PLoS ONE: tunnistaminen HSA-miR-335 kuin Prognostiset Signature in Mahalaukun Cancer

tiivistelmä

Background

Mahasyöpää (GC) on yksi yleisimmistä maligniteetti ja pääasiallinen syy kuoleman Kiinan syöpäpotilailla. Toistuminen on merkittävä tekijä, joka johtaa hoidon epäonnistumiseen ja alhainen 5 vuoden pysyvyys GC potilaista kirurgisen resektion. Siksi tunnistaminen biomarkkereita mahdollisten ennustettaessa toistuminen riski on keskeinen ongelma ennusteen GC potilailla.

Potilaat ja menetelmät

Yhteensä 74 GC potilasta valittiin systemaattista analyysiä, joka koostuu of 31 potilasta, joiden tauti uusiutui ja 43 potilasta ilman toistumisen. Ensinnäkin miRNA microarray ja bioinformatiikan menetelmiä käytettiin luonnehtimaan ero ilmaistaan ​​miRNA alkaen primaarikasvaimen näytteistä. Sen jälkeen, käytimme ROC tapa valita allekirjoitus paras herkkyys ja spesifisyys. Lopuksi validoitu allekirjoituksen GC näytteistä (jäädytetty ja verinäytteet) käyttäen kvantitatiivinen PCR.

Tulokset

Olemme tunnistaneet 12 ero miRNA lukien 7 säädelty ja 5 alassäädetty miRNA uusiutumiseen ryhmässä. Käyttäen ROC menetelmä, olemme edelleen selvitettävä HSA-miR-335 allekirjoituksena tunnistaa toistuminen ja ei-toistuminen tapaukset harjoitusnäytteet. Lisäksi olemme validoitu tämän allekirjoituksen käyttäen kvantitatiivista PCR-menetelmällä 64 testinäytteet johdonmukainen tulos koulutusta asetettu. Korkea taajuus toistuminen ja huono selviytyminen havaittiin GC tapauksissa korkean tason HSA-miR-335 ( P
< 0,001). Lisäksi arvioimme, että HSA-miR-335 oli mukana säätelyssä kohdegeenien useissa kasvaimia synnyttävän signaali-reittejä, kuten p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-like-reseptori ja polttovälin tarttuvuus.

Johtopäätös

Tuloksemme osoittavat, että HSA-miR-335 on mahdollista tunnistaa uusiutumisen riskiä ja liittyvät ennusteen GC potilaista.

Citation: Yan Z, Xiong Y, Xu W, Gao J., Cheng Y, Wang Z, et ai. (2012) tunnistaminen HSA-miR-335 kuin Prognostiset Signature mahasyövän. PLoS ONE 7 (7): e40037. doi: 10,1371 /journal.pone.0040037

Editor: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Espanja

vastaanotettu: 21 helmikuu 2012; Hyväksytty: 30 toukokuu 2012; Julkaistu: 3. heinäkuuta 2012

Copyright: © 2012 Yan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Nämä kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

tällä hetkellä leikkaus on edelleen tärkein vaihtoehto hoitoon mahasyöpä (GC), mutta vaikka olet parantava resektio, noin 40-65% GC potilailla esiintyy taudin uusiutumista mahdollisesti kattavaa paikallista uusiutumisen, vatsakalvon levittäminen tai hematogenous etäpesäkkeiden [1], [2]. Tästä syystä 5 vuoden pysyvyys GC potilaiden oli vielä alhaisella tasolla. Suurena haasteena parantamiseksi kliinisiä tuloksia on ymmärtää paremmin molekyylitason mekanismeja ja tunnistaa vankka allekirjoitukset ennusteeseen GC.

