci-tech inovacije tima u Fakulteti i sveučilišta (Darovnica br. SJK2013-10), Jiangsu Province je Projekt znanstvenih i tehnoloških inovacija i dostignuća transformaciju (Grant no.BL2012055), Jiangsu Province izvanrednu Medicinska Academic vođa i Sci-tech inovacije Team program (Grant no.LJ201117), Natural Science Foundation iz provincije Jiangsu (Grant no.BK2012709, BK20130540), Doktorski program Zaklade državnog Ministarstva obrazovanja (Grant br. 20113227110011), Jiangsu Province za prirodni Scicence istraživanja u Fakulteti i sveučilišta (13KJB320001). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je jedan od malignih bolesti najčešće se javljaju i čuva glavni uzrok smrtnosti od raka u cijelom svijetu [1], [2]. U Kini ima oko 360.000 ljudi umire od raka želuca svake godine [3]. Iako je incidencija je smanjen u posljednjih nekoliko godina na Zapadu, opstanak je još gore. [4] Tijekom proteklih desetljeća, veliki napor se vrši na razjasnili patogenezu karcinoma želuca. Međutim, složen mehanizam želučane karcinogeneze je još uvijek otvoren. Prikupljeni dokazi ukazuju na to da dugotrajna kronična upala je jedan od vodećih uzroka nastanku tumora. Otpuštanje pro-upalnih medijatora i povećane lokalne razine kisika i dušika vrsta može doprinijeti procesu karcinogeneze [5]. Nereguliranom proizvodnjom citokina u upalne mikrookoliš stimulira ekspresiju gena povezanih s razvojem raka i mijenja strukturne značajke mikrookoliš ubrzati početak i napredovanje raka [6] - [9]. Pregled

tumor mikrookoliš sastoji od različitih stanica strome uključujući infiltriranih stanica imunološkog sustava, fibroblasti karcinoma povezanih s (CAFs), mezenhimalnih matičnih stanica (MSC), i krvi i limfe vaskularne mreže. Te stanice međusobno djeluju i čine upalne mikroklima i pridonijeti nastanku tumora [10], [11]. Među stanice strome, makrofagi, kao važne imunološke regulacijskih stanica, igraju dominantnu ulogu u upravljanju upala u tumorskom okoline. Na primjer, makrofagi izoliran od tumora mikro okolini oboljelih od raka dojke tajnih kemotaksije citokina povećati metastaziranje karcinoma stanica [12]. Makrofagi također su pokazala da promoviraju upalnog odgovora i nastanku tumora kroz utječu na ekspresiju citokina i mijenjajući molekularne onkogene programa u epitelnim stanicama [13].

mczcnhimnog matične stanice (MSC) su još jedan veliki dio tumora mikrookoliša te se smatraju kao prekursorskih stanica raka povezana mezenhimske stanice i endotelne stanice [14]. Prethodne studije pokazale su da MSCS tajna topivih faktora za promicanje proliferaciju stanica raka i metastaza [10]. U upale povezane modela raka želuca, MSC može aktivirati prema CAFs povećati kronične upale i rak napredovanje [15]. Nadalje, MSC su izvijestili da se regrutirati monocita /makrofaga za promicanje rasta tumora u CCR2-depedent način [16]. Interakcija između makrofaga i MSC nastanka aktiviranog, pro-upalnu fenotip s visokim CXCL10 i IL-6 izlučivanja, što može utjecati na upalni mikroklima [17]. Pregled

Rak želuca je klasičan model kronične upale do raka. Međutim, uloga MSC aktivira makrofage u rak želuca i temeljni mehanizam još uvijek u velikoj mjeri nepoznanica. U ovom istraživanju, otkrili smo da MSC se snažno aktivira makrofage pod upalnih stanja, za proizvodnju upalnih citokina i tumorski faktore, što dovodi do poboljšanja želučane proliferacije epitelnih stanica, kao i karcinoma i migraciju stanica kroz aktivaciju NF-kB puta. Naši rezultati pokazuju da su makrofagi aktivirani-MSC promicanje želuca rasta i napredovanja raka pod upalnih stanja. Pregled

