PLOS ONE: CD147 Expression dans Human Gastric cancer est associé à la tumeur Récurrence et pronostic

Résumé

CD147 est corrélée avec l'agressivité de la tumeur dans diverses tumeurs malignes humaines. Ici, nous avons étudié l'expression des protéines CD147 chez 223 patients atteints de cancer gastrique par immunohistochimie et analysé son association avec la survie sans maladie et dans l'ensemble. CD147 a été augmenté dans le cancer gastrique par rapport aux tissus normaux. En outre, l'expression CD147 a été associée à une invasion de cancer gastrique, la métastase et le stade TNM, alors qu'il n'a pas été liée à l'âge, le sexe, le statut de différenciation, site de la tumeur ou le classement Lauren. Kaplan-Meier analyse a confirmé que CD147 a été associée à sans maladie et la survie globale chez les patients atteints de cancer gastrique; à savoir, les patients avec une coloration CD147 positives ont tendance à avoir la survie et dans l'ensemble sans maladie pire. En outre, les risques proportionnels de Cox analyse a démontré que CD147 est un marqueur de la survie sans maladie et globale indépendante pour les patients atteints de cancer gastrique. Ces résultats confirment l'association de CD147 avec invasion de cancer de l'estomac et des métastases et prouvent que CD147 pourrait être un indicateur de récurrence de la tumeur et le pronostic dans le cancer gastrique

Citation:. Chu D, Zhu S, Li J, ji G, Wang W, Wu G, et al. (2014) CD147 Expression dans Human Gastric cancer est associé à la tumeur Récurrence et pronostic. PLoS ONE 9 (6): e101027. doi: 10.1371 /journal.pone.0101027

Editeur: Irina V. Lebedeva, Université de Columbia, États-Unis d'Amérique

Reçu 30 Août 2013; Accepté 2 Juin 2014; Paru le 30 Juin, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Chu et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenue par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n ° 81201927, 81272204 et 31270812) et la Chine science Foundation postdoctorale (n ° 2012M521862). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique est l'une des tumeurs malignes humaines les plus courantes dans le monde [1], [2]. Les taux de cancer de l'estomac sont les plus élevés dans les pays d'Asie de l'Est. Près de 42% des hommes et 19% des patients atteints de cancer gastrique femmes partout dans le monde se trouvent en Chine, où le cancer gastrique constitue la troisième cause de décès liés au cancer [3], [4]. La résection chirurgicale est encore le principal traitement pour le cancer gastrique. Toutefois, environ 60% des patients atteints d'un cancer gastrique ont localement avancé ou métastatique, une maladie au moment de l'intervention chirurgicale, ce qui entraîne une efficacité thérapeutique relativement faible par résection chirurgicale. La dégradation de la matrice extracellulaire (ECM) est critique pour les cellules cancéreuses gastriques envahissent les tissus environnants. Des études récentes portant sur les mécanismes d'invasion gastrique sous-jacente suggèrent que les métalloprotéinases matricielles (MMP) jouent un rôle essentiel dans ce processus [5].