Useat riskitekijät, mukaan lukien patologinen herakalvojen valtio, marginaali tila, kasvain mikroverisuonitiheys ja geeniekspression muutokset liittyvät toistuminen on raportoitu [3], [4]. Lisäksi muutamia ennakoivaa tai diagnostisia menetelmiä on käytetty arvioimaan uusiutumisen riski perustuu geeniekspressioprofilointi tai joukko kliinisiä muuttujia [5] - [8]. Nämä useita havaintoja myös useita geenin tai proteiinin muutokset voivat haitata niiden kliinistä soveltamista. Luotettava ja kätevä molekyylimarkkereita kliiniseen harjoittajat tarvitaan ennusteen GC.

äskettäin löydetty of miRNA ovat erittäin konservoituneita genomien selkärangattomat, selkärankaiset ja kasveja. Ne palvelevat kriittiset toiminnot useita biologisissa prosesseissa [9] kehitykseen liittyvä ajoitus, kuviointi ja alkionkehityksen erilaistuminen, organogeneesin, ja apoptoosin [10]. Koska sen useita olennaiset biologiset toiminnot, ei ole yllättävää, että epänormaali miRNA lauseke johtaa taudin ja jopa syöpää [11].

miRNA on esitetty tehokas mahdollisia biomarkkereita jäljittämisessä kudoksen alkuperän pahanlaatuisia tuntematon ensisijainen alkuperä [12]; miRNA ekspressioprofiileja pystyvät vastaamaan kehitys- linjaa ja eriytetty tila kasvainten [11]. Systemaattinen analyysi vakautta miRNA sekä optimoidut olosuhteet ilmentymisen analyysi käyttäen formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut ja verinäytteet on raportoitu aiemmin [13] - [15], valottavat niiden odottamattomia diagnostista potentiaalia. On olemassa rajoitettu määrä miRNA [16] ihmisen genomista, jotka ovat tiedetään säätelevän noin 30% geenien [17]. Nämä ominaisuudet miRNA voi antaa meille yksinkertainen menetelmä ennustaa toistumisen riskiä syöpäpotilaille.

Tässä tutkimuksessa olemme tunnistaneet miRNA (HSA-miR-335), jolla on potentiaalia ennustaa toistumisen riskiä GC perustuvat microarray ja kliiniset tiedot pienikokoinen näyte Kiinan GC potilailla. Tuloksemme osoittivat, että HSA-miR-335 voisi olla toimii kliininen ennustetekijöitä allekirjoituksen GC.

Methods

Kliininen Näytteitä

Tämä tutkimus on hyväksynyt eettinen komitea Wuhan General Hospital Guangzhou Command, PLA. Kaikki mahasyöpäpotilaista ja ei-syöpäpotilaat ruoansulatussairauksiin edellyttäen kirjallinen lupa Tutkimuksessamme.

Potilaat, joille tehdään gastrectomy potentiaalisesti parannettavissa GC Wuhan General Hospital of Guangzhou sotilasjohdon olivat aiheita tässä tutkimuksessa. Kelpoisuus sisällyttäminen tässä tutkimuksessa olivat histologisesti varmennettu adenokarsinooma mahan tai ruokatorven risteyksessä. Kaikki potilaat olivat saaneet täydellisen asemointia myös yritetty täydellinen kasvaimen poisto sisällyttäminen laaja negatiivisten marginaalien ja laajennettu retroperitoneaalinen imusolmukkeiden (D2 tyyppi). Tiedot ennusteeseen viittaavia, terapeuttinen, ja lopputulos parametrit potilaita toukokuusta 2005 helmikuu 2012 kerättiin takautuvasti. Cancer pysähdyspaikan suoritettiin viidennen painoksen Yhdysvaltojen yhteisen komission syövän TNM kriteereihin.

uusiutuminen määriteltiin sellainen syövän uusiutumiseen lukien imusolmuke, jäännöksen vatsa, paikallinen, vatsakalvon ja hematogenous etäpesäkkeitä. Kaikki potilaat, jotka kokivat syövän uusiutumisen todettiin kliinisesti tai radiologisesti, ja vahvistanut koepala kautta ruoansulatuskanavan yläosan endoskooppia tai perkutaaninen reikä. Röntgenkuvauksilla standardi uusiutumisen diagnoosia mukana CT tai MRI rinnassa, vatsan, lantion, pään ja luuston kuvauksissa, tai muita diagnostisia tutkimuksia, joita käytetään vain erityisissä olosuhteissa. Kaikki näytteet saatiin kirurgisista näytteistä potilaiden mahalaukun adenokarsinoomaa ja kaikki potilaat antoivat kirjallisen suostumuksen käytöstä näiden kudosten tutkimustarkoituksiin. Me valitut näytteet (myös jäädytetty ja verinäytteet) 74 potilasta ja ilman GC toistuminen.

