PLoS ONE: n ilmentyminen AFP ja STAT3 osallistuu Arseenitrioksidi indusoiman apoptoosin ja Kasvun inhibitio in AFP-tuottaminen mahasyövän Cells

tiivistelmä

Alfafetoproteiinia (AFP) tuottavia mahasyövän (AFPGC) , jota edustaa tuotantoa AFP, on aggressiivisempi käytös kuin yhteinen mahasyövän. Taustalla olevaa syntymekanismia ei tunneta hyvin. Arseenitrioksidi (As _{2O 3) käytetään kliinisesti akuutin promyelosyyttinen leukemia (APL) ja on aktiivisuutta in vitro
vastaan ​​useita kiinteiden kasvainten solulinjat, jossa apoptoosin induktio ja inhibitio leviämisen prime vaikutuksia. Signaali anturin ja aktivaattori transkription 3 (STST3) on tärkeä rooli kasvainten synnyssä erilaisten primäärisyövästä ja syöpäsolun säätelemällä solujen eloonjäämisen ja vähen- tämisessä kasvaimia estävä proteiineja. Täällä, löysimme vähentynyt ilmentyminen AFP ja STAT3 apoptoosin induktion jälkeen As 2O 3. AFPGC FU97 soluja. Myös taso STAT3 kohde onkogeenin Bcl-2 väheni As 2O 3, ja että tuumorisuppressorigeenin Bax lisättiin. Lisäksi STAT3 ilmaisun ja syvyys hyökkäyksen ja imusolmuke etäpesäke liittyivät. Survival potilaiden mahalaukun syöpä oli pienempi AFP ja STAT3 kaksinkertainen yli-ilmentyminen kuin yliekspressioon joko yksin. Downregulation AFP ja STAT3 ilme on tärkeä rooli As 2O 3 aiheuttamaa apoptoosia AFPGC soluja, mikä viittaa uusi mekanismi As 2O 3-indusoidun apoptoosin. Kuten 2O 3 voi olla mahdollista aine AFPGC hoitoon.}

Citation: Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) Expression of AFP ja STAT3 osallistuu Arseenitrioksidi indusoiman apoptoosin ja Kasvun inhibitio in AFP-tuottaminen Mahalaukun syöpäsoluja. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774

Editor: Matias A. Avila, Navarran yliopisto School of Medicine ja Center for Applied Medical Research (CIMA), Espanja

vastaanotettu: 4. marraskuuta 2012; Hyväksytty: 14 joulukuu 2012; Julkaistu: 30 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Jia et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukevat National Nature Science Foundation Grant of China (NSFC, nro 81000869 ja 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Alfafetoproteiini (AFP) on merkittävä plasman proteiini, jota ruskuaispussin ja maksan aikana sikiövaiheessa. Kliinisessä käytössä AFP on usein käytetty tuumorimarkkeri Maksasolusyövän ja keltuainen sac kasvaimia. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että muut tuumorit ihmisen voitaisiin myös tuottaa AFP ja mahasyövän oli yksi yleisimmistä [1] - [8]. AFP tuottavat mahalaukun syöpä (AFPGC) on enemmän aggressiivinen käyttäytyminen kuin yhteisen mahasyövän, koska tauti etenee nopeasti ja etäispesäkkeitä usein alueellisten imusolmukkeiden ja maksan [7] - [10]. Lisäksi AFPGC liittyy lyhyempi väli-vapaa maksametastaasin jälkeen radikaaleja, ja eloonjäämisprosentti on huomattavasti huonompi kanssa AFPGC kuin ilman AFP tuotanto [1], [9], [10]. Siten AFP voi olla passiivinen tuumorimarkkeri ja aktiivinen kasvaimen kasvua stimulaattori. Downregulating AFP ilme voi olla tehokas lähestymistapa AFP tuottavat syöpä.