Materijali i metode

Kultura stanica pregled

Ljudski rak želuca stanične linije HGC-27, ljudski želuca stanična linija epitelnih stanica GES-1, a ljudski akutne monocitne leukemije stanične linije THP-1 kupljeni su iz Instituta za biokemiju i staničnu biologiju pri kineskoj akademiji znanosti (Shanghai, Kina). GES-1 i THP-1 stanice uzgajane su u RPMI-1640 mediju (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) s 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS, Invitrogen) i HGC-27 stanice su održavane u visokom glukoza DMEM (H -DMEM, Invitrogen) sa 10% FBS. MSC su izvedeni iz pupkovine i kultivirane u low-glucosae DMEM (L DMEM, Invitrogen) sa 10% FBS. Stanice su svi inkubiraju na 37 ° C u vlažnom inkubatoru za stanične kulture s 5% CO _{2. Svježe pupčane tkiva uzeta su iz zdravih babinje majke nakon što je dobiven pismeni informirani pristanak. MSC su izolirani i karakteriziran kako je ranije opisano [18]. Svi eksperiment protokoli su odobreni od strane Etičkog povjerenstva Sveučilišta Jiangsu. MSC u prolazu 3 su odabrani za pokuse. Pregled}

Priprema Supernatant pregled

Za pripravu makrofaga povezanih MSC supernatanta MSC (3 × 10 ^{5) nasađeno je pridržavati. Stanice THP-1 (01:01 omjer), doda se svježi medij, u prisutnosti ili odsutnosti LPS (1 ug /ml). Nakon ko-kulture od 48 sati, medij je uklonjen i stanice su lagano isprane s PBS-om radi uklanjanja stanica THP-1. Supernatanti iz aktiviranih MSC su sakupljene nakon 24 sata, filtrira kroz 0,22 um filter i pohranjena na -80 ° C do upotrebe. Kada se koristi za analizu stanične funkcije, supernatanti iz aktiviranih MSC pomiješani su s jednakom volumenu 10% FBS-DMEM koji sadrži H ili RPMI-1640 medij. Za signalni put analizira, stanice su tretirane sa supernatantima iz aktiviranih MSC 1 h}

Luminex Ispitivanje

humanog citokina &. kemokina magnetska kuglica panel kit (# HCYTOMAG-60K) (Millipore, Billerica, MA, USA) je dizajniran za otkrivanje faktor stimulacije kolonije granulocita (G-CSF), izveden iz trombocita faktor rasta-BB (PDGF-BB), monocita kemoatraktant protein- 1 (MCP-1), faktor tumorske nekroze-α (TNF-α), vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), IL-10, IL-1β, IL-4, IL-6 i IL-8 u supernatantu od aktiviran MSC. Svi postupci su obrađeni u skladu s uputama proizvođača. Signali su otkrivene i analizirani korištenjem Luminex200 sustav (Millipore). Pregled

Transwell® testa migracije pregled

Nakon tretmana s supernatantima iz aktiviranih MSC 48 h, GES-1 i HGC-27 stanicama ( 1 × 10 ^{5 /dobro) su stavili u gornju komoru (8 nm) (Corning, NY, USA) u mediju bez seruma. Kompletni se medij se stavi u donju komoru. Nakon inkubacije od 12 sati, stanice preostale na dnu polikarbonatne membrane, obrisati pamuka za obuću. Stanice migriraju na donje površine membrane, su zatim fiksirane s metanolom tijekom 30 minuta. Je premješten stanice su obojene kristalno ljubičasto na 15 min i broje šest slučajnih polja pod mikroskopom (100 ×). Pregled}

kolonija stanica Formacija Ispitivanje

Stanice su sakupljene nakon tretmana sa supernatantima iz MSC za 48 sati i nasađene na ploče sa 6 jažica (1000 stanica /jažici) i kultivirane tijekom 10 dana. Medij se mijenja svaka tri dana. Na kraju razdoblja rasta, stanice su fiksirane s metanol tijekom 30 minuta i obojeni Kristal violet bojom 15 minuta. Stanične kolonije su fotografirani, a broj kolonija broje za statističku analizu. Pregled

