PLOS ONE: L'effet inhibiteur de pseudolaric acide B sur le cancer gastrique et la résistance polychimiothérapie via Cox-2 /PKC-α /P-gp Pathway

Résumé

Objectif

Pour étudier l'inhibition effet de l'acide B pseudolaric sur des xénogreffes sous-cutanées de l'adénocarcinome gastrique humaine et les mécanismes moléculaires sous-jacents impliqués dans sa résistance à la polychimiothérapie.

Méthodes

cellules d'adénocarcinome SGC7901 gastriques humaines et des cellules résistantes aux médicaments SGC7901 /ADR ont été injectées dans des souris nues pour établir un modèle de xénogreffe sous-cutanée. Les effets de l'acide B pseudolaric avec ou sans traitement adriamycine ont été comparés en déterminant la taille de la tumeur et du poids. Cyclo-oxygénase-2, protéine niveaux d'expression P-glycoprotéine kinaseC-α et ont été déterminées par immunohistochimie et western blot.

Résultats

pseudolaric acide B supprimé de manière significative la croissance tumorale induite par SGC7901 cellules et cellules SGC7901 /ADR. La combinaison de l'acide B et la pseudolaric traditionnelle adriamycine médicament de chimiothérapie présentait des effets inhibiteurs plus puissants sur la croissance du cancer gastrique in vivo que le traitement avec de l'acide B ou adriamycine pseudolaric seul. les niveaux de la cyclo-oxygénase-2 expression de la protéine, la protéine kinaseC-α et P-glycoprotéine ont été inhibées par l'acide B pseudolaric seul ou en combinaison avec l'adriamycine dans des xénogreffes de cellules SGC7901 /ADR.

Conclusion

l'acide pseudolaric B a un effet inhibiteur significatif et un effet inhibiteur additif en combinaison avec l'adriamycine sur la croissance du cancer gastrique in vivo, ce qui inverse la résistance à des médicaments multiples d'un néoplasme gastrique pour les médicaments de chimiothérapie par régulation négative de la Cox-2 /PKC-α /P- gp /voie de signalisation MDR1

Citation:. Sun Q, Li Y (2014) L'effet inhibiteur de pseudolaric acide B sur le cancer gastrique et la résistance polychimiothérapie via Cox-2 /PKC-α /P-gp Pathway. PLoS ONE 9 (9): e107830. doi: 10.1371 /journal.pone.0107830

Editeur: Soumitro Pal, Hospital de Boston &pour enfants; Harvard Medical School, États-Unis d'Amérique

Reçu: 15 mai 2014; Accepté 20 Août 2014; Publié le 24 Septembre, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Sun, Li. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données:. La auteurs confirment que toutes les données sous-jacentes les résultats sont entièrement disponibles sans restriction. Toutes les données pertinentes sont dans le papier

Financement:. Ce travail a été soutenu par la Fondation Science Program de Shenyang municipal des sciences et de la technologie (1091136-9-02). Le bailleur de fonds n'a joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique est l'un des cancers les plus fréquents dans le monde [1], et la chimiothérapie est une stratégie importante contre le cancer gastrique [2]. Étant donné que de nombreux médicaments chimiothérapeutiques à des classes différentes sont utilisées pour traiter le cancer gastrique, la sensibilité des médicaments anti-cancéreux à un cancer gastrique diminue progressivement, et une résistance à plusieurs médicaments différents avec différentes structures et mécanismes d'action différents produits chimiques peuvent se produire. Ce type de résistance est appelée multirésistance (MDR) et diminue de manière significative l'efficacité de la thérapie sur le cancer gastrique. MDR est en train de devenir un problème majeur pour le traitement du cancer avec succès [3]. Il a été découvert que la principale raison de MDR dans le cancer est la surexpression de la glycoprotéine P (P-gp), un produit du gène MDR1 humain. P-gp est une pompe à efflux dépendant de l'ATP qui peut diminuer l'accumulation du médicament dans les cellules cancéreuses. Il est proposé que la P-gp, un biomarqueur bien acceptée du MDR, devrait également être considéré comme une cible moléculaire dans le cancer multirésistante [4]. Des études récentes ont démontré que dans des cellules cancéreuses de MDR, les niveaux d'expression de la cyclo-oxygénase-2 (COX-2) et une isoforme de la protéine kinaseC (PKC-α) sont tous deux régulés à la hausse, et leur inhibition peut inverser néoplasique MDR [5] - [10].