Arseenitrioksidi (As _{2O 3) on käytetty menestyksekkäästi hoitamaan leukemian [11] - [13] ja on aktiivinen useita kiinteitä kasvaimia, mukaan lukien mahasyöpä [14]. Vaikutusmekanismi As 2O 3 sisältää vaikuttavat toimintaan Akt, JNK kinaasien, NF-KB, glutationi, kalsium- signalointi, reaktiivisia happiradikaaleja (ROS), ja kaspaasit sekä pro- ja anti -apoptotic proteiinit [15] - [18]. Ei tavanomaisen kemoterapian on saatavilla AFPGC, vaikka jotkut hoito ovat osoittaneet tehoa pienessä määrässä tapauksia [19] - [21]. Myös vaikutukset ja mekanismi As 2O 3 vastaan ​​AFPGC jäävät epäselviksi.}

Signaalin anturin ja aktivaattori transkription 3 (STST3) on mukana sekä signaalin siirtoon ja transkription aktivointi- ja on tärkeä rooli erilaisissa biologisissa prosesseissa, kuten aineenvaihdunta ja kasvaimen kehittymisen [22], [23]. STAT3 on konstitutiivisesti aktivoitu monenlaisia ​​syöpätyyppien [24], [25]. Kohdistaminen STAT3 voi olla tehokas tapa käsitellä syövän etenemiseen. Tämä STAT3 vaikutus välittyy sääntelyn eri STAT3 kohdegeenien, kuten apoptoosin inhibiittorit ja solusyklin sääntelyviranomaisten, kuten Bcl-2, Mcl-1 surviviiniperäiset, p53, c-Myc, sykliini D1 [26] - [31], ja verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF) [32]. Kuitenkin rooli STAT3 vuonna AFPGC ymmärretään huonosti.

Täällä tutkimme vaikutus As _{2O 3 leviämisen ja AFP ja STST3 ilmaisun AFPGC FU97 soluissa. Arvioimme alavirran tapahtumia STAT3 signalointi, Bcl-2: n ja Bax ilmaisun, tutkimaan mahdollisia mekanismeista tätä ilmiötä. Lisäksi arvioimme ilmaus AFP ja STAT3 immunohistokemiallisesti ihmisen mahasyövän näytteitä. Downregulation AFP ja STAT3 ilmaisun osaltaan As 2O 3: n indusoiman apoptoosin ja proliferaation esto in AFPGC.}

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

tutkimussuunnitelma hyväksyi Medical Ethics andHuman Clinical Trial komitean Jinan keskussairaalassa. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta.

Soluviljely ja lääkehoito

Ihmisen AFPGC solulinja FU97 saatiin Japani Collection of Research Bioresources (Japani) ja ylläpidettiin DMEM: ssä ( Invitrogen) täydennettynä 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Invitrogen), 1% antibiooteilla 37 ° C: ssa 5% CO _{2 kostutetussa ilmassa.}

_{2O 3 ( Sigma) liuotettiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (PBS) 1 mol /l kantaliuoksena ja sitä säilytettiin 4 ° C: ssa. Sillä in vitro
käytössä, kantaliuos laimennettiin sopivaan pitoisuus kasvualustaa FBS. Eksponentiaalisesti kasvavat solut käsiteltiin Kuten 2O 3 lopullisissa konsentraatioissa 1, 5, tai 10 umol /l. Ohjaus viljelmiä käsiteltiin tislatulla PBS: ään lopulliseen konsentraatioon 0,1% viljelyalustassa. Kaikki kokeet suoritettiin kolmena kappaleena.}

MTT Sytotoksisuusmääritys

vaikutus As _{2O 3 estämällä in vitro
kasvuun FU97 solujen määritettiin mittaamalla MTT: n (3- [4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli] -2,5-difenyylitetratsoliumbromidi) värjätä absorbanssi eläviä soluja. FU97 solut ympättiin 96-kuoppalevyille 1,6 x 10 ^{3 solua per kuoppa 100 ui DMEM, joka sisälsi 10% FBS: ää yön yli. Altistuksen jälkeen eri pitoisuuksia Kuten 2O 3: ssa 24, 48 ja 72 h, 20 ui (5 g /l), MTT: tä (Sigma, St. Louis, MO) lisättiin kuhunkin kuoppaan ja levyt olivat inkuboitiin vielä 4 h 37 ° C: ssa. Formazine liuotettiin 150 ul /kuoppa dimetyylisulfoksidia (DMSO) ja absorbanssi todettiin 490 nm: ssä. Inhibointimäärän (%) = (1-A arvo koeryhmässä /A-arvo kontrolliryhmässä) x 100%. 0 mikromol /l ryhmässä käytettiin nollakoe.}}