RNA ekstrakcija i real-time PCR pregled

Ukupna RNA je ekstrahirana korištenjem Trizol reagensa (Invitrogen) prema uputama proizvođača , Pet mikrogram RNA uporabljen je za kvantitativno real-time PCR analizom. β-aktin korištena je kao interna kontrola. Sekvence specifičnim prajmerima popisani u tablici S1. Pregled

Western blot pregled

Stanice su lizirane i homogenizirani u RIPA puferom dopunjava s potpunim inhibitori proteaze. Jednaka količina proteina (200 ug) je riješen u 12% SDS-PAGE. Proteini su zatim preneseni na PVDF membrane nakon elektroforeze. Nakon blokirane u 5% (w /v) nemasnog mlijeka za 1 sat na sobnoj temperaturi, membrane se tada inkubiraju na njihovim odgovarajućim razrjeđenjima specifičnim primarnim antitijelima preko noći pri 4 ° C. Izvori primarnih antitijela su: anti-Oct4, anti-SOX2, anti-vimentin i anti-fosfo-STAT3 (Signalway antitijela, USA), anti-GAPDH (Kangcheng, Shanghai, Kina), anti-E-kadherina, anti- ERK1 /2, anti-fosfo-ERK1 /2 i anti-N-kadherina (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), anti-PCNA, anti-stat3, anti-NF-kB, anti-fosfo-NF kB, anti-CyclinD1, anti-VEGF i anti-c-Jun (Bioworld Tehnologija, Louis Park, MN, USA), anti-c-myc (ProteinTech Group, Chicago, IL, USA). pregled

Životinjski Model

Tri do pet tjedana stari BALB /c golim miševima su kupljeni od SLAC laboratorijskih životinja Center (Shanghai, Kina). Životinje su održavane u skladu s institucionalnim pravilima, a sve studije provedene su uz suglasnost Sveučilišnog Odbora za uporabu i skrb o životinjama Sveučilišta Jiangsu. HGC-27 stanice (1 × 10 ^{6) i MSC (5 × 10 5) su tripsinizirane, isprane i resuspendirane u 200 ul PBS-u. Potom se stanice se pomiješa i ko-injektira u lijevi bok golih miševa. Tumori su kirurški uklonjeni 20 dana nakon ubrizgavanja, fotografirao i ponderiranih. Veličina tumora je određena mjerenjem čeljusti i izračunate su na osnovu modificiranog elipsoida formule (L × W × W /2), gdje je L predstavlja duljinu, a W predstavlja širinu. pregled}

Imunohistokem pregled

Formalin- Rezovi tkiva tumora kod miševa s fiksnim parafin uklopljenih su prvo deparafmizirane u ksilena, rehidrirane ocjenjuju etanola. Sekcije su vrijala 10 minuta u citratnom puferu (pH 6,0, 10 mM) za popravljanje antigena. Endogena peroksidazna aktivnost je inhibirana s izlaganjem 3% vodikovog peroksida tijekom 10 min. Zatim sekcije su blokirani s 5% BSA (Boster Bioengineering, Wuhan, Kina) i inkubirane uz odgovarajuće razrijeđenim PCNA ili VEGF primarnim antitijelima na 37 ° C tijekom 1 sata. Nakon isprani u PBS, sekcije su inkubirane s razrijeđenom sekundarnih antitijela tijekom 20 minuta. Na kraju, sekcije su vizualizirani s 3,3'-diaminobenzidinu (DAB), a zatim negativno hematoksilinom za ispitivanje svjetlosnim mikroskopom (200 ×). Pregled