acide pseudolaric B (PAB, Figure 1), un acide diterpène isolé à partir de la racine et le tronc écorce de l'arbre Pseudolarix kaempferi
Gordon (Pinaceae), est utilisé dans la médecine chinoise traditionnelle pour son large spectre de caractéristiques biologiques, tels que des effets anti-fongiques et des effets anti-fertilité. En outre, les effets anti-angiogéniques ont également été progressivement reconnue au cours des dernières années [11], [12]. Des études récentes ont démontré que PAB induit une inhibition de la croissance, un arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. De plus, PAB renverse la multirésistance des cellules cancéreuses [13], [14]. PAB supprime la croissance de la lignée de cellules AGS gastrique néoplasique et induit l'apoptose son [15]. Nos recherches antérieures ont démontré que PAB a également un effet inhibiteur important sur les cellules SGC7901 du cancer gastrique humain in vitro [16]. Cependant, des études in vitro de l'effet anticancéreux de PAB sont rares, et ni l'efficacité in vivo de ce composé à base de plantes roman contre les tumeurs, ni son mécanisme moléculaire précis contre MDR a été entièrement étudiées.

Le but de la présente étude est d'évaluer l'effet anti-néoplasique de PAB in vivo, y compris le renversement du MDR, en utilisant un modèle de xénogreffe chez la souris nude et déterminer si le mécanisme moléculaire sous-jacent de PAB est lié à l'inhibition de la MDR via le Cox-2 /PKC-α /P-gp voie.

Matériel et méthodes

Matériaux

RPMI-1640 du milieu de culture et de sérum de veau fœtal (FBS) pour la culture cellulaire ont été achetés chez Gibco BRL, Gaithersburg , MD, USA. Rabbit-Cox-2 anticorps monoclonal anti, souris anti-PKC-a et de la souris des anticorps monoclonaux anti-P-gp ont été achetés à Santa Cruz Corporation, CA, USA. Les anticorps secondaires contre les anticorps de lapin et de souris, streptavidine-peroxydase (SP) kits et 3,3'-diaminobenzidine (DAB) ont été obtenus à partir de Beijing Zhongshan biotechnologie, Chine. kits de dosage de protéine BCA et des kits de préparation gel SDS-PAGE ont été obtenus à partir de l'Institut Beyotime de la biotechnologie, Shanghai, Chine. PAB a été acheté auprès de l'Institut du Liaoning pour le contrôle des drogues, la Chine n ° 201003 (la pureté: > 98%). Adriamycine (ADR) a été obtenu à partir de Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd, la Chine n ° 120906. Tween80 et de polyéthylène glycol ont été achetés chez Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA.

Culture cellulaire

cellules d'adénocarcinome SGC7901 gastriques humaines ont été cultivées dans le laboratoire central de Shengjing hôpital affilié à l'université médicale de la Chine [16], et SGC7901 cellules adriamycine résistant /ADR étaient doués de l'Institut des maladies digestives en Xijing hôpital affilié à quatrième université médicale militaire [17]. les cellules d'adénocarcinome SGC7901 gastriques humaines et SGC7901 cellules résistante à l'adriamycine /ADR ont été cultivées dans un milieu RPMI-1640 complété avec 10% de FBS et des antibiotiques (100 U /ml de pénicilline et de la streptomycine) avec 5% de CO _{2 dans un incubateur humidifié à 37 ° C ° C. ADR (1 pg /ml) a été ajouté au /ADR milieu de culture de cellules SGC7901 pour aider à maintenir leur MDR. Les cellules en phase de croissance logarithmique ont été centrifugés et on les dilue avec un milieu RPMI-1640 pour préparer des suspensions monocellulaires à une concentration de 2,5 x 10 ^{6 /ml pour l'ensemencement.}}