DNA fragmentaatioanalyysillä elektroforeesilla

Yhteensä 10 ^{6 solua kevyesti kaavittiin astiat, pestiin kahdesti kylmällä PBS: llä, ja sentrifugoitiin 15000 rpm: ssä 10 min, sitten lyysattiin 200 ui lyysipuskuria (1 ml 1 M Tris-HCl-puskuria, pH 7,4, 0,2 ml: lla 0,5 M etyleenidiamiinitetraetikkahapon [EDTA], 0,5 ml 10% Triton X-100 ). Hajotetut solut pidettiin 4 ° C: ssa 10 minuutin ajan, ja supernatantit inkuboitiin 2 ui RNaasi A: lla (10 mg /ml Tris-EDTA-puskuriin) 50 ° C: ssa 30 minuutin ajan, sitten 2 ui proteinaasi K (10 mg /ml tislattua vettä) 45 minuuttia 50 ° C: ssa. Liuosta sekoitettiin 5 M NaCl: a (20 ui) ja 2-propanolia (120 ui), inkuboitiin 20 ° C: ssa 24 tunnin ajan, sitten sentrifugoitiin 15000 rpm 20 minuutin ajan. Saostettu DNA liuotettiin Tris-EDTA: a (5 ui) puskuria ja tehtiin elektroforeesi 2% agaroosigeelissä ja Tris-asetaatti-EDTA-puskurissa 50 V DNA fragmentaatiomalli visualisoitiin käyttämällä UV-transilluminaattoria.}

Hoechst 33258 värjäys analyysi solukuoleman

Solut kasvatetaan suojalasi-luistaa kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä /PBS: ssä 30 minuutin ajan, pestään 15 minuutin ajan 0,1% Triton X-100 /PBS ja inkuboitiin pimeässä Hoechstin 33258 (10 ug /ml) 15 minuuttia. Kun kansi-luistaa pestiin PBS: ssä, positiivinen tumat laskettiin. Normaali ytimet ja apoptoottiset ytimet (kondensoitu tai hajanaiset kromatiinin) oli helppo erottaa.

Quantitative Reaaliaikainen PCR

Soluja viljeltiin As _{2O 3 (5 mikromol /l ) 72 tuntia. Kokonais-RNA uutettiin käyttämällä Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja kvantifioitiin spektrofotometrillä. Ensimmäisen juosteen cDNA valmistettiin käyttämällä satunnaisia ​​alukkeita jälkeen kit ohjeita (Takara, Japani). Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR AFP, STAT3 ja sen alavirran geenien 7300 Reaaliaikainen PCR System (ABI, USA) kanssa Takara SYBR Esisekoite Ex Taq reagenssit (Takara, Japani). Alukkeet suunniteltiin ja vahvistanut Invitrogen. Aluke tiedot taulukossa 1. PCR-reaktiot suoritettiin kolminkertaisina 20 ui tilavuus 2 minuutin ajan 94 ° C: ssa alustavan denaturoinnin, jota seurasi 30 sykliä 94 ° C: ssa 30 s ja 60 ° C: ssa 45 s. Taloudenhoito ohjaus GAPDH käytettiin sisäisenä kontrollina. Kukin alukesarjaa testattiin ensin määrittämään optimaaliset pitoisuudet, ja tuotteet ajettiin 1% agaroosigeelillä vahvistaa sopivan kokoisiksi. Sen jälkeen, ABI dissosiaatiokäyrä ohjelmistoa käytetään ohjaamaan useita lajeja kussakin PCR-monistuksella. cDNA FU97 soluja ilman Kuten 2O 3 Hoitona käytettiin rakentamaan standardikäyrä jokaista geeniä.}

Western blot -analyysi

Solupelletit homogenoitiin uuttopuskuria (50 mmol /L Tris-HCI, pH 6,8, 0,1% SDS: ää, 150 umol /l NaCl: a, 100 mg /l fenyylimetyylisulfonyylifluoridia, 1 mg /l aprotiniini, 1% NP-40 ja 0,5% natriumortovanadaattia), inkuboitiin 4 ° C: ssa 30 min ja sentrifugoitiin 20 min 12 000 g /min. Kokonaisproteiinia solulysaatti mitattiin käyttämällä Bio-Rad kolorimetrisellä kitillä (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Western blot -analyysiä varten, kokonaisproteiinia erotettiin 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin nitroselluloosakalvoille (0,45 pm, Millipore, Billerica, MA, USA), joita inkuboitiin 24 tuntia 4 ° C: ssa vasta-aineiden kanssa AFP (1 :500, R &D), STAT3 (1:1000), kaspaasi 3 (1:500), Bcl-2 (1:500), BAX (1:500) ja GAPDH (1:1000; kaikki Cell signalointi-teknologia) sitten piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla anti-hiiri /kani-lgG-vasta-ainetta (Santa Cruz Biotechnology), kun viimeinen pesu. Reaktiot kehitettiin käyttämällä 4-kloori-1-naftoli (Sigma) ja H _{2O 2. Signaalit havaittiin käyttämällä vahvistettua kemiluminesenssia (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, UK). GAPDH taso oli sisäisenä standardina.}