miRNA Microarray

miRNA mikrosiruanalyysi suoritettiin kuten on kuvattu yksityiskohtaisesti verkkosivuilla CapitalBio ( http://www.capitalbio.com) ja myös mukaan Hua menettelyyn [18]. Lyhyesti, 50-100 ug kokonais-RNA: ta käytetään erottamaan miRNA käyttämällä miRNA eristyspakkausta AM1560 (Ambion, USA). Fluoreskeiinileimattu miRNA käytettiin hybridisaatioon on Affymetrix miRNA Chip sisältävä 1075 koettimia. Fluoresenssin signaali pyyhkäistiin GeneChip- Scanner 3000 7G (Affymetrix, USA). Raakadataa normalisoituivat ja analysoidaan GeneChip- komentokonsoli 1.1 ohjelmisto (Affymetrix, USA).

RNA hiukkaserotus Frozen Fresh ja verinäytteet

RNA eristettiin jäädytetty GC kudoksiin käyttämällä tavallista Trizol protokolla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Verinäytteet, miRNA uutettiin käyttäen miRNease (Qiagen). Lyhyesti, 700 ui QIAzol reagenssia lisättiin 200 ui plasmaa näytettä ja inkuboitiin 5 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten 140 ui kloroformia, lisättiin, vorteksoitiin 15 sekunnin ajan ja inkuboitiin 3 minuuttia huoneen lämpötilassa. Tätä seurasi sentrifugointi 14000 rpm 4 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Ylempi, vetinen faasi poistettiin ja 1,5 kertaa sen tilavuus lisätään 100% etanolia. Kukin 700 ui seosta pantiin pylvääseen ja sentrifugoitiin 13000 rpm: llä huoneen lämpötilassa 15 sekunnin ajan. Seuraavat, 500 ui puskuri RPL lisättiin pylvääseen ja sentrifugoitiin 13000 rpm: llä huoneen lämpötilassa 2 min. Sitten pylväs sentrifugoitiin 13000 rpm: llä huoneen lämpötilassa sen kuivaamiseksi. Seuraavassa oli eluutiovaiheen 20 ui nukleaasitonta vettä. Eluoitu RNA varastoitiin -70 ° C: ssa.

Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR

Kypsät miRNA sekvenssit hankittiin Sanger-instituutin miRBase Sequence Database (http://microrna.sanger.ac .uk /sekvenssit /). Varsi-silmukka käänteistranskriptio (RT)-alukkeet suunniteltiin Chen [19]. RT-reaktio-olosuhteet käyttää mukana inkuboinnit 16 ° C: ssa 30 min; 37 ° C: ssa 30 minuuttia ja sitten 72 ° C: ssa 10 min. Lämpötilasyklit protokolla PCR mukana ensimmäisen denaturaatiovaiheen 95 ° C: ssa 5 min, jota seurasi 40 sykliä 95 ° C: ssa 30 s, 57 ° C: ssa 30 s ja 72 ° C: ssa 30 s. Sulaa käyrät Kunkin PCR analysoitiin huolellisesti määrittääkseen epäspesifisen vahvistusta. Ilmaisu Kunkin miRNA laskettiin 2 ^{-ΔΔ C
_{T kaava ja normalisoidaan U6 snRNA ilmaisun [20].}}

valvomaton Algoritmi

SAM [21] käytettiin suorittamaan ilman valvontaa klusterointi laskentaan. Cutoff merkitsevyys määritettiin viritys parametri delta, käyttäjän valitsema perustuu vääriä positiivisia ja edustaa q arvo. Valitsimme kertainen muutos on suurempi kuin 2, ja q = 0, kun valintakriteerit ero ilmaus miRNA.