Création d'un modèle de xénogreffe de souris nude

in vivo l'effet antitumoral du PAB a été examiné dans un modèle de xénogreffe murin. Pour le modèle, 4-6 semaines vieux mâle et femelle immunodéficientes BALB /c (nu /nu) souris, pesant 18-22 g, ont été achetés auprès de Beijing HFK Bioscience Co., Ltd (Chine) et conservés dans des établissements agréés dans des conditions standard pour les rongeurs (grade SPF) dans le département de l'expérimentation animale. Cinquante souris ont été choisis et répartis au hasard en deux groupes (25 par groupe). Un total de 25 souris ont reçu une injection sous-cutanée de 2,5 x 10 ^{6 /ml SGC7901 cellules dans 0,2 ml de milieu RPMI-1640 dans la axillaires gauche, et les 25 autres souris ont été injectées avec des cellules SGC7901 /ADR dans la région axillaire droite dans des conditions exemptes de germes.}

les groupes expérimentaux et des médicaments

Sept jours après l'implantation de cellules, les tumeurs sont devenues palpables (environ 3 mm x 3 mm de diamètre), puis, les deux groupes injectés avec deux types de cellules différentes ont été répartis au hasard en cinq sous-groupes (5 souris par groupe): une solution saline normale (NS) groupe témoin, groupe de contrôle de TWEEN, groupe ADR, groupe PAB, et PAB + groupe ADR. Pour les groupes de PAB, PAB (25 mg /kg /j 0,1 ml) dissous dans une solution aqueuse à 6% de polyéthylène glycol, de 3% d'éthanol et 1% de Tween-80 a été administré par voie intrapéritonéale (i.p.) par jour pendant 20 jours [13]. Un volume identique de solution aqueuse ou NS a été injectée dans le groupe de groupe de contrôle de TWEEN ou de contrôle NS, respectivement. Pour le groupe ADR, ADR (1,25 mg /kg dans 0,1 ml) i.p. dilué dans NS a été administré par jour pendant 20 jours [18]. souris porteuses de tumeurs ont été administrés à la fois PAB (25 mg /kg /j) et ADR (1,25 mg /kg /jour) i.p. pour la même période dans le groupe PAB + ADR. Après traitement, les souris de chaque groupe ont été sacrifiées et des échantillons de tumeur des régions axillaires bilatérales ont été réséquées et pesées pour immunohistochimie et analyse western blot. Cette étude a été réalisée en stricte conformité avec les recommandations du Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health. Le protocole a été approuvé par le Comité sur l'éthique de l'expérimentation animale de l'Shengjing hôpital affilié à l'Université médicale de Chine (Numéro de permis: 2013PS144K). Les souris ont été sacrifiées sous 10% d'hydrate de chloral l'anesthésie, et tous les efforts ont été faits pour minimiser la souffrance.

Mesure et calcul du volume de la tumeur et du poids

Le poids corporel a été surveillée tous les jours, et deux diamètres perpendiculaires (longueur et largeur en millimètres) des tumeurs ont été mesurées tous les deux jours avec des pieds à coulisse pendant toute la période de traitement. Les volumes des tumeurs ont été estimés à partir de mesures bidimensionnelles et calculées comme suit: Volume de la tumeur (mm ^{3) = longueur (mm) x largeur 2 (mm) /2. Le volume tumoral relatif (RTV) a été calculé comme suit: RTV = (moyenne du volume tumoral au cours du traitement) /(volume tumoral moyen au début du traitement). Les effets antitumoraux de PAB et /ou ADR ont été estimées avec le taux d'inhibition moyenne (IR) de la croissance tumorale en utilisant l'équation suivante: IR (%) = [(1-moyenne RTV du groupe traité par le médicament /signifie RTV du groupe témoin NS ) × 100] [19]. Le poids corporel relatif des souris a été calculée en utilisant le W _{t /W 0 index, où W t est le poids du corps sur le jour de la mesure, et W 0 est le poids corporel à le premier jour de traitement. Le changement de poids corporel aux jours 1 et 20, ce qui représente le début et la fin de l'expérience, respectivement, a été utilisé pour évaluer et analyser les effets des drogues sur le poids corporel [20].}}