Immunoassay AFP Pitoisuus Supernatantti

supernatantti FU97 solut kerättiin hoidon jälkeen As _{2O 3 tai negatiivinen kontrolli 24, 48 ja 72 h.AFP pitoisuus supernatantissa määritettiin kahdella päällä immunofermentiset määritys käytettäessä TOSOH AIA järjestelmä (Japani). Cut-off-arvo AFP oli 10 ng /ml.}

Potilaat

Tutkimme tietoja kirurgisten ja patologinen kirjaa 24 potilaalla on AFPGC ja 24 satunnaisesti valittua, joilla on normaali seerumin AFP ja sovitetaan AFPGC potilaiden mahalaukun syövän vaiheessa. Potilaat olivat läpikäyneet resektioleikkaukselle Kliinisessä sairaalan Shandong University, Kiina, tammikuusta 1996 joulukuuhun 2011 AFPGC potilailla havaittiin seerumin AFP tasolla, mutta ei samanaikaista maksasairaus. Histopatologisia läsnäolo AFP positiivisuus vahvistettiin immunohistokemiallisesti. Otimme yhteyttä kunkin potilaan vahvistaa säilymisen tai kuolinpäivä.

immunohistokemia

immunohistokemia mukana käytön biotiini-streptavidiini-peroksidaasia kanssa Vectastain ABC Kit (Vector Laboratories, CA, USA). Lyhyesti, kudosleikkeet (4 mm) valmistettiin parafinoidut kudosnäytteet. Leikkeet poistettiin parafiini ksyleenillä seurasi nestehukan arvostellaan alkoholia. Osiot kuumennettiin mikroaaltouunissa 2 minuutin ajan 900 W hakea antigeeni, ja sitten inkuboitiin 0,3% H _{2O 2 metanolissa 30 min endogeenisen peroksidaasin salpaamiseksi. 3 pesun jälkeen kanssa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS), laseja inkuboitiin 10% normaalin hevosen seerumia estämään ei taustavärjäyksen, sitten inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla kaniinin anti-AFP (1:100 laimennus) ja anti-STAT3 (1:200) in kosteassa kammiossa 4 ° C: ssa yön yli. Pesun jälkeen PBS: llä, leikkeitä inkuboitiin biotinyloidun hevosen anti-hiiri-vasta-aineita 30 minuutin ajan, pestiin 3 kertaa PBS: llä, ja niitä inkuboitiin streptavidiini-konjugoitua peroksidaasia 30 min. Osiot visualisoitiin inkuboimalla 3, 3'-diaminobentsidiinillä liuosta (0,3% H 2O 2 ja 0,05% 3, 3'-diaminobentsidiinillä) ja vasta- värjättiin hematoksyliinillä. Jättämällä pois primaarinen vasta-aine oli negatiivinen kontrolli. Jokainen ajaa sisälsi positiivisen kontrollin ja negatiivisen kontrollin. Sillä negatiivinen kontrolli, ensisijainen vasta-aine korvattiin PBS: llä.}