ROC ja Kaplan-Meier Survival Curve Analysis

ROC-käyrä analyysi suoritettiin käyttäen MedCalc ohjelmistopaketteja (verison 8.2.1.0; Mariakerke, Belgia). AUC käyrät tarjosi mitta kokonaistehokkuutta diagnostista testiä. Suhde miRNA signaalin intensiteettiä ja Ct arvo kunkin miRNA käytettiin ROC laskentaan näytteissä. Survival analyysit suorittaa myös MedCalc ohjelmistopaketti.

Tilastollinen analyysi

Kliiniset tiedot analysoitiin käyttämällä Chi-Square test. Kumulatiivinen eloonjääminen käyrä vertailtiin log-rank-testi. Kaikissa analyyseissä, ero jossa P
< 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

miRNA kohdegeenin Prediction ja Signal Pathway Analyysit

hyödynnettiin miRNA kohdegeenin ennustus tietokanta TargetScan (http://www.targetscan.org) valitsemaan uskottava tavoitteisiin ero ilmaistaan ​​miRNA. Integroitu geeni ontologian tietokannan molekyyli- merkintä järjestelmä (MAS3.0, http://www.capitalbio.com) käytettiin tutkimaan miRNA kohdistettuja geenien ja niiden osallistuminen eri signaalien kulkureiteillä.

Tulokset

Kliininen Ominaisuudet GC potilaiden

yhteensä 74 potilasta /ilman toistumisen valittiin systemaattista analyysia. 31 potilasta oli toistuvia GC, joka oli osoittautunut patologisesti biopsialla klo anastomosis sivustojen kautta tähystykseen. 43 potilasta ilman toistumisen valittiin kontrolliryhmälle otteluiden sukupuoli, ikä diagnoosin, TNM lavastus, hoito ja määrä mukana imusolmuke (taulukko 1).

Ei ollut merkittävää eroa Sex ( P
= 0,469), ikä ( P
= 0,502), kasvain sijainti ( P
= 0,299), Differentiation ( P
= 0,511) , Imusolmuke resektio ( P
= 0,217) ja tila adjuvanttihoitoa ( P
= 0,214). Oli merkittävää eroa UICC vaiheessa ( P
= 0,108) ja selviytymisen /kuolema suhde huomattava (8/23 in uusiutuminen ryhmässä vs. 34/9 ei-toistuminen ryhmä, P
<0,001), jossa keskimääräinen elinaika oli 18,9 kuukautta uusiutumisen vs. 43,9 kuukautta ulkopuolisissa toistumisen vastaavasti ryhmä ( P
< 0,001) (taulukko 1).

miRNA Expression Profiles Associated GC uusiutuminen

Käytimme miRNA mikromatriisisiruna mittaamaan miRNA ilmentymisen tasot 10 GC näytettä /ilman toistumisen (5/5) koulutus asetettu. Verrattaessa miRNA ilmaisu ryhmien välillä, 7 säädelty ja 5 alassäädetty miRNA löydettiin, jotka olivat tilastollisesti merkitseviä GC toistuva ryhmä (taulukko 2). Nämä 12 miRNA voitaisiin käyttää erottelemaan GC kanssa ja ilman toistumista perustuu hierarkkiseen klusterianalyysin (kuva 1).