Primarni humanih monocita Izolacija pregled

dobivene su Humani monociti od Buffy kaput uzoraka periferne krvi donirali zdravog donora korištenjem Ficoll (Histopaque-1077) (Sigma, SAD). Svježi RPMI 1640 nadopunjen s 10% FBS je mijenjan svaka 2 dana, a nevezane stanice su uklonjene i pročišćen. Monociti su inkubirani tijekom 7 dana i 50 ng /ml M-CSF kako bi se dobila makrofaga (M). Zatim 24 sata supernatant luče makrofagi se sakupi i filtrira. Prijanjaju MSC su tretirani s makrofaga supernatantom u odsutnosti ili prisutnosti LPS (1 ug /ml) tijekom 48 sati i isprana. Supernatanti iz aktiviranih MSC prikupljeni su 24 sata kasnije, a koristi se za sljedeće studije. Pregled

Statistička analiza pregled

Statistička analiza je načinjena s SPSS statističkog softvera 16.0. Podaci su prikazani kao prosjek ± SD. Razlike u različitim skupinama analizirane su pomoću jednosmjernim ANOVA. Razlike između PDTC tretmani testirani su t
test. Statistički P pregled vrijednost < 0,05 smatra značajnom pregled

Rezultati

Co-kulture s makrofagima Pod upalno stanje regulira prema gore ekspresiju citokina kod upala i Stemness gena u. MSC pregled

Da se istraži djelovanje makrofaga na MSC pod upalnim stanjima, što zajedno uzgojene MSC s THP-1 stanicama u odsutnosti ili prisutnosti LPS (1 ug /ml) tijekom 48 sati. THP-1 stanice su uklonjene PBS pranja i adherentne MSC su uzgojene u svježi medij za dodatnih 24 sata (Slika S1). Luminex Ispitivanje je provedeno kako bi se utvrdilo razine raznih upalnih faktora u supernatantima iz MSC. Rezultati su pokazali da je proizvodnja IL-6, IL-8, TNF-α, MCP-1, VEGF i G-CSF je značajno povećana u supernatantu iz MSC ko-kultivirani s THP-1 stanice u prisutnosti LPS. Niske ili nedokazive razine tih citokina su kod MSC koje nisu bile ko-kultivirani s THP-1 stanica (Slika 1A). Za potvrdu povećanu ekspresiju tih upalnih citokina, izveden smo u realnom vremenu PCR za detekciju razine mRNA tih citokina. Našli smo da se u skladu s rezultatima testa Luminex (Slika 1B), ko-kulturu s THP-1 stanica doregulira razine mRNA IL-6, IL-8 i TNF-a u MSC. Da bi se utvrdilo je li ko-kultura sa stanica THP-1 utječe na stemness od MSC, otkrili smo ekspresiju Oct4 i SOX2 u MSC pomoću Western blot. Rezultati su pokazali da su Oct4 i SOX2 razina proteina je povećana u MSC koji su ko-kultivirani s THP-1 stanica (Slika 1C). Kako bi se dodatno potvrditi ovaj fenomen, mi također ispitati razine mRNA Oct4 i SOX2 u MSC. Rezultati u realnom vremenu PCR pokazala je da ko-kultura sa stanica THP-1 regulira prema gore ekspresiju Oct4 i SOX2 gena u MSC (Slika 1D). Općenito, ovi rezultati ukazuju na to da MSC značajno su aktivirana za proizvodnju više razine upalnih citokina ko-kultiviranih THP-1 stanice u upalnom stanju. Pregled

makrofaga se aktivira MSC Poboljšane proliferaciju i migraciju želučane epitelnih stanica