Tilastollinen analyysi

Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD ja analysoitiin käyttämällä SPSS v11.5 (SPSS Inc., Chicago , IL, USA). Yhdistyksen ennusteeseen viittaavia muuttujia ja AFP ja STAT3 ilmentyminen määritettiin khi-neliö testi, ja Yate n korjausta sovellettiin pieni määrä näytteitä. Chi-square test tai kaksisuuntaisia ​​Opiskelijan t
testiä käytetään arvioitaessa ryhmien välisiä eroja. Analyysi selviytymisen mukana log-rank-testi, jossa Kaplan-Meier käyrät. P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

kasvunestomenetelmää ja apoptoosin in FU97 Solut As _{2O 3}

FU97 soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla kuin _{2O 3 (1, 5 ja 10 umol /l) 24, 48 ja 72 tuntia. Kuten 2O 3 inhiboivat FU97 solujen pitoisuuden ja ajan riippuvaisella (Fig. 1A). Käsitellyissä soluissa 5 umol /l ja 10 umol /l As 2O 3: ssa 72 tuntia, kasvun inhibitio oli 56,27 ± 3,91% ja 73,46 ± 4,64%, vastaavasti. DNA: n fragmentoituminen on ominaista apoptoottisen prosessin. Tyypillinen DNA pirstoutuminen tikkaat havaittiin FU97 soluissa käsiteltiin 5 mikromol /l ja 10 umol /l As 2O 3 (Fig. 1 B). Täällä lisätutkimuksia elimellisen muutoksen apoptoottisten solujen. FU97 soluja käsiteltiin 5 mikromol /l ja 10 umol /l As 2O 3 72 h värjättiin Hoechst 33258, ja havaittiin loisteputken microscope.The Tulokset osoittivat, että As 2O 3 aiheuttama FU97 solujen apoptoosin pitoisuutena riippuvaisella tavalla, kuten on osoitettu hajanainen ja kondensoidaan ytimet (Fig. 1 C). Valaista edelleen vaikutuksen As 2O 3-solujen apoptoosin, caspase3 mitattiin western blot.The tulokset kuviosta. 1D osoitti selvästi, että kaspaasi 3-proteiinin ilmentyminen kasvoi merkittävästi FU97 cells.Therefore, As 2O 3 voi estää solujen kasvua ja aiheuttaa apoptoosin AFPGC FU97 soluja.}

estävä vaikutus Kuten 2O 3 Expression AFP ja STAT3 vuonna FU97 Solut

Valaistaan ​​roolin AFP ja STAT3 As _{2O 3 inhiboivan vaikutuksen lisääntymistä ja apoptoosia, vaikutus As 2O 3 AFP ja STAT3 ilmentyminen tutkittiin käyttämällä kvantitatiivista tosiaikaista PCR ja western blot. Soluja käsiteltiin 1, 5 ja 10 mikromol /l As 2O 3 72 h.The mRNA ja proteiini ilmentymä AFP ja STAT3 ja fosforylaation STAT3 merkittävästi vaimentua As 2O 3 hoitoa pitoisuutena riippuvaisella tavalla (Fig. 2, Fig. 7).}

AFP pitoisuus Associated kasvunestomenetelmää ja apoptoosi FU97 soluviljelmäsupernatantista

edelleen varmistamiseksi estävää vaikutusta kuten _{2O 3 AFP, mittasimme AFP proteiinin taso supernatantissa FU97 soluja. Kuten 2O 3 saattaa vähentää AFP proteiinin tason pitoisuus riippuvaisella (Fig. 3, Fig. 7). Tämä tulos sopinut solujen kasvun inhibition suhteen (Fig. 1A), apoptoosin FU97 soluja (Fig. 1 B, C, D), ja vähentää mRNA: n ilmentymistä AFP ja STAT3 (Fig. 2A) ja proteiinin ilmentyminen AFP, STAT3 ja pSTAT3 (Fig. 2B).}

kevyemmästä STAT3 Targeting Geenit, Bcl-2: n ja Bax, As _{2O 3 Käsittely FU97 Solut}

tutkia ilmaisu of STAT3 kohdistaminen geenien, tutkimme ilmaus antiapoptoottisten Bcl-2 ja pro-apoptoottinen Bax in FU97 käsitellyissä soluissa As _{2O 3. MRNA ja proteiini ilmentymistä Bcl-2 säädeltiin vähentävästi As 2O 3 käsitellyissä soluissa (Kuva. 4), mutta Bax oli voimistunut, mikä viittaa siihen, että vaikutus As 2O 3 solujen apoptoosi välittyy estämällä konstitutiivisesti aktivoitua STAT3 (Fig. 7).}