La coloration immunohistochimique pour l'expression de Cox-2, PKC-a et P-gp

échantillons de tumeurs ont été fixées avec du paraformaldehyde, traitées en routine par l'incorporation dans la paraffine, puis découpés en sections de 4 um. À la suite de l'hématoxyline et de l'éosine (HE), la coloration, les cellules des xénogreffes de cancer de l'estomac ont été observées sous un microscope optique. Les niveaux d'expression de la COX-2, PKC-α et P-gp dans des cellules tumorales ont été récoltées déterminées selon la méthode SP. En bref, après avoir été déparaffinées et réhydratées, les lames ont été incubées dans 0,3% de H _{2 O 2 solution et on sèche dans un four micro-ondes dans un tampon d'acide citrique pendant 15 minutes pour récupérer des antigènes. Les coupes ont été bloquées avec du sérum de chèvre normal pendant 30 minutes à 37 ° C et on a sondé avec un anticorps monoclonal de lapin à la COX-2 et des anticorps monoclonaux de souris pour PKC-α et P-gp à 4 ° C pendant une nuit (tous les anticorps ont été dilués à 1 :300). Biotinylé anti-IgG de lapin et anti-IgG de rat ont été ajoutés et mis à incuber à 37 ° C pendant 30 min avant d'ajouter de l'enzyme conjuguée à HRP-streptavidine. En outre, 3, 3'-diaminobenzidine (DAB) a été utilisée comme chromogène. Diapositives ont été contre l'hématoxyline, déshydratées dans l'alcool, et monté sur le baume neutre. Les contrôles ont été préparés en utilisant des anticorps secondaires seulement. Cinq champs de chaque section de chaque souris dans chaque groupe ont été sélectionnés pour la collecte d'images. Les résultats ont été analysés et comparés statistiquement en utilisant le logiciel NIS-Elements Br 3.0, et la densité optique moyenne a été obtenue pour quantifier les niveaux de Cox-2, PKC-α et P-gp.}

Western blot de Cox expression -2, PKC-α et P-gp dans les xénogreffes de souris nues

Un total de 100 mg de tissus tumoraux congelés frais provenant d'au moins trois souris de chaque groupe ont été pesés et complété par dosage d'immunoprécipitation radio (RIPA) un tampon de lyse [contenant 100 ug /ml de fluorure de phénylméthanesulfonyle (PMSF)]. Après avoir pulvérisé à l'aide de ciseaux, les extraits ont été homogénéisés au moyen d'ultrasons. Après centrifugation à 14 000 tpm à 4 ° C pendant 30 minutes, un échantillon de liquide surnageant a été congelé à -80 ° C pendant un transfert de Western. La concentration en protéines des extraits a été déterminée en utilisant un acide bicinchoninique (BCA), le kit de dosage de protéine. Un total de 100 ug de protéine par souris dans des conditions dénaturantes (100 ° C, 5 min) a été soumis à une électrophorèse à l'aide de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide L'électrophorèse sur gel (SDS-PAGE) sur un gel de séparation à 8% et électrotransféré sur des membranes de PVDF en utilisant un système de transfert par voie humide à 100 V (Cox-2, PKC-α, β-actine pendant 100 minutes, et la P-gp pendant 3 h). Après le blocage avec 5% de lait écrémé sec dans 1 x TBST pendant 90 minutes (sérum physiologique contenant 0,1% de Tween 20 tamponnée au Tris), les membranes ont ensuite été incubées avec l'anticorps primaire [anticorps monoclonal de lapin à la Cox-2 (1:400) ou de la souris des anticorps monoclonaux contre PKC-α (1:200) et P-gp (1:200), avec β-actine comme contrôle interne pour les protéines de chargement] nuit à 4 ° C. La liaison de l'anticorps a été visualisée en utilisant un anticorps secondaire de chèvre couplé à la peroxydase anti-lapin (1:2000) et un anticorps anti-souris de chèvre (1:2000) pendant 1,5 h à température ambiante. Ensuite, les membranes ont été visualisées par chimioluminescence amplifiée (ECL) réactif. Les résultats ont été analysés en utilisant le logiciel Image J.

L'analyse statistique

Toutes les données sont présentées sous forme de valeurs moyennes ± écart-type, et les comparaisons multiples entre deux quelconques des groupes traités ont été évalués par de un ANOVA, en utilisant des méthodes de SNK et LSD avec le logiciel SPSS 17.0. La relation entre le changement du poids corporel et le volume tumoral ont été analysées par une analyse de corrélation de Pearson. Les valeurs de p inférieure à 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.