makrofaga i MSC su važne komponente tumora okoline. Pokazati funkcionalne uloge makrofaga se aktivira MSC, prikupi se supernatanta od aktiviranih MSC i inkubirane sa želučanom epitelne stanične linije GES-1 tijekom 48 h. Mi smo tada provedena testa formiranje stanica kolonija za procjenu širenja GES-1 stanica. Kao što je prikazano na Slici 2A, stanice su inkubirane sa supernatantom od aktiviranih MSC rastao brže i formira više i veće kolonije nego u drugim skupinama. Osim toga, inkubacija sa supernatantom od aktiviranih MSC povećao razine proteina u PCNA i VEGF u GES-1 stanicama (slika 2B). Rezultati transjažična testa migracije je pokazala da je broj migriranih GES-1 stanice aktivirane MSC plus LPS skupine je više nego u ostalim skupinama (Slika 2C). Rezultati Western blot analize pokazale su da su makrofagi-aktivirani MSC povisuje ekspresiju mezenhimalnih stanica markera (N-kadherina i vimentin) i smanjeno ekspresiju epitelnih stanica markera (E-kadherina) u GES-1 stanica (Slika 2D). Mi smo sljedeći određena ekspresija VEGF, MMP9 i TGF-ß pomoću real-time PCR. Kao što je prikazano na Slici 2E, inkubacije sa supernatantom iz aktivirati MSC plus LPS skupine doregulira ekspresiju VEGF, MMP9 i TGF-P u GES-1 stanicama. Dakle, MSC aktivirani makrofagi u upalnom okruženju znatno unaprijeđen proliferaciju i migraciju želučani epitel stanica. Pregled

makrofaga se aktivira MSC promovirao rast i migraciju rak želuca stanica pregled

Budući da makrofagi aktivirani-MSC utječu na želudac proliferacija epitelnih stanica i migracija, što sljedeći određuje učinak makrofaga se aktivira MSC na ljudskim karcinoma želuca HGC-27 stanica. Rezultati testa stanične formacije kolonije su pokazali da HGC-27 stanice su inkubirane sa supernatantom od makrofaga se aktivira MSC rastao brže i formirao veće klonova od ostalih skupina (Slika 3A). Western analize vijaka pokazali da su razine proteinski PCNA i VEGF u HGC-27 stanica bile značajno je povećana supernatantom iz makrofaga se aktivira MSC (slika 3B). Transwell® migracija testa pokazala je da je broj migrirale HGC-27 stanica izrazito povećan je supernatant iz makrofaga se aktivira MSC (Slika 3c). Western blot analiza je pokazala da makrofagi-aktivirani MSC inducira ekspresiju mezenhimalnih stanica markera (N-kadherina i vimentin) i inhibira ekspresiju epitelnih stanica markera (E-kadherina) u HGC-27 stanice (Slika 3d). Razine mRNA za VEGF, MMP9 i TGF-P su također povećana u HGC-27 stanica nakon tretiranja s supernatantom iz makrofaga se aktivira MSC (Slika 3e). S obzirom da je stanica raka stemness snažno je povezan s njihovim migracijama, otkrili smo ekspresiju stemness gena u HGC-27 stanica. Ekspresija Oct4 i SOX2 bio je primjetno doregulirani supernatantom iz makrofaga se aktivira MSC (Slika 3f). U skladu sa stvarnom vremenu rezultata PCR, razina proteina od Oct4 i SOX2 također povećana u HGC-27 stanica supernatantom s makrofagima-aktivirani MSC (Slika 3G). Ukratko, ovi rezultati ukazuju na to da makrofagi aktivirani-MSC je također promoviran želučane rast stanica raka, migraciju kroz indukciju EMT i staničnu stemness pod upalnih stanja. Pregled

Makrofazi-aktivirane MSC promoviranih želudac staničnu proliferaciju i migraciju kroz NF kB Put pregled