Clinical ominaispiirteet Valitut Population

oli 34 mies- (70,8%) ja 14 naisten (29,2%) potilaille, joiden mediaani-ikä oli 66 vuotta (vaihteluväli, 45-83 vuotta). Kliinis ominaisuudet potilasta tiivistetysti taulukossa 2. oli 48 potilaalla oli täydellinen seurantatiedot, ja seuranta-aika oli 3 kk 60 kuukautta, joiden keskimääräinen ajan ollessa 33,7 kuukautta. Koko elinaika määriteltiin kuukauden kuluttua leikkaus kuolinpäivästä tai tappiota seurantaan.

immunohistokemiallinen Expression of STAT3

Koska meillä ei ole tietoa ilmaus STAT3 in AFPGC, päätimme sen ilmentymistä immunohistokemiallisella värjäyksellä AFPGC potilaan kudosta. Vuonna 24 AFPGC ensisijainen kasvaimia, 11 oli positiivisia (46%) ja 13 olivat negatiivisia (54%) ja STST3 ilmaisua. Vuonna 24 AFP-negatiivisten mahasyövässä näytteitä, 8 (33%) ensisijainen kasvaimia olivat positiivisia ja 16 (67%) olivat negatiivisia STST3 ilmaisua. Lisäksi huolimatta suhteellisen vähän potilaita, joilla on täydelliset tiedot, STST3 yliekspressio oli merkitsevästi yhteydessä syvyys hyökkäyksen ja imusolmuke etäpesäke (p < 0,05) AFP-positiivisten ja -negatiivisilla ryhmät (Fig. 5, taulukko 2, kuva . 7).

ilmentäminen AFP ja STAT3 liittyy huono ennuste mahasyövän

keskimääräinen elinaika AFP-positiivisten potilaiden oli 23 kuukautta (95%: n luottamusväli, 16-30 kuukautta ). mikä oli huomattavasti lyhyempi kuin että AFP-negatiivisilla potilailla, 53 kk (95% luottamusväli, 47-59 kuukautta) (P < 0,05) kantavassa Keskimääräinen elinaika on STAT3-positiivisten ryhmässä oli 38 kk (95%: n luottamusväli , 29-47 kuukautta), mikä oli huomattavasti lyhyempi kuin että STAT3-negatiivinen ryhmä, 54 kuukautta (95%: n luottamusväli, 47-61 kuukautta) (P < 0,05, Fig. 6A ja B, Fig. 7) .Furthermore , elinaika oli pienempi AFP ja STAT3 kaksinkertainen positiivisten potilaiden kuin ilmaus AFP tai STAT3 yksin (P < 0,05, Fig. 6C ja D, Fig. 7). Potilailla, joilla AFP ja STAT3 kaksinkertainen positiivinen ilmaisu mediaani elinaika oli 22 kk (95%: n luottamusväli 11-33 kuukautta). Tähän verrattuna potilailla, joilla on kerran ilmaisee AFP tai STAT3, mediaani elinaika oli 54 kuukautta (95%: n luottamusväli 44-64 kuukautta) ja 59 kuukautta (95%: n luottamusväli 47-71 kuukautta).

keskustelu

AFPGC on ollut vaikea hoitaa lähinnä taipumus etäpesäke ja kestävyys perinteisiin hoitoihin. Vaihtoehtoisia hoitomuotoja nimenomaan näiden asioiden tarvitaan kiireellisesti. Kuten _{2O 3 on käytetty kliinisissä tutkimuksissa APL vuosia, ja 10 mg /vrk Kuten 2O 3 todettiin tehokkaaksi asiakkuutta täydellisen remission potilailla, joilla on äskettäin diagnosoitu ja uusiutunut APL [ ,,,0],33]. Kuten 2O 3 esti solujen lisääntymistä ja indusoi apoptoosia ihmisen maksasyövän HepG2 [34], jota tukee lisäksi kliininen tutkimus osoittaa kuin 2O 3 olevan tehokas ja turvallinen potilailla, joilla on edennyt primäärikarsinoomaan maksan [35], myrkyllisyyttä oli lievä ja seerumin AFP taso laski. Siksi me tutkimme, As 2O 3 indusoi myös solujen kasvun esto ja apoptoosin hepatoid adenokarsinooma mahalaukussa AFPGC FU97 soluja ja löysi antituumoriominaisuuksia As 2O 3 AFPGC soluissa.}