HSA-miR-335 on paras Signature luokittelua GC ja ilman uusiutumisen harjoitussetti

käyttää ROC menetelmä analysoida herkkyys ja spesifisyys ehdokas biomarkkerit perustuu miRNA microarray data. Saimme 2 miRNA HSA-miR-335 ja HSA-miR-128b paras herkkyys ja spesifisyys luokittelussa GC näytteiden ja ilman toistumisen (kuvio 2, taulukko 3). Yhdessä FC arvo (FC _{HSA-miR-335 = 4,675; FC HSA-miR-128b = 1.453) kunkin biomarkkereiden, valitsemme HSA-miR-335 jatkotutkimuksiin.}

validointi Signature in testinäytteistä reaaliaikainen PCR

ekspressoitumistaso HSA-miR-335 havaittiin reaaliaikaisella PCR 64 testiä GC näytteitä verrataan Hyväksytty viereiseen kudokseen kontrollina. Tulokset osoittivat, että 26 tapauksessa uusiutui, 21 tapausta (21/26, 80,8%) oli korkea-ilmaistuna HSA-miR-335; ja 38 tapausta ilman toistuminen, 29 tapausta (29/38, 76,3%) oli alhainen ilmaistu HSA-miR-335 (kuva 3). Samat tulokset havaittiin verinäytteistä käyttäen sekoitettua-verinäytteen 20 ei-syöpäpotilasta ruoansulatuskanavan sairauksia kuten ohjaus: In 26 tapauksessa uusiutui, 19 tapausta (19/26, 73,1%) oli korkea-ilmaistuna HSA-miR -335; ja 38 tapausta ilman toistuminen, 30 tapausta (30/38, 78,9%) oli alhainen ilmaistu HSA-miR-335 (kuva 3). Oli 11 tapausta (11/64, 17,2%) ei vastinetta ekspressiotaso HSA-miR-335 verrattuna tulosten välillä jäädytetty ja verinäytteet.

Lisäksi olemme havainneet ekspressiotaso HSA-miR-128b 64 GC verinäytteissä käyttäen reaaliaikaista PCR. Tulokset osoittivat, että 26 tapauksessa uusiutui, 18 tapausta (18/26, 69,2%) oli korkea-ilmaistuna HSA-miR-128b; ja 38 tapausta ilman uusiutumisen 27 tapausta (27/38, 71,1%) oli alhainen ilmaistu HSA-miR-128b. FC arvo HSA-miR-128b ja HSA-miR-335 olivat 1,647 ja 3,589 verrattuna uusiutumista ei-toistuminen näytteet, vastaavasti (kuvio 4A). Olemme myös analysoineet herkkyys ja HSA-miR-335, HSA-miR-128b ja HSA-miR-335 /128b (yhdistettynä miR-335 ja miR-128b allekirjoituksena), joka perustuu reaaliaikaiseen PCR data. Tulokset osoittivat, että HSA-miR-335 oli herkempi ja täsmällisempi AUC-arvo 0,88 kuin HSA-miR-128b (AUC = 0,79) ja HSA-miR-335 /128b (AUC = 0,84) luokittelussa toistuminen ja ei- toistumisen näytteistä (kuvio 4B, taulukko 3).

HSA-miR-335 kuin taudin eteneminen allekirjoitus ennustaa uusiutuminen Risk in GC potilaat

74 GC potilaat jaettiin kahteen ryhmään, mukaan lukien 31 potilasta, joiden tauti uusiutui ryhmänä ja 43 potilasta ilman toistuminen ryhmänä. Potilaat, jotka kokivat toistumisen GC oli merkittävästi vähentynyt mediaani eloonjäämisaste ( P
< 0,001; Kuva 5A). Olemme havainneet ekspressiotasot HSA-miR-335 kaikissa 74 GC näytteitä. Merkittävä ero on havaittu kahdella ryhmällä, jotka ovat korkea-ilmaistuna HSA-miR-335 ryhmän ja matalan ilmaistuna HSA-miR-335 ryhmä seuraavasti: miR-335 (+) ja miR-375 (-). GC potilaiden (n = 35), jossa miR-335 (+) oli merkittävästi vähentynyt eloonjäämismediaani verrattuna (n = 39), jossa miR-375 (-) ( P
< 0,001; kuvio 5B).