extracellulaires matrice métalloprotéinase inducteurs (EMMPRIN), également connu sous le CD147, est un 57- kilodaltons (kDa) glycoprotéine transmembranaire qui appartient à l'immunoglobuline (IgG) superfamille [6]. CD147 se compose de 2 domaines extracellulaires Ig, un domaine transmembranaire unique requis pour l'activité de liaison du récepteur de compteur qui est impliqué dans la matrice de métalloprotéinases (MMP) par induction et un court domaine cytoplasmique qui interagit avec Cav-1 [7], [8]. CD147 est abondamment exprimé sur la surface extérieure de nombreux types de tissu tumoral par rapport au tissu normal, et il peut faciliter les métastases tumorales par modulation de processus de substrat et de l'adhésion cellulaire [9] - [11]. CD147 peut stimuler les cellules normales interstitielles adjacentes à produire des MMPs, un groupe de protéines dépendantes du zinc qui peut dégrader la matrice extracellulaire (ECM) [12], [13]. La dégradation de l'ECM à la fois au site de la tumeur primaire et au niveau du site de colonisation secondaire est critique pour l'invasion et les métastases tumorales [12]. Récemment, le rôle de CD147 dans l'invasivité de la tumeur a été confirmé dans plusieurs malignités humaines, notamment le cancer gastrique [14] - [16]. L'inhibition de l'expression de CD147 par interférence ARN réduit l'invasion tumorale et la tumorigénicité de cellules, ainsi qu'une augmentation de chimiosensibilité au paclitaxel [17]. Pour certains types de tumeurs, tels que l'adénocarcinome pulmonaire, le séminome, le carcinome du canal salivaire, le cancer de la prostate, le cancer colorectal, le cancer de la vessie et le cancer du sein, l'expression EMMPRIN a été associée à un pronostic du patient [18] - [22]. Dans le cancer gastrique, augmentation de l'expression de CD147 est liée à la survie globale pauvres [23]. Cependant, l'association de CD147 avec récidive du cancer de l'estomac n'a pas été étudiée.

Dans cette étude, nous avons analysé l'expression de CD147 dans des échantillons cliniques gastriques et son association avec la survie sans maladie et la survie globale chez les patients suivant la chirurgie.

spécimens de cancer gastrique cliniques de Matériels et méthodes

Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la quatrième université médicale militaire. Tous les patients ou les membres de la famille impliqués ont donné leur consentement éclairé écrit. En bref, les échantillons cliniques frais gastriques de cancer et les tissus normaux adjacents ont été recueillies auprès de 223 patients ayant subi une chirurgie entre Janvier 2006 et Juin 2007 à l'hôpital Xijing de maladies digestives. Aucun de ces patients ont reçu une chimiothérapie avant la chirurgie. En outre, des échantillons de tissus normaux ont été prélevés sur 21 patients ayant subi une chirurgie pour des raisons autres que la malignité, représentant des échantillons témoins normaux. Le histomorphologie de tous les échantillons de tissus a été confirmé par le Département de pathologie, Hôpital Xijing. Les échantillons ont été fixés à 10% de formaldéhyde et noyées dans de la paraffine pour la coupe histologique. information clinique des patients, tels que l'âge, le sexe, le statut de différenciation et le stade TNM, a été recueilli et stocké dans une base de données. Les données de suivi pour l'ensemble des participants a été mis à jour tous les 3 mois au moyen d'entrevues téléphoniques et des questionnaires. La survie sans maladie est définie comme le temps écoulé entre la chirurgie et la première occurrence de l'un des événements suivants: la réapparition du cancer de l'estomac; cancer gastrique de métastases à distance; développement de tumeurs malignes secondaires non-gastrique, à l'exclusion des carcinomes des cellules basales de la peau et le carcinome in situ du col de l'utérus; ou de décès de toute cause, sans la documentation d'un événement lié au cancer. Le diagnostic de récidive et de métastases à distance a été basée sur des méthodes d'imagerie, y compris l'endoscopie, l'échographie, la tomodensitométrie, l'imagerie par résonance magnétique et la tomographie par émission de position, et lorsque cela est possible, l'analyse cytologique ou une biopsie. La survie globale est définie comme le temps écoulé entre la chirurgie et la mort de toute cause des patients atteints de cancer de l'estomac.