da bi istražili mehanizam odgovoran za promicanje uloge makrofaga se aktivira MSC-u staničnu proliferaciju i migraciju, utvrdili smo ekspresiju nekoliko ključnih signalnih pretvarača za upale i raka, uključujući STAT3, ERK i NF -κB, u želučanim epitelnim stanicama i želuca stanica raka. Rezultati Western blot analize pokazale su da su razine p-STAT3, p-ERK i p-NF-kB su značajno više u GES-1 stanice tretirane supernatantima iz aktiviranih MSC nego u drugim skupinama. Razina proteina NF-kB nisu imali promjena dok je ERK i STAT3 neznatno smanjen (slika 4a). Povećanje u p-STAT3, p-ERK i p-NF-kB razini proteina također je opažena u HGC-27 stanica nakon tretmana sa supernatantima iz aktiviranih MSC (Slika 4B). potvrdili smo doreguliranje p-STAT3, p-ERK i p-NF-kB razini proteina po supernatantima iz aktiviranih MSC u drugoj želučanom raka stanične linije SGC7901 (Slika S2). Da bi se odredilo da li nizvodno ciljne gene također aktiviran HGC-27 stanica, ispitali smo ekspresija ciklina D1, c-myc i C-Jun proteina. Kao što je prikazano na slici 4C, razina proteina ciklina D1 i c-Jun bili povišeni nakon tretmana sa supernatantima iz aktiviranih MSC. Pregled

Za budućnost se utvrdilo je li NF-kB igra važnu ulogu u funkcijama aktiviran MSC, HGC-27 stanice su prethodno tretirani s PDTC inhibira NF-kB fosforilaciju i potom inkubiraju s supernatantima iz aktiviranih MSC. Otkrili smo da je indukcija NF-kB fosforilacije aktivirani MSC u HGC-27 stanica značajno je inhibirana PDTC (slika 4D). Rezultati formiranja stanica kolonija i migracija testovima transjažična pokazalo je da je poboljšana proliferacije i migracije HGC-27 stanicama koje su aktivirane MSC su značajno smanjeni u tretiranim PDTC-skupine (slike 4E i 4f). Nadalje, PDTC terapija inhibira doreguliranje VEGF, MMP9 i TGF-P aktivirani MSC u HGC-27 stanice (Slika 4G). Uzeti zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da su aktivirane MSC brz želučanog epitela stanica i proliferacija rak želuca i migraciju stanica kroz NF-kB. Pregled

Makrofazi-aktivirane MSC promoviranih želuca rast raka in vivo pregled

S obzirom na dokaz da makrofagi aktivirani-MSC može poboljšati proliferaciju želučane stanica In vitro pregled, pitali smo jesu li ti MSC vrši promoviranje ulogu u rastu raka želuca in vivo pregled. Dakle, ko-ubrizgava HGC-27 stanice s aktiviranim MSC-u miševa. Dvadeset dana kasnije, tumorsko tkivo uklonjeno, mjeriti i ponderirane. Kao što je prikazano na slikama 5A i 5B su ksenografta tumora u aktiviranim MSC istovremeno injektiran skupine su veće nego u drugim skupinama. Imunokemijske analize su provedene da se odredi ekspresiju proteina s rastom povezana i pro-angiogenih faktora u tumorskim tkivima. Jači pozitivno obojenje PCNA i VEGF uočeno je u aktiviranom MSC ko-injektira skupine (Slika 5C). Stvarnom vremenu analize PCR su izvedene za otkrivanje ekspresije VEGF, MMP9 i TGF-P u tumorskim tkivima. Otkrili smo da je ekspresija svih tih gena u co-ubrizgava grupe bili su viši nego u HGC-27 stanica sama grupa (Slika 5D). Rezultati realnom vremenu analizira PCR pokazala je da je razina mRNA Oct4, SOX2 i Sall4 bila najviša u aktivnom MSC ko-ubrizgava skupine (Slika 5E). Ukratko, ovi podaci ukazuju na to da makrofagi aktivirani-MSC brz želuca rast raka in vivo pregled. Pregled

primarne monocite Aktivirane MSC potaknuti rak želuca stanična proliferacija i migracija kroz NF-kB pregled