Effet inhibiteur de

Résultats de la PAB sur la croissance du cancer gastrique
humain

Tumeurs dans tous les groupes traités formés facilement après l'implantation de suspensions monocellulaires et le taux de formation est de 100%. Lorsque les xénogreffes sont devenues évidentes, il n'y avait pas de différences significatives dans le volume moyen des xénogreffes entre les différents groupes (tableau 1) et les volumes tumoraux ont été surveillés à divers points de temps dans tous les groupes. Les courbes de la croissance tumorale des deux lignées cellulaires ont été représentés graphiquement (Figure 2A, 2B). Comme on le voit dans le tableau 1, pour les groupes traités à des cellules SGC7901, aucune différence significative n'a été observée entre le groupe PAB et le groupe ADR dans les volumes relatifs moyens des xénogreffes (p > 0,05) et l'IR est de 56,4% et 59,0%, respectivement. L'addition de l'ADR PAB a donné lieu à une activité antitumorale supérieure à celle de PAB seul ou ADR seul (p < 0,05) avec un RI de 88,1%. L'effet inhibiteur du groupe PAB était plus forte comparée à celle du groupe ADR sur les xénogreffes de cellules SGC7901 /ADR ainsi que les valeurs IR étaient de 64,1% et 21,9%, respectivement (p < 0,05). l'inhibition de la croissance tumorale était plus évidente chez les souris traitées avec PAB combinée avec l'ADR, avec un RI de 85,8%. Les conclusions du poids de la tumeur dans les différents groupes en outre pris en charge nos résultats en ce qui concerne le volume de xénogreffes de souris. La figure 2C et 2D montrent les changements du poids corporel des souris par rapport au cours des dix groupes. Le poids corporel était similaire entre les groupes témoins et les groupes traités PAB. Cependant, le poids corporel a diminué dans les groupes combinés traités et les groupes ADR et la diminution des groupes ADR était plus évidente (p < 0,05). En outre, la figure 3 présente une comparaison directe des dimensions des tumeurs des cellules et des cellules SGC7901 SGC7901 /ADR dans les différents groupes. La relation entre le changement de poids corporel et le volume de la tumeur ne sont pas significatives (p > 0,05). Les doses testées ont été bien tolérées par les souris, et aucune létalité animale n'a été observé au cours de l'expérience.

La coloration immunohistochimique pour l'expression de Cox-2, PKC-α et P-gp

Tous tumeurs dans chaque groupe, par l'intermédiaire d'une coloration immunohistochimique, affichent une expression positive des protéines Cox-2, PKC-a et P-gp. Cox-2 et l'expression de PKC-α a été défini comme positif si la région colorée de cellules tumorales était dans le cytoplasme, et la P-gp coloration a été considéré comme positif si une coloration a été observée dans la membrane et le cytoplasme. Les protéines ont été colorées jaune ou brune sous observation au microscope optique (figure 4). Pour la lignée cellulaire SGC7901 /ADR, la coloration de ces protéines dans les groupes de contrôle a été plus forte que dans les autres groupes (p < 0,05). PAB traitement a réduit la coloration intracellulaire de la Cox-2, PKC-α et de la P-gp par rapport au groupe traité par l'ADR (p < 0,05). PAB et après le traitement ADR, la coloration intracellulaire de ces protéines est moins dense et plus faible par rapport à celle des autres groupes. Les xénogreffes des deux groupes témoins NS, la coloration de la P-gp dans les cellules SGC7901 était significativement inférieure à celle du SGC7901 /ADR cellules (p < 0,05). L'analyse de l'intensité de la coloration de la Cox-2, PKC-α et d'expression P-gp a révélé les mêmes résultats (tableau 2).