dosages immunohistochimiques de

échantillons de tissus frais ont été déparaffinées dans le xylène et déshydraté par une série d'alcool graduée. une activité de peroxydase endogène a été bloquée avec 0,5% de H _{2 O 2 dans du methanol pendant 10 minutes. Pour la récupération des antigènes, les coupes ont été en au micro-ondes du citrate de sodium 0,01 M (pH 6,0). La liaison non spécifique a été bloquée par incubation des sections avec 10% de sérum de chèvre normal dans du PBS pendant 1 h à température ambiante. Sans lavage, les coupes ont été incubées avec l'anticorps de souris anti-CD147 humain monoclonal (1:200), qui a été validée par des études précédentes, dans du PBS à 4 ° C pendant la nuit dans une boîte humide [24], [25]. Ensuite, les sections ont été incubées avec du lapin biotinylé anti-souris IgG (1:400) pendant 1 h à température ambiante, et l'expression de CD147 a été détecté en utilisant un complexe streptavidine-peroxydase. La couleur brune indicative d'une activité de peroxydase a été développée en incubant les sections avec 0,1% de 3, 3-diaminobenzidine dans du PBS contenant 0,05% de H 2 O 2 pendant 5 min à température ambiante. contrôles positifs et négatifs appropriés ont été effectués dans chaque expérience.}

Évaluation de coloration

Le tissu spécimens ont été consultés séparément par deux pathologistes sans connaissance préalable de l'état clinique ou clinico des spécimens. La coloration a été évaluée par balayage de l'échantillon de tissu entier sous un faible grossissement (x 40), suivie d'une confirmation sous fort grossissement (x 200 et x 400). Un système de pointage de immunoréactivité (IRS) sur la base de la proportion et de l'intensité des cellules cancéreuses colorées positivement a été appliquée: A: nombre de cellules positives teinté ≤5%, a marqué 0; 6% ~25%, a marqué 1; 26% -50%, a marqué 2; 51% -75%, a marqué 3; ≫ 75%, a marqué 4. B: l'intensité de la tache: incolore, marqué 0; jaune pâle, marqué 1; jaune, marqué 2; brun, marqué 3. Les scores de A et B ont été multipliées, et le grade de coloration a été stratifié comme négatif (-, 0 score), faible (+, 1~4 score), modérée (++, 5~8 score) ou forte (+++, 9~12 score). Un autre pathologiste qui était aveugle aux données d'étude a également interprété les lames colorées. Les échantillons ont été réévaluées si la différence dans les scores des deux pathologistes était plus de 3 [26], [27].

L'analyse statistique

Les associations entre expression et variables catégoriques CD147 ont été analysés par Mann Whitney ou test de Kruskal Wallis, le cas échéant. Les courbes de survie ont été estimées en utilisant la méthode de Kaplan-Meier, et les différences dans les distributions de survie ont été évalués par le test du log-rank. risques proportionnels de Cox modélisation des facteurs potentiellement liés à la survie a été réalisée pour identifier les facteurs qui pourraient avoir une influence significative sur la survie. Les différences avec une valeur p de 0,05 ou moins ont été considérées comme statistiquement significatives.

Les de

Résultats CD147 Coloration dans le cancer gastrique

Dans les résultats d'analyse de l'immunohistochimie, CD147 coloration a été principalement localisés au niveau de la cellule les membranes et dans le cytoplasme des cellules cancéreuses gastriques. coloration négative, faible, modérée et forte de CD147 évalué par l'IRS a été montré à la figure 1. Le schéma de coloration du CD147 dans le cancer gastrique était compatible avec les rapports précédents [28]. Parmi les 223 échantillons de cancer gastrique, négatif (-) CD147 coloration a été détectée dans 90 échantillons, faiblement positif (+) CD147 coloration a été détectée dans 57 échantillons, positive modérée (++) CD147 coloration a été détectée dans 44 échantillons et fortement positif (+ ++) CD147 coloration a été détectée dans 32 échantillons. En revanche, parmi les 223 tissus normaux adjacents, négatif (-), faiblement positif (+) et positive modérée (++) CD147 coloration a été détectée dans 175 échantillons, 36 échantillons et 12 échantillons, respectivement, alors que pas positif fort (++ +) coloration n'a été détectée. La différence d'expression entre CD147 cancer de l'estomac et les tissus normaux adjacents était statistiquement significative ( P
< 0,001)., Ce qui indique que l'expression de CD147 est augmentée dans les cancers gastriques par rapport aux tissus adjacents normaux