Tulosten mukaan Kuten _{2O 3 on vahva antiproliferatiivinen vaikutus FU97 soluja pitoisuutena ja ajasta riippuva tavalla. Plasman arseenin kliinisessä hoidossa akuutti promyelosyyttinen leukemia voidaan saavuttaa 5,5-7,3 mM [36]. Tutkimuksessamme kaikki tulokset osoittivat, että 5 mikromol /l As 2O 3 tehokkaasti inhiboivat ja indusoi apoptoosin 72 tuntia. Tämä annos on kliinisesti merkittävää, mikä viittaa siihen, että AFPGC solut ovat herkkiä As 2O 3.}

AFPGC edustama tuotanto AFP, osoittaa suurempi proliferatiivinen aktiivisuus, heikompi apoptoosin, ja rikkaampi uudissuonittumista kuin AFP-negatiivinen syöpien. Toisaalta, korkea AFP täysin kehittynyt maksasyöpä tai seerumissa vastaanottavan liittyy enemmän aggressiivista käyttäytymistä, ja lisääntynyt anaplasia [37], [38]. Tutkimukset AFP pudotus siRNA löytyi esti soluproliferaatiota hepatoomat [39]. Siksi AFP voi toimia keskeinen askel etenemistä AFP-positiivisten syöpä. Downregulation AFP ilmaisun muodostaa merkityksellisen terapeuttinen strategia. Huomasimme, että As _{2O 3 voisi downregulate AFP-mRNA ja proteiinin ilmentymisen. Myös downregulation AFP As 2O 3 voi estää soluproliferaatiota ja aiheuttaa solujen apoptoosin AFPGC FU97 soluissa. Lisäksi AFP eritystä As 2O 3-käsitellyistä soluista oli annoksesta ja ajasta riippuvaa laskua supernatantissa. Downregulation AFP ilmaisun voisi vaikuttaa As 2O 3-indusoidun solujen kasvun esto ja apoptoosin. Siten nämä tulokset osoittivat, että AFP ilmentyminen säädeltiin vähentävästi vastauksena As 2O 3 hoitoa. AFP voi olla tärkeä rooli leviämisen ja apoptoosin AFPGC.}

Sen lisäksi, että pisteen lähentymisen lukuisia onkogeeniset signalointireittejä, STST3 osallistuu myös solujen kasvua ja selviytymistä. Leukemiasoluissa, As _{2O 3 aktivoi lukuisia solunsisäistä viestintää reittejä, mikä johtaa apoptoosin [40]. Kuten 2O 3 estämällä STAT3, ennen solun proliferaation inhibitio, on kuvattu useita myeloomasoluja [41]. Myös As 2O 3 estää Proteiinityrosiinikinaasin siten epäsuorasti vähentämällä aktivoitumista STAT proteiinien [42] .Siksi downregulation STAT3 on pidetty yhtenä vaikutusmekanismeja As 2O 3 akuutissa promyelosyyttinen leukemia (APL) Meillä löytyy STST3 aktivoituvat AFPGC soluissa, ja As 2O 3 voisi downregulate STST3 mRNA ilmaisun ja STAT3 ja pSTAT3 proteiinin ilmentymiseen. Erityisesti vaimentua ilmaus STAT3 ja pSTAT3 vastasi vaimentua ilmaus AFP As 2O 3. STAT3 saattaa estyä noin kertoimella aikana aktivoinnin vastauksena As 2O 3. in AFPGC. Riippumatta mahdollisista mekanismeista säätelyssä STAT3, korkea AFP ilmentyminen AFPGC saattaa olla merkittäviä vaikutuksia. Aikaisemmat tutkimukset ovat myös osoittaneet, että AFP voi dimeroitua muiden proteiinien kanssa, kuten tumareseptorit (ts retinoiinihappo-reseptori), transkriptiotekijöitä ja kaspaasien, jotka kaikki voivat edistää kasvainsolujen kasvua [43], [44]. Tämä puolestaan ​​on johtanut keinotteluun, että AFP voisi dimerisoimaan transkriptiotekijöiden STST3 edistämiseksi AFPGC kasvua. Lisäselvityksiään säätelyyn STAT3 ilmaisun liittyvät AFP tarvitaan.}