Effet de PAB sur Cox-2, PKC-α et P-gp expression chez les souris xénogreffes

Pour élucider le mécanisme moléculaire impliqué dans les effets d'inversion de PAB sur le SGC7901 /xénogreffes ADR in vivo, l'expression de Cox-2, PKC-α et P-gp dans les tumeurs de différents les groupes réactifs traités ont été déterminées par analyse par transfert de western. Comme le montre la Figure 5, pour le groupe de contrôle NS, les niveaux d'expression de Cox-2, PKC-α et P-gp dans les xénogreffes de cellules SGC7901 ont été inférieurs par rapport à ceux dans les /des tumeurs des cellules ADR de SGC7901 (p < 0,05) . Pour les tumeurs de la SGC7901 /cellules ADR, les niveaux des trois protéines d'intérêt dans le groupe de groupe de contrôle et le contrôle de TWEEN NS expression ont été significativement plus élevés par rapport aux autres groupes (p < 0,05), et il n'y avait pas de différence significative entre le deux groupes (p > 0,05). Les niveaux de la Cox-2, PKC-α et P-gp dans le groupe traité par PAB expression ont été significativement plus faibles comparés à ceux du groupe traité par l'ADR (p < 0,05). L'expression de la β-actine a été utilisée comme un contrôle interne, et les niveaux de Cox-2, PKC-α et P-gp expression ont diminué séquentiellement parmi les groupes témoins, le groupe ADR, groupe PAB et PAB + ADR groupe (p <0,05)

Discussion

PAB est l'un des principaux composants biologiquement actifs de l'écorce de la racine de la plante médicinale Pseudolarix kaempferi
et affiche cytotoxicité considérables vers plusieurs cellules cancéreuses. lignes. Des études in vitro ont également démontré qu'il renverse le MDR du carcinome en inhibant la surexpression de la P-gp sans effets secondaires évidents [13], [15], [20], [21]. Il a également été démontré que les PAB a un effet anti-tumoral chez les souris modèles de xénogreffe de cancer humain du colon et le carcinome hépatocellulaire [13], [20], et sans effets secondaires connus de PAB sur les animaux ont été signalés. Notre étude a démontré que la précédente PAB a un puissant effet inhibiteur sur la lignée cellulaire de SGC7901 in vitro et induit l'apoptose des cellules cancéreuses gastriques par la voie des caspases [16]. Notre présente étude in vivo fournit une preuve supplémentaire que PAB est protecteur contre les tumeurs gastriques dans des modèles de xénogreffes de souris à l'aide de SGC7901 et les cellules SGC7901 /ADR. Nos expériences préliminaires ont montré que les PAB à 25 mg /kg, non seulement inhibe la croissance du cancer gastrique, mais est également bien toléré par les souris. De plus, nous avons inclus le groupe témoin interpolé à exclure l'influence de la solution aqueuse qui a été utilisé pour dissoudre PAB sur les tumeurs [13]. Pour les cellules sensibles, les effets anticancéreux de PAB produit pas de différences significatives par rapport à l'ADR, un médicament de chimiothérapie traditionnelle. En outre, PAB est un composé biologiquement actif qui a exercé son effet renversant contre SGC7901 /ADR tumeurs de lignée cellulaire en ciblant la voie de signalisation activée par P-gp surexpression in vivo.

P-gp est une membrane de 170 kDa protéine qui agit en tant que pompe d'écoulement du médicament, ce qui entraîne un défaut continu dans l'accumulation intracellulaire de médicaments [22]. Le phénotype de résistance multidrogues est la principale cause de l'échec de la chimiothérapie des tumeurs et est principalement le produit de la surexpression de P-gp dans la majorité des cancers, y compris les tumeurs gastriques [23]. De plus, l'inhibition de cette voie pourrait être un moyen d'inverser la MDR des cellules de cancer gastrique [3], [24].

Cox-2, une enzyme inductible qui catalyse la conversion de l'acide arachidonique en prostanoïdes ( PG) et participe à des événements physiologiques et pathologiques multiples, est induite par divers stimuli inflammatoires et mitogènes [25]. Une forte association entre MDR et la surexpression de Cox-2 a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs. Ces résultats précédents suggèrent que la Cox-2 modulant l'expression et l'activité de P-gp et est impliqué dans le développement du phénotype MDR [26] - [28]. En outre, les preuves accumulées ont démontré que les inhibiteurs de la COX-2 sont capables de sensibiliser les cellules cancéreuses aux effets anti-prolifératifs des médicaments chimiothérapeutiques, en modifiant l'activité de la protéine ATP-binding cassette. Inhibiteurs COX-2 peut même inverser le MDR en bloquant l'augmentation de la COX-2 induite par l'expression et l'activité dans le cancer de la MDR1, à la fois in vitro et in vivo [6], [7], [29]. Par conséquent, nous émettons l'hypothèse que Cox-2 peut réguler l'expression de la P-gp dans les tissus tumoraux et que l'inhibition de cette voie est d'une grande importance pour inverser la résistance du cancer aux médicaments chimiothérapeutiques.