signalointireittiä ja Gene ontologia analyysit HSA-miR-335 Kohdennettu Genes

tutkiakseen mahdollisen sääntelyn mekanismeja HSA-miR-335 prosessissa GC toistuminen, käytimme bioinformatiikan tietokanta valita uskottava tavoitteisiin tämän miRNA. Yhteensä 255 geenit ennustaa kohdegeenien HSA-miR-335. Signalointireitin analyysit osoittivat, että suurin osa kohdistettujen geenien, jotka säätelevät HSA-miR-335 oli mukana samassa reittejä, kuten p53, MAPK: n, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-kaltainen reseptori, fokaalisen adheesion ( Taulukko 4, kuvio 6). Olemme ehdottaneet, että nämä useita koulutusjakson muutokset saattavat olla mukana kliinisessä patologisia piirteitä ja potilaiden tuloksista GC. Samalla olemme käytetty integroitu geeni ontologian tietokanta käsinkirjoittaa molekyylitason toimintaa miRNA kohdennettujen geenien. Tulokset osoittivat, että geenit säätelevät HSA-miR-335 osallistui useimmat tärkeät biologisen prosessin liittyvät ihmisen syöpään (taulukko 5).

Keskustelu

uusiutuminen on yleistä GC potilailla leikkauksen jälkeen; Siksi on tärkeää tunnistaa tapaukset, joilla on korkea toistumisen riskiä. Perinteiset klinikka patologiset tekijät ovat toisinaan riittämättömiä ennustamiseksi uusiutumisen yksilöiden ja monet tutkimusryhmät ovat yrittäneet tunnistaa biomarkkerit käyttämällä uusia teknologioita, jotka voivat erottaa nämä korkean riskin tapauksissa. Useat viimeaikaiset tutkimukset ovat dokumentoitu miRNA muutoksia, jotka ovat mukana aloittamisesta ja etenemisessä ihmisen syövissä. miRNA ilmentymisen profilointi ihmisen kasvaimia on tunnistettu ilmaus allekirjoituksia liittyy diagnoosi, lavastus, eteneminen, ennusteen ja hoitovasteen mukaan.

Tässä tutkimuksessa kartoitettiin ensisijainen GC tapauksia, jotta voidaan ennustaa sairauden uusiutumisen ja määritelty kertaluonteisten tapauksissa kuin vapaita GC vähintään yhden vuoden ajan parantava resektio. Havaitsimme HSA-miR-335 uskottavana ennuste allekirjoitus GC perusteella microarray tietojen 10 GC näytteiden opetusjoukolla. Lisäksi me validoitu tämä allekirjoitus 64 testinäytteet enemmän kuin keskimäärin 85% herkkyys ja spesifisyys. Selviytymisen analyysit Tulokset osoittivat, että potilailla, joilla on korkeat ekspressiotasot HSA-miR-335 oli vähentänyt yleistä eloonjäämisaste verrattuna niihin, joilla on alhainen ekspressiotasot HSA-miR-335. Nämä tulokset osoittavat, että tämä allekirjoitus oli potentiaalia ennustaa toistumisen GC.

Microarray tekniikka on kehittynyt merkittävästi ja tullut laaja ja hyödyllinen tapa auttaa meitä paremmin ymmärtää syövistä [22]. Se on nyt laajalti käytetty tutkimaan toiminnallinen roolit miRNA monissa syöpätyypit [23], jossa on useita merkittäviä miRNA vaikutuksia onkogeenien ja tuumorisuppressorigeeneille tunnistettu. Niistä 12 miRNA tunnistettu tässä tutkimuksessa, HSA-miR-373 oli yksi alassäädetty miRNA on toistuva ryhmä. Tämä voi olla onkogeeni toimiva kautta tunnetun p53-reitin, joka on osallisena karsinogeneesissä [24]. Joissakin miRNA, kuten HSA-miR-19a: n ja HSA-miR-32, on sijoitettu syöpään liittyvän genomisen alueilla, jotka saattavat olla mukana maligniteettien kautta poistetaan, vahvistus tai epigeneettisiä muutoksia mekanismien [25]. Lisäksi HSA-miR-429 oli säädelty vahvistavasti toistuvia tapauksissa ja aihekokonaisuuksien kromosomissa 1, jossa vahvistetaan, että jotkin miRNA kuten HSA-miR-200B kanssa klusteroituja HSA-miR-429 ja voivat tehdä yhteistyötä säädellä kohdistettuja geenit [26 ].