STST3 voi aiheuttaa solujen apoptoosia kopiointia vähen- tämisessä Bcl-2: n ilmentymisen [45]. Bcl-2 on ylävirtaan efektorimolekyylin apoptoottisessa reitin ja voimakas vaimennin apoptoosin. Se voi oligomeroitavan Bax, joka myöhemmin depolarisoi mitokondrion kalvon pystytään tuottamaan sytokromi c: ja apoptoosin [46]. Suhde Bcl-2 Bax on tärkeää määritettäessä, solut apoptoosiin tai eloonjäämistä. Löysimme alentunut ilmentyminen Bcl-2 yhdessä esti STST3 ilme As _{2O 3 hoitoa AFPGC soluissa. Sitä vastoin ilmaus Bax lisättiin. Yhdessä havainnot muissa solun järjestelmissä, joissa esti STST3 tason todettiin laskevan Bcl-2: n ilmentymisen ja apoptoosin [45], As 2O 3 vaikutusten kumoamiseen löysimme voi välittää estämällä konstitutiivisesti aktivoitua STAT3.}

osoittavat lisäksi, onko STST3 on keskeinen rooli AFPGC, tarkastelimme AFPGC osalta potilaiden STAT3 ilmaisua. STAT3 positiivisuuden AFP-positiivisten kasvainten oli 46% ja AFP-syöpäkasvain 33%. Potilaat, joilla AFPGC oli korkeampi STAT3 ilmaisua, vaikka ei merkittävää ehkäpä johtuen pieni määrä potilaita. Kuitenkin STAT3-positiivinen ekspressio liittyy syövän kudoksen, syvyys invaasion ja imusolmuke etäpesäke in AFPGC. Kliinisesti potilailla, joilla AFPGC ovat huonon ennusteen [1], [9], [10]. Me vahvisti, että ennuste oli huonompi potilaalla on kuin ilman AFP jotka lajiteltiin syövän vaiheessa. Lisäksi potilaiden selviytymiseen sekä AFP ja STAT3 positiivisuus oli merkittävästi huonompi kuin AFP tai STST3 positiivisuutta yksin. Siten tässä tietyntyyppiset mahasyövän, STST3 näyttää olevan tärkeä rooli solujen eloonjäämistä ja proliferaatiota. STAT3 ilmentyminen AFPGC saattaa selittää kliinisesti aggressiivista käyttäytymistä AFPGC, ja STAT3 ilmentyminen saattaa olla hyödyllinen etenemisen osoitin, jos validoitu laajoja tulevaisuudentutkimuksista suuremmissa ikäryhmät. Downregulation AFP ja STAT3 ilmaisu voi muodostaa merkityksellisen terapeuttinen strategia AFPGC. Suhteesta AFP tuotannon ja STAT3 ilmaisun, ei ole saatavilla raportissa kuvataan olevat mekanismit date.It on raportoitu, että AFP-ilmentyminen mahasyövän on puuttumisen vuoksi transkriptiotekijän ATBF1 [47]. Lisäksi, ATBF1, kuten kasvainsuppressorigeenin, enhancesthe suppressio STAT3 signaloinnin vuorovaikutuksella PIAS3 [48] .Siksi, on kohtuullista olettaa, että inaktivointi ATBF1 geenin AFPGC, mutaation kautta tai vähentynyt ilmentyminen, voidaan sallia AFPGC solut tuottamaan AFP proteiinia ja overexpres STAT3. Täsmentää, mitkä tekijät ovat mukana AFP tuotantoon ja STAT3 ilme, lisätutkimuksia tarvitaan.

Yhteenvetona As _{2O 3 voi estää AFPGC solulinjan FU97 kasvua ja aiheuttaa apoptoosin. Mahdollisia mekanismeja, jotka liittyvät downregulation AFP ja STAT3 ja STAT3 kohdistaminen anti-apoptoottisen geenin Bcl-2 ja säätelemällä tuumorisuppressorigeenin Bax (Fig. 7). Ilmentymistä STAT3: in AFPGC tärkeä rooli tuumorin invaasio ja ennuste. Kuten 2O 3 voi olla mahdollinen uusi apuaine huumeiden hoidossa AFPGC. Tämä tutkimus tarjoaa joitakin teoreettinen perusta sen kliinistä käyttöä arvoinen jatkotutkimuksia.}

• PLoS ONE: microRNA-9 estää leviämisen, ja metastaasit mahasyövän Cells kautta Targeting sykliini D1 ja Ets1
• PLoS ONE A Novel Proteomiikka-Based Clinical Diagnostics Technology Tunnistaa heterogeenisuus in Aktivoitu signaalireaktioteissä mahasyövistä