Nous avons constaté que pour la SGC7901 /tumeurs des cellules ADR, les niveaux d'expression de Cox-2 et P-gp dans le groupe témoin NS étaient évidemment plus élevés que ceux pour les xénogreffes de cellules SGC7901. Après l'injection de PAB, soit une diminution évidente de ces niveaux d'expression a été observée. Cependant, l'ADR a été moins efficace pour la suppression des niveaux de l'SGC7901 /xénogreffes de cellules ADR, et lorsqu'il est combiné avec PAB, un niveau inférieur de protéines a été observé Cox-2 et P-gp expression. Ainsi, nous avons proposé que la modulation de la Cox-2 expression par PAB pourrait diminuer l'expression et l'activité de la P-gp, inhiber la croissance et induire l'apoptose, en plus d'agir en collaboration avec l'ADR dans la suppression des tumeurs résistantes aux médicaments et même le renversement de le phénotype MDR d'un cancer gastrique.

PKC est une sérine /thréonine kinase impliquée dans la transduction du signal nécessaire pour la prolifération et la différenciation cellulaire [30]. Parmi les isoformes de la PKC, la surexpression et l'activité accrue de la PKC-α sont les plus étroitement associés à la régulation du phénotype MDR dans le cancer gastrique humain [31]. Les résultats présentés ici appuient l'idée que la PKC-α phosphoryle P-gp, modulant la fonction d'efflux P-gp, et conduit finalement à la résistance aux médicaments [32]. L'inhibition de la PKC-α avec un inhibiteur spécifique ou d'abattre PKC-α avec l'ARNsi conduit à l'expression de MDR1 réduite, l'augmentation de la toxicité des médicaments anticancéreux et inversé MDR [8] - [10]. Par conséquent, nous supposons que le système de transduction du signal de la PKC-α pourrait jouer un rôle dans la modulation de l'expression de MDR1 dans le cancer gastrique.

Dans des circonstances normales, la PKC est inactif dans les cellules, et son activation en amont est liée à l'activation de PGE. Cox-2 est couplée à la prostaglandine associée à la membrane E2 synthase (mPGES-1), et la synthèse de la PGE médiée par ces protéines augmente et active la voie de PKC-α aval [33]. Il a été démontré que la COX-2 sélectifs d'inhibition par des inhibiteurs ou ARNi spécifiques a un effet thérapeutique sur l'inhibition de l'expression de PKC-α et de la P-gp, tout, en même temps, en inversant MDR [26], [34]. Une étude a démontré que la PGE2 médie l'induction de l'expression de MDR1 via la voie de PKC [35]. Les résultats de nos expériences ont démontré que PAB peut inhiber l'expression de PKC-α de xénogreffes de la lignée cellulaire SGC7901 /ADR, dont l'effet était plus forte que celle de l'ADR. En outre, lorsque PAB a été combinée avec l'ADR, l'inhibition de l'expression de l'efficacité PKC-α était encore plus forte. La tendance de la variation de l'expression PKC-α est compatible avec celle de Cox-2 et P-gp dans divers groupes de SGC7901 /ADR tumeurs résistantes aux médicaments réactifs traités. Il a été démontré que les PAB induit un arrêt croissance et l'apoptose par inhibition de la voie de la COX-2 dans les cellules cancéreuses [20], [21]. Nous supposons que PAB inhibe l'expression de la COX-2 dans SGC7901 /ADR xénogreffes de cellules et que le couplage entre la Cox-2 et mPGES-1 réduit la synthèse de la PGE, ce qui réduit l'activation de la PKC-α aval. Que la phosphorylation de P-gp est inhibée, plusieurs médicaments accumulent dans les cellules cancéreuses, la toxicité de l'ADR est améliorée et le MDR est inversé. Ces résultats permettent de mieux comprendre une nouvelle stratégie impliquant l'utilisation de PAB pour inhiber MDR des cancers gastriques humaines.