Association de CD147 coloration avec caractéristiques clinicopathologiques

sur la base des scores de l'IRS de coloration immunohistochimique, nous avons analysé davantage la relation entre CD147 coloration et les caractéristiques clinico des patients atteints de cancer gastrique (tableau 1). CD147 coloration a été associée à une invasion de cancer de l'estomac, comme une coloration plus forte positive de CD147 a été plus fréquemment détectée dans T3 et les tumeurs T4 par rapport aux tumeurs T1 et T2 ( P = 0,035
). En outre, CD147 coloration a été associée à des métastases des ganglions lymphatiques et les métastases à distance, comme une coloration plus forte positif était plus susceptible d'être détectée dans les tumeurs avec métastases ganglionnaires ( P <
0,001) ou métastases à distance ( P <
0,001). CD147 coloration a été étroitement liée à la phase TNM du cancer gastrique, que la coloration a été progressivement renforcée de grade I à des tumeurs de grade IV ( P <
0,001, tableau 1). Cependant, CD147 coloration n'a pas été lié au sexe du patient, l'âge, la différenciation de la tumeur, le site de la tumeur ou le classement Lauren (tableau 1). Ces résultats indiquent que CD147 coloration est liée à l'invasion de cancer de l'estomac et les métastases.

Relation entre l'expression de CD147 et sans maladie Survie

Parce que CD147 coloration a été liée à l'invasion de cancer de l'estomac et des métastases, nous avons encore analysé son association avec la survie sans maladie, qui est principalement déterminé par l'ampleur de l'invasion et les métastases. Pendant la période de suivi, 129 des 223 patients atteints de cancer gastrique ont présenté des événements. La durée médiane de survie sans maladie pour tous les patients était de 41,8 mois (IC à 95%: 36.2-47.4 mois). Comme il y avait un nombre relativement faible d'échantillons dans le groupe fort CD147 coloration positive en raison de la petite taille de l'échantillon, nous avons combiné forte, modérée et faible coloration CD147 positives en un seul groupe, défini comme la coloration CD147 positive (+) du groupe. L'analyse de Kaplan-Meier a été utilisée pour évaluer la survie sans maladie des patients atteints de cancer gastrique par rapport à l'expression CD147. Nos résultats indiquent que les patients atteints de tumeurs positives CD147 avaient la survie sans maladie pire par rapport aux patients atteints de tumeurs CD147 négatives (figure 2A, log-rank test: P
= 0,008). La durée médiane de la survie sans maladie post-opératoire des patients dont la coloration CD147 positif était de 34,4 mois (IC à 95%: 27.3-47.5), tandis que celle des patients dont la coloration de CD147 négative était de 48,9 mois (IC à 95%: 35,2 à 62,6). Une analyse plus poussée sur la survie sans maladie dans les sous-groupes de tumeurs positives de coloration CD147 a révélé que le taux de survie a été diminué, passant de positif faible (+), modérément positif (++) à une forte positive (+++) CD147 groupe de coloration (figure 2B, journal Test -rank: P
< 0,001). Lorsque le rapport de risque non ajusté (HR) a été fixé à 1,0 (comme référence) dans CD147 négative (-) groupe coloration, les patients atteints de cancer gastrique positif CD147 avaient une fois 1,63 un risque plus élevé de rechute par rapport à ceux avec un cancer gastrique négatif CD147 (95 % CI: 1,13 à 2,36; P
= 0,009). En ce qui concerne les caractéristiques clinico, le statut de l'invasion tumorale (test log-rank: P
= 0,016), métastase ganglionnaire (test log-rank: P
< 0,001) et le stade TNM (log- test de rang: P
< 0,001) ont également été associés à la survie sans maladie des patients atteints de cancer gastrique. Les patients atteints de cancer gastrique montrant invasion profonde, métastases ganglionnaires ou stade TNM avancé avaient la survie sans maladie pire et un risque plus élevé de rechute que ceux sans. Cependant, le sexe, l'âge, la localisation de la tumeur, le statut de différenciation ou de classification Lauren avaient aucune valeur pronostique sur la survie sans maladie des patients atteints de cancer gastrique. Le HR non ajusté est présenté dans le tableau 2.