kako bi se dodatno potvrdili aktivaciju MSC makrofagi potaknuti proliferaciju i migraciju želučane stanica raka, izolira se monocite iz ljudske periferne krvi i uzima supernatanta iz monocita diferenciran makrofaga. Nakon inkubacije s supernatantom iz monocita diferenciranih makrofaga, MSC su sakupljene a ukupna RNA je ekstrahirana u stvarnom vremenu analize PCR. Kao što je prikazano na slici 6B, liječenje s supernatantom iz monocita diferenciranih makrofaga doregulira razine mRNA IL-6, IL-8, MCP-1 i VEGF u MSC. Se potom inkubiraju želučanih stanica karcinoma sa supernatantom od aktiviranih MSC. Rezultati formiranja stanica kolonija i migracija testovima transjažična je pokazala da je supernatant od aktiviranih MSC poboljšala proliferaciju i migraciju HGC-27 stanice (slike 6c i 6d). Se nadalje pokazala da inkubacija sa supernatantima iz aktiviranih MSC povisuje ekspresiju p-STAT3, p-ERK i p-NF-kB u HGC-27 stanice (Slika 6e). Uzeti zajedno, ovi podaci ukazuju na to da je u skladu s THP-1 stanica, ljudski primarni makrofagi također aktivira MSC potaknuti proliferaciju i migraciju želučane stanica raka kroz NF-kB. Pregled

Rasprava pregled

Tijekom posljednjih desetljeća, veza upale do raka je privukao veliku pozornost [5], [6]. Dugotrajna izloženost epitelnih stanica na upalne mikro okolinu dovodi do zloćudne preobrazbe [9], [19]. Su stanice strome su pokazala da se kritički uključen u progresiju upala raka modulacijom upalni mikrookruženje [7], [8]. Makrofagi i MSC dvije glavne komponente tumora strome i sudjeluju u reguliranju razmjere upalne reakcije tijekom karcinogeneze [16]. Međutim, međuigra između makrofaga i MSC-u rak želuca nije dobro karakteriziran. Pregled

karcinoma želuca je evoluirala od dugotrajnog kroničnog gastritisa, te je klasičan model karcinoma povezanih s upalom. Mi smo ranije izdvojen boravištem MSC iz ljudskih tkiva raka želuca i pokazala da je rak želuca tkiva dobiveni MSC izlučuje puno upalnih citokina i promovirao želučane progresiju raka. Tijekom procesa upale, monociti /makrofagi mogao biti primljen obdariti MSC s tumorom promoviranje mogućnosti [16]. Osim toga, Helicobacter pylori pregled induciraju kronične upale u želučanoj epitelne stanice kroz oslobađanje LPS postoje u staničnog zida. U ovoj studiji mi predtretiranim MSC s makrofagima u prisutnosti LPS oponaša želučani mikrookruženje raka i utvrditi makrofagi se aktivira MSC doprinijeti želuca napredovanja raka. pokazali smo da MSC inkubirane s makrofagima i LPS izlučuju visoke razine upalnih citokina. Nedavna studija je izvijestio da kontinuirana stimulacija sa makrofaga uvjetovana srednje izazvana MSC steći pro-upalni fenotip [17]. U skladu sa svojim studija, otkrili smo da kratko vrijeme inkubacije s makrofagima i aktivira MSCS za proizvodnju veću razinu upalnih citokina. Pregled