tähän saakka miRNA nimetty tässä tutkimuksessa ennustaa riskiä GC toistuminen ei ole hyvin karakterisoitu. HSA-miR-335, joka transkriboidaan genomin alueella kromosomissa 7q32.2, on raportoitu ero ilmaistaan ​​hyvänlaatuisia ja pahanlaatuisia kasvaimia [27]. Tärkeää on, että on myös osoitettu, että miR-335 säätelee RB1 ja valvontaa soluproliferaation p53-riippuvaisella tavalla [28]; osallistuu rintasyövän kehittymiseen [29]; säätelee kasvua ja invaasiota pahanlaatuisten solujen [30]. Uusin tutkimus kertoo, että miR-335 voisi toimia etäpesäke vaimennin GC kohdistamalla Bcl-2 ja SP1, ja voitaisiin kehittää edelleen mahdollisena ennustetekijä [31]. Yhteenvetona näkemykset edellä, toiminta miR-335 oli kiistanalainen. Tuloksemme osoittavat, että HSA-miR-335 oli säädelty vahvistavasti GC toistuminen näytteitä ja mukana useimmissa onkogeenisel- signalointireittien, kuten p53, MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-like-reseptori, fokaalisen adheesion . Nämä useat signaalireitin muutoksia, erityisesti mukaan lukien p53-reitin, voidaan kohtuudella vaikuttaa kliinisen tuloksen mukaan lukien GC uusiutumisen riski [32]. Vaikka ennustetekijöiden rooli HSA-miR-335 mahasyövän on tuntematon, meidän havainnot ovat rohkaisevia.

Veri on helpoimmin näyte sairaaloissa. Kliininen merkitys tunnistaminen biomarkkereita, jotka voitaisiin helposti havaita yhtä HSA-miR-335 on tietenkin. Lisäksi arkistoidaan parafinoidut yksilöt ovat myös yksi helposti saatavilla olevista materiaaleista sairaaloissa, jotka pidetään usein hyvin dokumentoituja kliinis tiedot. Ne edustavat erinomaisia ​​lähteitä oiresovellutusta sekä perustutkimuksen ja kliiniset tutkimukset. miRNA kooltaan 19-25 nt ja ne on suojattu RNA aiheuttama hiljentäminen kompleksi, joka voi tehdä niistä vähemmän alttiita RNA: n hajoamisen verrattuna mRNA näissä kudoksissa [33]. Siten pystyimme havaitsemaan miRNA ilmentymisen parafinoidut näytteet ja keskittyi järjestelmälliseen analyysiin käyttämällä tätä allekirjoitusta varten asiaan ennusteen arvioinnissa. PCR-pohjainen luokitus menetelmä siksi, näyttää meille tavalla, käyttäen helposti saatavilla kliinisistä näytteistä, ennustaa taudin uusiutumisen.

Yhteenvetona olemme tunnistaneet prognoosi liittyvä miRNA joka voi ennustaa toistumisen riskiä GC potilailla. Yhdistämällä tämä allekirjoitus tavanomaisten ennusteeseen viittaavia tekijöitä, meidän pitäisi pystyä ennustamaan potilaan tauti tulos tarkemmin. Lisäksi tunnistaminen korkean riskin potilailla johtaisi huomioon muun terapeuttisen intervention ja voi siten ilmoittaa lääkärille paremman seurannan ohjelma.

Kiitokset

Kiitämme tohtori Li Wang (National Institute of Environmental Health Sciences, USA) oivalluksia kommentteja ja käsikirjoitus editointi.

• PLoS ONE: Vähentynyt ilmentyminen ARID1A Gene liittyy huonon ennusteen Ensisijainen mahasyövän
• PLoS ONE: Clinical Mahdolliset DNA Metylointi mahasyövän: Meta-analyysi