En analyse multivariée, le modèle de Cox des risques proportionnels a été ajusté pour le sexe, l'âge et le stade TNM, et l'expression de CD147 est un facteur pronostique indépendant de la survie sans maladie des patients atteints de cancer de l'estomac. Le HR ajusté était de 1,00 (comme référence) et 1,51 en CD147 patients, respectivement négatifs et positifs (IC à 95%: de 1,05 à 2,16; P
= 0,026, tableau 2). Ainsi, l'expression CD147 dans le cancer gastrique pourrait être un facteur prédictif indépendant de la survie sans maladie pour les patients, ce qui indique que les patients ayant une coloration CD147 positives ont un risque plus élevé de rechute que ceux avec coloration négative. En outre, le stade TNM a également été un facteur pronostique de la survie sans maladie dans l'analyse multivariée. (Tableau 2)

Relation entre l'expression de CD147 et la survie globale

Parce que CD147 coloration a été liée à la survie sans maladie du cancer gastrique, nous avons analysé en outre son association avec la survie globale. La durée de survie globale médiane pour tous les patients était de 58,0 mois (IC à 95%: 46.7-69.3 mois). L'analyse de Kaplan-Meier a été utilisée pour évaluer la survie globale des patients atteints de cancer gastrique indique que les patients atteints de tumeurs positives CD147 avaient la survie globale pire par rapport aux patients atteints de tumeurs CD147 négatives (figure 3A, log-rank test: P
= 0,003). La durée médiane de survie globale postopératoire des patients dont la coloration CD147 positif était de 45,0 mois (IC à 95%: 32.5-57.5), tandis que celle des patients dont la coloration de CD147 négative n'a pu être estimé grâce à une meilleure survie globale. l'analyse du sous-groupe sur la survie globale a révélé que le taux de survie a été diminué, passant de positif faible (+), modérée positive (++) à une forte positive (+++) CD147 groupe de coloration (figure 3B, test log-rank: P
< 0,001). Les patients atteints de cancer gastrique positif CD147 avaient un risque 1,79 fois plus élevé de décès par rapport à ceux avec un cancer gastrique négatif CD147. (IC à 95%: 1,20 à 2,67; P
= 0,004, tableau 3)

En analyse multivariée, la Cox modèle des risques proportionnels a été ajusté pour le sexe, l'âge et le stade TNM, et l'expression CD147 était un facteur pronostique indépendant de la survie globale des patients atteints de cancer gastrique. Le HR ajusté était de 1,59 chez les patients positifs CD147 (IC 95%: 1,05 à 2,40; P
= 0,028, tableau 3). Ainsi, l'expression CD147 dans le cancer gastrique pourrait être un facteur prédictif indépendant de survie globale pour les patients, ce qui indique que les patients ayant une coloration CD147 positives ont un risque plus élevé de décès.

Discussion

récidive tumorale est un grand menace pour les patients atteints d'un cancer gastrique à travers le monde. Même pour un cancer gastrique stade I, environ 5% à 30% des patients développent une maladie récurrente et finissent par mourir d'une maladie métastatique. Ainsi, le contrôle de récidive de la tumeur est l'une des stratégies les plus efficaces pour améliorer le pronostic dans la gestion du cancer de l'estomac. La chimiothérapie réduit la récidive tumorale et augmente l'espérance de vie des patients atteints d'un cancer gastrique. Cependant, en plus de ses effets thérapeutiques dans des cellules tumorales, la chimiothérapie se traduira inévitablement par des effets de toxicité et les effets secondaires cliniques significatifs dans les organes et les tissus normaux. Ainsi, pour administrer le traitement le plus efficace et minimiser les effets secondaires, il y a un besoin urgent de marqueurs plus sensibles pour prédire la récurrence de la tumeur et le pronostic.