epitela-mezenhimalne-prijelaza (EMT) je značajan proces tijekom metastaze raka [20]. Tijekom godina, reprogramiranje svojstva se odnose na EMT su pripisana za poboljšanje stanični plastičnosti u stanicama raka. Rak matičnih stanica uveden je i pokazano da doprinesu nastanku tumora i metastaziranja tumora [21] - [24]. Nedavne studije ukazuju da je jedna subpopulacija matičnih kao i mezenhimalne stanice nalik prikazan veći tumorogenosti na želučani epitelne stanice in vitro i in vivo pregled [25]. U ovom istraživanju, otkrili smo da aktivirani MSC, koje su bile ko-kultivirani s makrofagima u prisutnosti LPS, može značajno povećati migraciju želučanih epitelnih stanica, kao i želučane stanice raka. Nadalje smo pokazali da supernatanti iz aktiviranih MSC induciranih EMT u želučanom epitelnih i želučani stanica raka. Kako bi se dodatno objasniti ove rezultate, otkrili smo izražaj stemness gena u želučanih stanica raka. Otkrili smo da je izraz Oct4 i SOX2, dvije velike gena stemness vezane, očito je povećan za aktiviranih MSC. Angiogeneza je kritična za metastaze tumora i izraz VEGF je usko povezana s rakom želuca prognozu [26], [27]. otkrili smo da VEGF ekspresija značajno povećala nakon tretmana s supernatantima iz aktiviranih MSC u stanicama raka želuca i in vitro pregled i in vivo pregled. Na temelju tih nalaza, predložili smo da makrofagi aktivirani-MSC luči više upalne citokine i promovirao proliferaciju i migraciju stanica želuca raka po indukciji EMT i stanica stemness. Pregled

Nekoliko istraživanja su pokazala da MSC promicanje raka želuca rast različitim putevima [28], [29] i nedavna studija je pokazala da VEGF ekspresija je usko povezana s NF-kB u rakom želuca [30]. Štoviše, TGF-β ima važnu ulogu u kontroli proliferaciju stanica, apoptoza, diferencijaciju, migraciju i razvoja ekstracelularnog matriksa [31], [32]. Nedavna istraživanja su pokazala da je TGF-β aktivira NF-kB i igra važnu ulogu u napretku sinergistički aktiviranja različitih putova [33], [34]. TGF-β-posredovana indukcija matrične metaloproteinaze 9 (MMP9) je izvijestila da se regulirati NF-kB i JNK ciklusa [35]. TNF-stimulira proizvodnju MMP9 također aktivira NF-kB i ERK signalnih putova [36]. Dodatno, progresija želučanih epitelnih stanica u stanicama raka želuca Pokazano je da su regulirani ekspresijom citokina i NF-kB signalnog puta [37]. Drugi izvještaj sugerira da inhibiciji i proliferacije i angiogeneze sa intervenciju s lijekom kod raka želuca je vezan uz suzbijanje NF-kB [38]. U ovom istraživanju, pokazali smo da makrofagi se aktivira MSC doregulira fosforilaciju NF-kB i ekspresiju VEGF, TGF-b, i MMP9 u stanica želuca. Istovremena povećanja STAT3 i ERK fosforilacije mogu biti posljedica aktivacije NF-kB, jer NF-kB Prethodno je pokazano da regulira STAT3 i ERK signalne putove [39], [40]. Pregled

U zaključku, pokazao u ovoj studiji koja MSC aktivirani makrofagi stekao pro-upalnu fenotip i promovirao želučane proliferaciju epitelnih stanica i stanica raka i migraciju kroz NF-kB aktivacije. Naši rezultati pružaju nove dokaze za modulaciju želuca epitelnih stanica i stanica raka za MSC pod upalne okoliša i daljnje uvid u ulogama stanica strome u napredovanju od kronične upale do raka. Pregled

popratne podatke pregled slika S1. pregled Co-kultura MSC s THP-1 stanice. Reprezentativne slike stanica THP-1 i MSC-u direktni sustav ko-kulture prije (lijevo) i nakon (desno) PBS pranje. Povećanje, x 100, mjerilo = 50 mm
doi:. 10,1371 /journal.pone.0097569.s001 pregled (TIF)
Slika S2.
makrofaga se aktivira MCSs inducirana aktivacija NF-kB u SGC-7901 stanica. SGC7901 stanice su tretirane supernatantima iz makrofaga se aktivira MSC i ekspresiju p-STAT3, STAT3, p-ERK, ERK, detektirana p-NF-kB i NF-kB proteini SGC-7901 stanicama pomoću Western blot . pregled, doi: 10,1371 /journal.pone.0097569.s002 pregled (TIF) pregled Tablica S1. pregled Popis sekvencijama pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0097569.s003 pregled (DOC) pregled