L'un des objectifs de notre expérience est l'effet inhibiteur de l'acide pseudolaric B sur des xénogreffes sous-cutanées de l'adénocarcinome gastrique humaine et la comparaison des effets anti-tumoraux de drogues parmi les différents groupes de traitement. En outre, la caractéristique de SGC7901 et les cellules SGC7901 /ADR sont différents. Grâce à nos deux pré-expérience et une expérience formelle, nous avons tous trouvé le volume de la tumeur des cellules SGC7901 /ADR n'a pas été supérieure à celle des cellules SGC7901. Nous émettons l'hypothèse volume de la tumeur peut être associée à la numération des cellules, le temps de croissance, caractéristique des cellules et d'autres sortes de facteurs. Par conséquent, on n'a pas comparé le volume tumoral entre les xénogreffes de cellules SGC7901 et les xénogreffes de cellules SGC7901 /ADR. En outre, nous spéculer que le changement de poids corporel des souris pourrait être principalement liée à la toxicité des médicaments, et avoir des relations non significatif sur le volume de la tumeur dans notre expérience
.

L'autre objectif de notre expérience est le sous-jacent mécanismes moléculaires impliqués dans la résistance à la polychimiothérapie. Ainsi, nous avons conçu uniquement groupe de xénogreffes de cellules SGC7901 de contrôle NS de contraste et de confirmer les expressions des trois types de protéines à partir de xénogreffes de cellules SGC7901 /ADR sont en effet nettement supérieur à celui de xénogreffes de cellules SGC7901. En outre, étant donné que la réponse des cellules SGC7901 aux médicaments anticancéreux est un peu plus sensible que les cellules SGC7901 /ADR dans les deux expériences fondamentales et cliniques, la façon d'améliorer la sensibilité des cellules de résistance à la multirésistance aux médicaments anticancéreux est notre axe de recherche. Par conséquent, on n'a pas comparé les expressions de la Cox-2, PKC-α et P-gp pour les tumeurs de SGC7901 et les différents traitements de ce groupe, sauf pour NS groupe témoin par western blot et la coloration immunohistochimique.

Notre étude a découvert que la base de plantes diterpénoïde PAB non seulement supprimé de manière significative les cellules SGC7901 du cancer gastrique in vivo, mais aussi affiché des effets inhibiteurs évidents vers les tumeurs de SGC7901 cellules résistantes aux médicaments /ADR. En outre, la combinaison de l'ADR PAB pourrait inhiber la croissance du cancer gastrique et le développement de xénogreffes chez des souris nudes. Il est à noter que, comme un type de médecine traditionnelle chinoise, l'effet de PAB sur le poids corporel des souris nude était très inférieur à celui de l'ADR dans notre expérience, ce qui est un avantage apparent qui fait PAB Un médicament plus sûr et tolérable pour le traitement du cancer. PAB peut non seulement être un nouveau médicament efficace pour l'inhibition de la croissance du cancer gastrique et inversant sa MDR, mais il peut aussi être utilisé comme un excellent adjuvant avec des agents chimiothérapeutiques traditionnels et un traitement chirurgical suivants la poursuite du développement et de la recherche.

dans la présente étude, nous avons examiné, pour la première fois, l'effet inhibiteur du PAB contre le cancer gastrique humaine et son effet d'inversion sur MDR in vivo par l'intermédiaire d'un modèle de souris nude de xénogreffe. Nous avons déterminé que son inhibition de la TB a été médiée par la voie /P-gp Cox-2 /PKC-α, qui fournit une base théorique cruciale concernant les mécanismes moléculaires de la thérapie du cancer gastrique. Cependant, on n'a pas étudié le mécanisme MDR en ce qui concerne l'expression des gènes et de la réglementation. Comme les mécanismes moléculaires de l'inversion MDR sont extraordinairement types complexes et multiples de protéines, les gènes et les facteurs peuvent être impliqués, la boucle que nous avons proposé est peut-être seulement une partie du mécanisme d'inversion de MDR. Plus des mécanismes de régulation de béton en profondeur et doivent être élucidés dans les études futures.

En conclusion, PAB a un effet inhibiteur significatif sur le cancer gastrique in vivo et peut inverser la MDR de cancer gastrique pour les médicaments de chimiothérapie. Le mécanisme de la MDR est médié au moins partiellement à travers la voie /P-gp Cox-2 /PKC-α. Notre étude fournit de larges perspectives pour les futures enquêtes de PAB dans le traitement du cancer gastrique.

Informations complémentaires
Liste S1.
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doi:. 10.1371 /journal.pone.0107830.s001
(DOC)

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