Dans la présente étude, nous avons étudié CD147 expression de la protéine dans 223 cas de clinique cancer de l'estomac et de son association avec la survie sans maladie. CD147 expression de la protéine a été augmentée dans les tissus de cancer gastrique par rapport aux tissus normaux adjacents, et plus forte coloration positive de CD147 a été plus fréquemment détecté dans le cancer gastrique avec invasion profonde, métastase ganglionnaire, métastases à distance et le stade TNM avancé, qui était compatible avec les études antérieures sur la relation entre CD147 et le cancer gastrique humain [23]. Cependant, l'expression CD147 n'a pas été corrélée avec l'âge, le sexe, le statut de différenciation, site de la tumeur ou le classement Lauren. Des études récentes ont suggéré que l'ARNi à médiation par la régulation négative de CD147 diminution de la prolifération cellulaire, la MMP-2 et MMP-9 activités et le potentiel invasif des SGC7901 cellules, qui supportent les résultats démontrant l'association de CD147 avec envahissement du cancer de l'estomac et les métastases [16] . Pris ensemble, ces données suggèrent que CD147 pourrait être impliqué dans la progression du cancer de l'estomac.

Parce que CD147 est associée à l'invasion de cancer gastrique et des métastases, qui peut déterminer la récurrence de la tumeur, nous avons analysé en outre son association avec sans maladie et globale survie. Kaplan-Meier analyse a révélé nettement moins la survie sans maladie et dans l'ensemble des patients atteints de tumeurs positives CD147, ce qui indique que le niveau de la protéine CD147 est un marqueur de récidive et le pronostic pour les patients atteints de cancer gastrique. Cox modèle des risques proportionnels ajustés pour l'étape âge, sexe et TNM a montré la même tendance que Kaplan-Meier analyse de survie, ce qui confirme l'expression CD147 comme un marqueur de pauvres sans maladie et la survie globale, indépendante des indicateurs pronostiques cliniques connus tels que le stade TNM. la survie sans maladie prolongée dans le groupe de coloration négative CD147 a suggéré que CD147 pourrait être un marqueur prédictif potentiel de récidive précoce ou des métastases dans les cancers gastriques. Et la survie globale est une mesure clinique essentielle pour évaluer le risque des patients. Par conséquent, CD147 pourrait être un indicateur clinique précieux pour évaluer le risque des patients atteints de cancer de l'estomac.

L'association de CD147 avec le cancer gastrique invasion, les métastases et la récidive peut être au moins en partie à cause de son effet sur les MMP, comme MMPs permettent aux cellules de remodeler activement la matrice extracellulaire. CD147 est connue pour favoriser l'invasion tumorale et des métastases par stimulation de la synthèse de MMP dans les fibroblastes voisins [8]. Dans cette perspective, CD147 stimule la production de MMP, ce qui pourrait dégrader l'ECM et de faciliter l'invasion des cellules tumorales et des métastases; ainsi, la promotion de la récidive tumorale. Des études récentes ont également démontré que EMMPRIN non seulement induit différentes MMP mais réglemente également les paramètres de l'activateur du plasminogène urokinase (uPA) système et endothéliales facteur de croissance vasculaire (VEGF) [29], [30].

En conclusion, CD147 l'expression a été augmentée dans les échantillons cliniques de cancer gastrique, et il a été associé à l'invasion tumorale et les métastases. Notre étude fournit également la première preuve que CD147 est un facteur pronostique indépendant de la survie sans maladie et dans l'ensemble pour les patients atteints de cancer gastrique. Ces résultats suggèrent également que CD147 pourrait être un marqueur prédictif potentiel de récidive de la tumeur et le pronostic pour les patients atteints de cancer gastrique.

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